【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及姬松茸SSR分子标记、其制备方法及在鉴别姬松茸菌株上的应用方法。
技术介绍
姬松鸾拉丁学名Agaricus blazei Murri77，是一种珍稀食药用菌,它在真菌分类学上属于担了菌门、伞菌目、蘑菇科、蘑菇属，原产于美国、巴西等地，人工栽培始于日本。1992年，福建省农林科学院食用菌中心引进了该菌种，并在国内首次栽培成功(江枝和1993)，而后推广到全国各地。该菇不仅味道鲜美、营养丰富，而目具有降血压和抗癌的食疗功效(戴玉成和杨祝良2008 ；Dai et al.2009 )。考虑到该菇的价值极高，自2001年起，我们利用Co6tl辐射诱变筛选姬松茸突变株并获得一些具有一定程度性状改变的菌株(江枝和等2003 ;江枝和等2004 ;翁伯琦等2007)，并予推广。微卫星(microsatellite)序列，又称为简单序列重复(simplesequence repeat,SSR)，是以少数几个核苷酸(一般2-4个)为重复单位的串联重复DNA序列。它均匀、随机、广泛地分布于真核生物基因组中，且 同种生物中微卫星序列的两侧顺序常较保守，其特异性引物扩增具...
【技术保护点】
姬松茸SSR分子标记，其特征在于：该分子标记引物的序列如下①引物A?5’?CTCTCTCTTCCATCATCCTCT?3’和5’?CGCCAGTTGTGCACAT?3’；?②引物B?5’?CGCATCTTGGGCTCCTT?3’和5’?GGGGAAGCACGATCGTT?3’；?③引物C?5’?CTCCCTATGACCAACAGCA?3’和5’?CCCCACGGATTGCC?3’；④引物D?5’?CCGCACTCTCCTCCAGTT?3’和5’?GTGAGTCTGT?GTGTGTGTGAGT?3’。
【技术特征摘要】
1.姬松茸SSR分子标记，其特征在于:该分子标记引物的序列如下①引物 A 5， -CTCTCTCTTCCATCATCCTCT-3’ 和 5， -CGCCAGTTGTGCACAT-3，； ②引物 B 5， -CGCATCTTGGGCTCCTT-3，和 5， -GGGGAAGCACGATCGTT-3’ ； ③引物 C 5，-CTCCCTATGACCAACAGCA-3’ 和 5，-CCCCACGGATTGCC-3，；④引物 D.5’ -CCGCACTCTCCTCCAGTT-3’ 和 5’ -GTGAGTCTGT GTGTGTGTGAGT-3 ’。2.根据权利要求1所述的姬松茸SSR分子标记的制备方法，其特征在于:其包括以下步骤， ⑴、CTAB法提取姬松茸基因组DNA:①、称取0.1g姬松茸Co6°辐射诱变菌株J2 J66的菌丝或子实体，用去离子水冲洗干净后，迅速转入1.5ml离心管中、加入液氮，迅速用电钻捣碎，后加入600mlCTAB并于65°C水浴lh，并每20min反转摇匀一次、加入等体积调制的氯仿-异戊醇，使步骤(I)②获得的溶液与氯仿-异戊醇体积比24:1，颠倒混匀后，于12000rpm离心6min，取上清液于新管中、向上清液中加入其2倍体积的无水乙醇或其2/3体积的异丙醇，于_20°C放置20min 、步骤(I)④的溶液于12000rpm离心6min，去上清液后，加入75%乙醇清洗DNA于12000rpm离心2min后，再次去上清液； 、将步骤(I) ⑤制得的DNA风干后加入50 ill的TE缓冲液； ⑵、利用链霉素磁珠富集与生物素标记的探针杂交的技术分离姬松茸基因组DNA的SSR微卫星序列并对其测序； ⑶、针对姬松茸基因组DNA的SSR微卫星序列进行引物设计，并用引物姬松茸基因组DNA进行PCR扩增，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳获得的电泳图检测菌株扩增出的特异条带，从而筛选出能够通过扩增出的特异条带进行姬松茸菌株鉴别的SSR分子标记引物:①引物 A 5，-CTCTCTCTTCCATCATCCTCT-3，和 5，-CGCCAGTTGTGCACAT-3 ’ ；②引物 B 5， -CGCATCTTGGGCTCCTT-3’ 和 5， -GGGGAAGCACGATCGTT-3，； ③引物 C 5’...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘朋虎，陈坚，肖淑霞，陈爱华，颜孙安，翁伯琦，雷锦桂，王义祥，郑少玲，江枝和，
申请(专利权)人：福建省农业科学院土壤肥料研究所，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。