一种具有肿瘤细胞抑制功能的多核苷酸制造技术

本发明专利技术涉及一种具有肿瘤细胞抑制功能的多核苷酸。首次发现来自C/EBPβ基因的3’非翻译区的多核苷酸片段能够独立地行使抑制肿瘤细胞的功能，且这一抑制功能的发挥不需要C/EBPβmRNA的其它部分的参与。本发明专利技术的多核苷酸在新型抗癌药物的开发方面具有应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物制药领域；更具体地，本专利技术涉及一种具有肿瘤细胞抑制功能的多核苷酸。
技术介绍
真核生物mRNA的3’非翻译区(UTR)是重要的调控区域，控制着该mRNA所携带的基因信息表达为功能蛋白质的许多重要阶段。但是，在2010年11月之前，对于高等真核生物细胞中是否有单独的、脱离mRNA其它部分的3’UTR RNA存在，以及如果存在，它们有什么功能，国际科学界仍不清楚(Mercer TR, Wilhelm D, Dinger ME, Solda G,Korbie DJ,GlazovEA,et al.,Expression of distinct RNAs from SjUntranslated regions.Nucleic AcidsRes.2011 Mar ；39(6):2393-403.Epub 2010 Nov 12)。本专利技术人早在1991-1992年间就已发现，人白介素6核转录因子(后称为C/EBP β )基因mRNA的3’UTR，在单独导入恶性细胞时，能表现肿瘤抑制功能，即抑制恶性细胞的生长增殖[刘定干、野田亮、王达、陈珍珍、井川洋二、李载平，具有抗癌基因活性的一个cDNA克隆，中国科学1991 ；7 =730-737 ;刘定干、朱丽华、陈珍珍、野田亮、郭礼和、李载平，具有抗癌基因活性的一个cDNA克隆的核苷酸序列，生物化学与生物物理学报1991 ；23(3):246-249;刘定干、审良静男、岸本忠三、李载平，回复系RR中一种与回复相关的蛋白表达增强，中国科学1995 ；25(4):372-378]。之后长期的研究表明，该3’ UTR的肿瘤抑制功能具有普遍性，对于来自小鼠的恶性DT细胞(用癌基因Ras恶性转化NIH/3T3细胞而得)和来自人的 SMMC-7Ding-Gan Liu, Qiu-Hong Jiang, Yun-Yi Wei, Li Sun, Be1-Bei Fu,Fu-Kun Zhao, Qiong Zhou.Gene expression profile favoring phenotypic reversion:a clue for mechanism of tumor suppression by NF-1L6 SjUTR.Cell research(2003)；13(6):509-514等肿瘤细胞均具有显著的抑制作用。进一步的研究揭示，该3’UTR的肿瘤抑制功能的分子机制是通过与细胞癌基因蛋白一一蛋白激酶C ε的物理结合，抑制蛋白激酶 C ε 的憐酸化活力[Ying Wang, Da-Quan Sun, Ding-Gan Liu, Tumor Suppression byRNA from C/EBP β SjUTR through the Inhibition of Protein Kinase Ce Activity,PLoSONE January 2011|Volume 6|Issue l|el6543]。尽管全长C/EBP β基因3’ UTR的抗肿瘤功能已有较深入的研究，但其作为一种长度在280多个碱基的片段在应用上是受到限制的，而更短的片段在合成上具有更大的优势。但是，C/ΕΒΡβ基因3’UTR区域的较小片段是否独立地发挥作用，且怎样的片段能够发挥作用却仍然是不清楚的。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种具有肿瘤细胞抑制功能的多核苷酸。在本专利技术的第一方面，提供一种分离的多核苷酸，其选自:(a)核苷酸序列如 SEQ ID NO:1所示的核糖核酸；(b)核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示的脱氧核糖核酸；(c)在严格条件下能够与(a)或(b)限定的核苷酸序列杂交且具有抑制肿瘤功能的多核苷酸；(d)与(a)或(b)限定的核苷酸序列有70%以上(优选80%以上，更优选90%以上，更优选95%以上，更优选98%以上)相同性(同源性)且具有抑制肿瘤功能的多核苷酸；(e)将(a)或(b)限定的核苷酸序列经过一个或多个(如1_5个；较佳地1_4个；更佳地1-3个；更佳地1-2个)碱基的取代、缺失或添加而形成的，且具有抑制肿瘤功能的多核苷酸；或(f)核苷酸序列与(a)-(e)任一限定的多核苷酸序列互补(较佳地，为完全互补)的多核苷酸。在另一优选例中，所述的多核苷酸是天然分离的，或是人工合成的。在另一优选例中，所述的多核苷酸长度在40_100bp ;较佳地长度在50_80bp ;较佳地在 55-70bp。在本专利技术的另一方面，提供一种构建物，其中包括:表达调控元件，以及与之操作性连接的所述的多核苷酸，且该多核苷酸是脱氧核糖核酸。在另一优选例中，所述的表达调控元件包括(但不限于):启动子，终止子。在另一优选例中，所述的构建物用于转化细胞，在细胞内表达与所述的脱氧核糖核酸相应的核糖核酸。在另一优选例中，所述的启动子带有RNA聚合酶的识别和/或结合位点。在另一优选例中，所述的启动子是驱动合成与其下游的DNA互补的RNA的启动子。在另一优选例中，所述的启动子是SP6启动子。在另一优选例中，所述的构建物是表达载体；较佳地，是真核表达载体。在本专利技术的另一方面，提供所述的多核苷酸或所述的构建物的用途，用于制备抑制肿瘤的药物。在另一优选例中，所述的药物还用于诱导肿瘤细胞凋亡。在另一优选例中，所述的药物还用于使得细胞的细胞周期停滞于G2/M期。在另一优选例中，，所述的肿瘤是肝癌。在本专利技术的另一方面，提供一种药物组合物，其包括:(有效量的，如按照重量0.0001% 10% )所述的多核苷酸或所述的构建物；以及药学上可接受的载体。在另一优选例中，所述的药物组合物用于抑制肿瘤。在本专利技术的另一方面，提供一种制备药物组合物的方法，其包括:将(有效量的，如按照重量0.0001% 10% )所述的多核苷酸或所述的构建物与药学上可接受的载体混口 O在本专利技术的另一方面，提供一种抑制肿瘤细胞的方法，包括:给予肿瘤细胞(有效量的，如按照重量0.0001% 10% )所述的多核苷酸或所述的构建物。在另一优选例中，所述的抑制肿瘤细胞的方法是体外的、非治疗性的方法(如针对离体肿瘤细胞)。本专利技术的其它方 面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。附图说明图1、各种RNA转染对人肝癌细胞系SMMC-7721生长的影响。图2、转染R62影响SMMC-7721细胞的形态。A，未转染。B，转染后。图3各种RNA转染的SMMC-7721细胞的流式细胞仪分析结果。图4、转染各试剂的SMMC-7721细胞的二维流式细胞仪分析。凋亡细胞集中在离原点最远处。a, SMMC-7721 ；b，单用转染试剂的转染；C，用凋亡促进剂的转染；d, R104 转染；e, R282 的转染；f，R62 的转染。具体实施例方式本专利技术人经过深入的研究，意外地发现来自C/ΕΒΡβ (又称白介素6核转录因子，NF-1L6)基因的3’非翻译区的多核苷酸片段能够独立地行使抑制肿瘤细胞的功能，且这一抑制功能的发挥不需要C/EBP PmRNA的其它部分(包括3’UTR的其他部分)的参与。在此基础上完成了本专利技术。术语如本文所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多核苷酸，其选自：(a)核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示的核糖核酸；(b)核苷酸序列如SEQ?ID?NO：4所示的脱氧核糖核酸；(c)在严格条件下能够与(a)或(b)限定的核苷酸序列杂交且具有抑制肿瘤功能的多核苷酸；(d)与(a)或(b)限定的核苷酸序列有70％以上相同性且具有抑制肿瘤功能的多核苷酸；(e)将(a)或(b)限定的核苷酸序列经过一个或多个碱基的取代、缺失或添加而形成的，且具有抑制肿瘤功能的多核苷酸；或(f)核苷酸序列与(a)?(e)任一限定的多核苷酸序列互补的多核苷酸。

【技术特征摘要】
1.一种分离的多核苷酸,其选自: (a)核苷酸序列如SEQID NO:1所示的核糖核酸； (b)核苷酸序列如SEQID NO:4所示的脱氧核糖核酸； (c)在严格条件下能够与(a)或(b)限定的核苷酸序列杂交且具有抑制肿瘤功能的多核苷酸； (d)与(a)或(b)限定的核苷酸序列有70%以上相同性且具有抑制肿瘤功能的多核苷酸； (e)将(a)或(b)限定的核苷酸序列经过一个或多个碱基的取代、缺失或添加而形成的，且具有抑制肿瘤功能的多核苷酸；或 (f)核苷酸序列与(a)-(e)任一限定的多核苷酸序列互补的多核苷酸。2.—种构建物，其中包括:表达调控元件，以及与之操作性连接的权利要求1所述的多核苷酸，且该多核苷酸是脱氧核糖核酸。3.如权利要求2所述的构建物,其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘定干，孙达权，王莹，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：