一种用于调高PTEN基因表达的多肽复合物的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种用于调高PTEN基因表达的多肽复合物的制备方法，该方法包括步骤：（1）制备聚合物颗粒，所述聚合物为PLA或PCL；所述聚合物颗粒中包埋有质量分数为0.5‑0.8%的雷公藤甲素；（2）将步骤（1）所得颗粒与多肽混合，所述多肽的序列如SEQ ID NO.1所示；所述颗粒的粒径为1‑3μm，所述颗粒与多肽的质量比为1000‑5000:1。本发明专利技术可以显著的调高PTEN的表达，可以有效的实现抑瘤效果；本发明专利技术对药物的使用量很小，可大幅度的降低药物的相关副作用。

Preparation method of polypeptide complex for regulating expression of PTEN gene

The present invention provides a method for the preparation of peptide complexes increase PTEN gene expression, the method comprises the following steps: (1) the preparation of polymer particles, the polymer is PLA or PCL; the polymer particles embedded in a mass fraction of 0.5 0.8% triptolide; (2) step (1) of the particles and mixed polypeptide sequence of the polypeptide, as shown in SEQ ID NO.1; the particle size is 1 3 m, the mass of the particle and the ratio of 1000 5000:1 polypeptide. The invention can remarkably raise the expression of PTEN, and can effectively realize the anti-tumor effect; the invention has small amount of use of the medicine, and can greatly reduce the related side effects of the medicine.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因表达调控领域，具体涉及一种用于调高PTEN基因表达的多肽复合物的制备方法。
技术介绍
PTEN是第一个同时兼具脂质和蛋白双特异性磷酸酶活性的抑癌基因，于1997年从人类第10q23.3染色体位点分离并得到，可参与细胞周期调控并抑制肿瘤细胞增殖及促进肿瘤细胞凋亡。在研究新的抗癌药物时，可以其是否可以调高PTEN的表达来进行。目前，在研究可以调高PTEN表达的试剂或者组合物领域中，多直接将各组分直接进行混合，不仅效率较低，而且不利于实际应用。另一方面，据专利技术所知，目前尚未发现设计特定多肽来实现调控PTEN表达的报道。
技术实现思路
根据本领域的需求和现有技术的缺点和技术空白，本专利技术的目的在于提供一种用于调高PTEN基因表达的多肽复合物的制备方法，所述方法为：（1）制备聚合物颗粒，所述聚合物为PLA或PCL；所述聚合物颗粒中包埋有质量分数为0.5-0.8%的雷公藤甲素；（2）将步骤（1）所得颗粒与多肽混合，所述多肽的序列如SEQIDNO.1所示；所述颗粒的粒径为1-3μm，所述颗粒与多肽的质量比为1000-5000:1。专利技术人发现，当将本专利技术所述的多肽与本专利技术所述聚合物颗粒混合时，可以显著的调高PTEN的表达。本专利技术所述聚合物颗粒中的雷公藤甲素可以缓慢的释放，且包埋量仅需0.5-0.8%。值得说明的是，本专利技术所用的聚合物具有很好生物相容性，所制备得到的复合物可以直接注射至肿瘤部位。专利技术人还发现，当不包埋雷公藤甲素时，对PETN几乎不产生调控作用。其中的机制还需进一步的研究。优选的，步骤（1）中，雷公藤甲素的质量分数为0.55%。优选的，所述颗粒与多肽的质量比为2000-4000:1。更优选的，所述颗粒与多肽的质量比为3500:1。所述聚合物为聚乳酸（PLA）。优选的，所述PLA的分子量为5000-8000。更优选的，所述PLA的分子量为6000。当PLA的分子量如上述范围时，在制备颗粒时较为容易且粒径较为可控；当分子量为6000时最好。本专利技术的有益效果：1、本专利技术可以显著的调高PTEN的表达，可以有效的实现抑瘤效果；2、本专利技术对药物的使用量很小，可大幅度的降低药物的相关副作用。具体实施方式下面通过实施例对本专利技术进行具体描述，有必要在此指出的是以下实施例只是用于对本专利技术进行进一步的说明，不能理解为对本专利技术保护范围的限制，该领域的技术熟练人员根据上述
技术实现思路
所做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本专利技术的保护范围。实施例1（1）制备聚合物颗粒，所述聚合物为PLA（分子量为6000）；所述聚合物颗粒中包埋有质量分数为0.55%的雷公藤甲素；（2）将步骤（1）所得颗粒与多肽混合，所述多肽的序列如SEQIDNO.1所示；所述颗粒的粒径为1-3μm，所述颗粒与多肽的质量比为3500:1。实施例2（1）制备聚合物颗粒，所述聚合物为PLA（分子量为5000）；所述聚合物颗粒中包埋有质量分数为0.8%的雷公藤甲素；（2）将步骤（1）所得颗粒与多肽混合，所述多肽的序列如SEQIDNO.1所示；所述颗粒的粒径为1-3μm，所述颗粒与多肽的质量比为5000:1。实施例3（1）制备聚合物颗粒，所述聚合物为PLA（分子量为8000）；所述聚合物颗粒中包埋有质量分数为0.5%的雷公藤甲素；（2）将步骤（1）所得颗粒与多肽混合，所述多肽的序列如SEQIDNO.1所示；所述颗粒的粒径为1-3μm，所述颗粒与多肽的质量比为1000:1。实施例4（1）制备聚合物颗粒，所述聚合物为PCL（分子量为5000）；所述聚合物颗粒中包埋有质量分数为0.6%的雷公藤甲素；（2）将步骤（1）所得颗粒与多肽混合，所述多肽的序列如SEQIDNO.1所示；所述颗粒的粒径为1-3μm，所述颗粒与多肽的质量比为3000:1。实验例取对数生长期Lewis肺癌细胞，胰酶消化后离心收集细胞（1800r/min离心5min），用无血清DMEM培养基重悬洗涤并调整细胞浓度为1×107个/mL，用1mL注射器吸取细胞悬液0.2mL（含细胞数2×106个）注射于C57BL/6小鼠左侧腋部皮下，建立小鼠皮下移植瘤动物模型。接种10d后，检测小鼠成瘤状况，将符合要求的成瘤小鼠分为实验组和对照组，各组均在接种10d后晨起空腹给药。①对照组：0.2mL/10g0.9%氯化钠溶液灌胃10d，并分别在第1、3、5天腹腔注射0.9%氯化钠溶液0.4mL；②实验组（实施例1-4）：0.02g·复合物/10g灌胃10d，并分别在第1、3、5天腹腔注射0.4mL；称取瘤质量，计算抑瘤率给药第11天处死小鼠，完整剥取腋部皮下肿瘤组织，精密电子天平称重，分别计算各组抑瘤率，抑瘤率（%）=（对照组平均瘤质量-实验组平均瘤质量/对照组平均瘤质量）×100%。Westernblot法检测肿瘤组织PTEN蛋白表达剪取肿瘤组织约0.1g，加入RIPA细胞裂解液1mL（内含1mmol/LPMSF）进行裂解，离心收集组织总蛋白样品。经SDS-PAGE凝胶电泳分离蛋白组分，将蛋白转印于PVDF膜上，5%脱脂奶粉封闭2h，加入一抗（PTEN：500倍稀释）4℃孵育过夜，再加入HRP标记的二抗（1∶10000比例稀释），室温封闭2h，洗涤干净，ECL显色后胶片曝光并用ImageJ软件分析结果。称取肿瘤组织0.1g液氮研磨，加入1mLTrizol提取总RNA。根据RevertAidTMfirstStrandcDNASynthesisKit试剂盒逆转录成cDNA，以此cDNA作为荧光定量模板，按照特定的反应体系和反应条件进行扩增，引物序列是Forwardprimer5’-TTTGGTCACCCTTTGAGTCC-3’，Reverseprimer5’-GCTTTTACCTAGGGGGCAAG-3’，以β-actin作为内参，RelativeQuantificationStudy为分析方法，最终计算取2-△△Ct。实验结果如表1和表2所示。表1抑瘤率实施例1实施例2实施例3实施例4对比实施例1对比实施例2抑瘤率（%）66.159.462.268.49.75.5表2PTEN蛋白、PTENmRNA的表达实施例1实施例2实施例3实施例4对照组PTEN蛋白2.152.112.031.830.23PTENmRNA3.633.573.353.561.05序列表SEQIDNO.1YKKQQCRRCRYRR本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于调高PTEN基因表达的多肽复合物的制备方法，其特征在于，所述方法为：（1）制备聚合物颗粒，所述聚合物为PLA或PCL；所述聚合物颗粒中包埋有质量分数为0.5‑0.8%的雷公藤甲素；（2）将步骤（1）所得颗粒与多肽混合，所述多肽的序列如SEQ ID NO.1所示；所述颗粒的粒径为1‑3μm，所述颗粒与多肽的质量比为1000‑5000:1。

【技术特征摘要】
1.一种用于调高PTEN基因表达的多肽复合物的制备方法，其特征在于，所述方法为：（1）制备聚合物颗粒，所述聚合物为PLA或PCL；所述聚合物颗粒中包埋有质量分数为0.5-0.8%的雷公藤甲素；（2）将步骤（1）所得颗粒与多肽混合，所述多肽的序列如SEQIDNO.1所示；所述颗粒的粒径为1-3μm，所述颗粒与多肽的质量比为1000-5000:1。2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤（1）中，雷公藤甲素的质量分...

【专利技术属性】
技术研发人员：向红先，
申请(专利权)人：成都育芽科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51