2个与大黄鱼快速生长相关的微卫星标记及其制备方法，涉及大黄鱼分子育种。所述2个与大黄鱼快速生长相关的微卫星标记为LYC0088和LYC0143，所述LYC0088的引物序列如SEQUENCE?LISTING?1和SEQUENCE?LISTING?2所示，所述LYC0143的引物序列如SEQUENCE?LISTING?3和SEQUENCE?LISTING?4所示。1）快速生长微卫星标记筛选；2）快长微卫星标记的初步验证；3）再次验证。所述2个与大黄鱼快速生长相关的微卫星标记可在大黄鱼体长、体高和体质量选择育种中和在大黄鱼快速生长微卫星标记筛选中应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及大黄鱼分子育种，尤其是涉及。
技术介绍
大黄鱼是我国重要的海水养殖鱼类，自1987年突破人工繁殖以来，大黄鱼养殖规模和范围不断扩大，至2010年，已形成年产8.6万吨，产值约65亿元的产业。但随之而来的种质退化、生长减缓、病害频发等问题也日益严重，因此亟待对大黄鱼进行遗传改良。集美大学、宁德市水产技术推广站等单位在各类项目的资助下，从“十五”期间开展大黄鱼的人工选育技术，至“十一五”末通过选择育种结合雌核发育技术培育出大黄鱼的第I个品种“闽优I号”，该品种生长速度提高23.9%，成活率提高13.7%，“闽优I号”选育的成功对于提升大黄鱼产业起到良好的促进作用。然而，“闽优I号”的选育历经10年五代时间，费时费力，主要原因是常规的选育是根据性状的表型而不是基因型进行选择，对目标性状缺乏预选手段，育种周期长、效率低。现代分子生物学技术的发展，使直接根据与性状相关的基因或分子标记进行选择成为可能。分子标记有广义和狭义之分，广义的分子标记是指遗传的并可检测的DNA序列或蛋白；狭义的分子标记是指能反映生物个体或种群间基因组中某种差异的特异性DNA片段。分子标记由于不受发育阶段、不同组织的影响，能够在早期实现快速、准确的选择，大大缩短育种周期。迄今为止，发展起来的分子标记主要有以RFLP为代表的第一代分子标记，以微卫星为代表的第二代分子标记和以SNP为代表的第三代分子标记(刘云国(主编)，刘贤德，高焕,李朝霞,杜常青(副主编)，水产生物DNA分子标记技术,北京:科学出版社，2009 ;鲍宝龙，王志勇，张士璀等，水产基因组学技术.北京:化学工业出版社，2011)。第一代RFLP标记由于检测步骤过于繁琐现已淘汰，第三代分子标记对检测手段要求较高，常规实验室大多还没有这个条件，因而目前在水产方面的应用还不是很多。微卫星作为第二代分子标记，由于具有容易检测、多态性高、重复性好、共显性遗传等特点，在水产生物遗传图谱构建、亲缘关系剖分、遗传参数估计、生长或抗逆标记筛查等研究中得到了广泛地应用(叶华，大黄鱼SSR遗传连锁图谱的构建及生长相关性状的QTL定位.湖南农业大学博士学位论文，2010 ;Liu，X.D.，Zhao，G.T.，Wang, Z.Y.，Caij M.Y.，Yej H.，Wang, Q.R.，Parentage assignment and parentalcontribution analysis in large yellow croaker (Larimichthys crocea)usingmicrosatellite markers.Current Zoology,2012，58:244-249 ； Liu，X.，Zhao, G.T.，CaijM.Y.，Wang, Z.，Estimated genetic parameters for growth-related traitsin large yellow croaker Larimichthys crocea using microsatellites to assignparentage .Journal of fish biology，2013，82:34-41)，如:薛良义等(薛良义，孙升，肖章奎，杨巧一，叶放，童丽娟，大黄鱼肌肉生长抑制素基因微卫星序列多态性分析.中国生物化学与分子生物学报，2008,24:980-985)研究了大黄鱼肌肉生长抑制素基因3’端非编码区微卫星序列多态性与体长、体质量的关系，发现微卫星序列长度与大黄鱼体长、体质量之间的相关系数没有达到显著水平(P>0.05);高国强等(高国强，常玉梅，韩启霞，池炳杰，李明云，薛良义，梁利群，大黄鱼耐低温性状相关微卫星标记的筛选.遗传，2010，32 =248-253)进行了大黄鱼耐低温标记的筛选，找到一个标记(LYC0002)可能与耐低温有关；刘贤德等(刘贤德，韦信键，蔡明夷，刘洋，王志勇，大黄鱼22个微卫星标记在F1家系中的分离方式及与生长性状的相关分析.水产学报，2012，36:1322-1329)研究了 I个大黄鱼F1家系150个个体22个微卫星位点的基因型分布，并分析了标记位点与生长性状的相关性，结果得出LYC0077位点与体质量、体长和体高均呈显著相关(P〈0.05)、LYCOO15和LYC0243与体高呈显著相关(P〈0.05)，对体长、体质量的影响不显著(P>0.05)。以上研究都是基于一个群体的研究，对其在其他群体的通用性如何，没有进行系统研究。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供。所述2个与大黄鱼快速生长相关的微卫星标记为LYC0088和LYC0143，所述LYC0088 的引物序列如 SEQUENCE LISTING I 和 SEQUENCE LISTING 2 所示，所述 LYCO143 的引物序列如 SEQUENCE LISTING 3 和 SEQUENCE LISTING 4 所示；在 LYC0088 和 LYC0143 位点，按照扩增产物从小到大的顺序，对生长有利的基因型均为AB，基因型组合为AB/AB。所述2个与大黄鱼快速生长相关的微卫星标记的制备方法包括以下步骤:I)快速生长微卫星标记筛选:从I个全同胞家系中选出体质量最大的30尾和最小的30尾，测定体长、体高和体质量，提取基因组DNA，以选定的标记进行基因分型，根据个体基因型的分析结果结合个体体长、体高和体质量数据，应用方差分析或者t检验的方法，筛选与体长、体高和体质量相关 的微卫星标记，最后得出LYC0143、LYC0088与大黄鱼体长、体高和体质量均相关极显著(P〈0.01), LYC0200与体长相关显著(P〈0.05)；在步骤I)中，所述全同胞家系的家系数量超过200尾；所述以选定的标记进行基因分型，可选定32个微卫星标记进行基因分型，其中微卫星引物序列见附表SEQUENCELISTING I SEQUENCE LISTING 64。2)快长微卫星标记的初步验证:为确保所获标记的有效性，将筛选到的标记在同一家系更多的个体中进行初步验证，从所述同一家系余下的个体中选择60个体质量值居中的个体，针对筛选到的微卫星标记进行基因分型后，与步骤I)标记筛选所用数据合并在一起进行分析，检测是否还存在相关性，最终得出位点LYC0088和LYC0143与体长、体高、体质量相关均极显著(P〈0.01)；3)再次验证:对在家系扩大验证后依然存在相关性的标记，在群体(与步骤1，2所用材料不同)中进行进一步验证，从群体中选出体质量最大的30尾和最小的30尾，对步骤I)和步骤2)筛选到的标记(即LYC0088和LYC0143)进行基因分型后，结合体长、体高和体质量数据进行验证分析，经再次验证，LYC0088、LYC0143与生长性状仍存在紧密相关性，其中LYC0088与体高、体质量均相关极显著(P〈0.01)，与体长相关显著(？〈0.05)，LYCO143与体长和体质量相关显著(P〈0.05)，与体高相关性极显著(P〈0.01)。在步骤3)中，所述群体的数量超过200尾。所述2个与大黄鱼快速生长相关的微卫星标记可在大黄鱼体长、体高和体质量选择育种中和在大黄鱼快速生长微卫星标记筛本文档来自技高网...
【技术保护点】
2个与大黄鱼快速生长相关的微卫星标记，其特征在于为LYC0088和LYC0143，所述LYC0088的引物序列如SEQUENCE?LISTING?1和SEQUENCE?LISTING?2所示，所述LYC0143的引物序列如SEQUENCE?LISTING?3和SEQUENCE?LISTING?4所示；在LYC0088和LYC0143位点，按照扩增产物从小到大的顺序，对生长有利的基因型均为AB，基因型组合为AB/AB。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘贤德，王志勇，隋班良，蔡明夷，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：
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