本发明专利技术涉及生物和医学检测技术领域，具体涉及一种在同一反应体系内同时综合检测胰腺癌肿瘤标志物CA242、CEA、CA50、CA199的检测试剂盒，同时还涉及该试剂盒在检测胰腺癌肿瘤标志物CA242、CEA、CA50、CA199中的应用。该试剂盒包括分别抗CA242、CEA、CA50、CA199第一株单克隆抗体混合抗体包被的微孔板；分别用Eu3+、Tb3+、Sm3+、Dy3+标记的抗CA242、CA50、CA199、CEA第二株单克隆抗体混合抗体等。本发明专利技术试剂盒可用于胰腺癌的临床辅助诊断、疗效观察及预后判断，同时检测四个肿瘤标志物，简化了检测步骤，提高了检测数据综合分析的特异性和灵敏性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物和医学检测
，具体涉及一种在同一反应体系内同时综合检测胰腺癌肿瘤标志物指标CA242、CA50、CEA、CA 199的时间分辨荧光免疫检测试剂盒，同时还涉及该试剂盒在综合检测胰腺癌肿瘤标志物CA242、CA50、CEA、CA 199中的应用。
技术介绍
胰腺癌是消化道常见的恶性肿瘤之一，由于早期缺乏典型的临床表现，临床上90%以上的患者确诊时已经属于中晚期，失去最佳治疗时机，其5年生存率仅为5%。在世界普通癌症中，男性患胰腺癌居世界第四位，女性居第五位，而且预后效果差。目前研究热点在于探求特异性的早期诊断肿瘤标志物，实现对胰腺癌的早期诊断，提高胰腺癌患者的生存率，在早期、更加准确的确诊胰腺癌依然是治疗该疾病的关键。目前，诊断胰腺癌的常用检测指标有CA242、CA50、CEA、CA 199等几种。在实际诊断胰腺癌时，一般是用CA242、CA50、CEA、CA199四种指标综合确诊胰腺癌，因为四种综合的分析在特异性和敏感度上明显高于单一指标。常规实验室或医疗单位用于检测该四项指标通常采用单一试剂盒，即一个试剂盒针对一种肿瘤标记物的检测，此种方式存在的缺点是:1、检测步骤繁多，费时费力；2、目前四种标记物分别采用四种单指标试剂盒进行检测，然后再进行综合判断，由于不同生产厂家的试剂盒存在差异，且同一厂家的不同试剂盒由于检测的标记物不同可能会存在控制条件、参数的差异而导致检测结果存在误差，此种误差在综合分析四种标记物的特异性和敏感性上会产生较大的影响，可能导致判断结果相差甚远。因此，开发一种能够在相对同一的检测条件下同时检测该四种胰腺癌肿瘤标记物的试剂盒，就能降低由于人为原因造成的检测误差，大大提高综合分析检测结果的特异性和敏感性，为下一步的研究或判断做出准确的结论提供更充分的依据。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有技术中存在的问题，提供一种在同一反应体系内同时综合检测胰腺癌肿瘤标志物指标CA242、CA50、CEA、CA 199的时间分辨荧光免疫检测试剂盒。本专利技术的目的还在于提供一种该试剂盒的应用。为了实现以上目的，本专利技术所采用的技术方案是:一种时间分辨荧光法综合检测胰腺癌试剂盒，把四种胰腺癌肿瘤标志物CA242、CA50、CEA、CA 199综合在同一微孔的同一反应体系内，采用时间分辨荧光免疫法检测，该试剂盒包括:分别抗CA242、CA50、CEA、CA 199第一株单克隆抗体混合抗体包被的微孔板；用Eu3+标记的抗CA242、Tb3+标记的抗CA50、Sm3+标记的抗CA199、Dy3+标记的抗CEA第二株单克隆抗体混合抗体；分析缓冲液；共用荧光增强剂；洗涤液；质控品。其中，所述的第一株单克隆抗体混合抗体包被的微孔板的制备方法为:把分别抗CA242、CA50、CEA、CA199第一株单克隆抗体混合抗体用包被缓冲液稀释，制得抗体包被液，然后向微孔板的每个孔中分别加入100 μ I的所述抗体包被液，于37°C包被2小时，然后用生理盐水冲洗微孔板三次，然后再向微孔板的每个孔中分别加入200 μ I的封板液，于室温封闭2小时或置于4°C环境中过夜，然后用生理盐水冲洗微孔板两次，冷冻干燥，制得第一株单克隆抗体混合抗体包被的微孔板。所述抗体包被液中，分别抗CA242、CA50、CEA、CA 199的第一株单克隆抗体的浓度均为 0.009 0.017g/L。所述的用Eu3+标记的抗CA242、Tb3+标记的抗CA50、Sm3+标记的抗CA199、Dy3+标记的抗CEA第二株单克隆抗体混合抗体中，用Eu3+标记的抗CA242抗体、Tb3+标记的抗CA50抗体、Sm3+标记的抗CA199抗体、Dy3+标记的抗CEA抗体的质量配比为:Eu3+标记的抗CA242抗体:Tb3+标记的抗CA50抗体:Sm3+标记的抗CA199抗体:Dy3+标记的抗CEA抗体=(2 6): (5 9): (6 11): (7 10)。分析缓冲液的制备方法为:向每升浓度为0.05mol/L、pH值为8.0的Tris-Hcl缓冲液中加入9g NaCU0.5g NaN3UOg BSA、0.1ml吐温_40、5g聚乙二醇，混合均匀，即制得分析缓冲液。所述共用荧光增强剂的制备方法为:解离部分:将70 200 μ mol的PTA、2 7 μ mo I的氧化乾、0.6g的Triton X-100和300ml的乙醇混合,用水定容至I升,用乙酸调pH值至3.5，制得解离部分；增强部分:将0.1 0.4mmol的邻菲罗啉和0.2mol的Tris混合，用水定容至1L，制得增强部分。所述洗涤液的制备方法为:在浓度为0.01mol/L、pH值为7.4的PBS缓冲液中加入吐温-20，混匀，制得吐温-20质量百分比浓度为0.05%的PBS溶液，然后用质量百分比浓度为0.2%的NaN3溶液防腐处理，制得洗涤液。所述质控品为CA242、CA50、CEA、CA 199标准品的混合物。一种时间分辨荧光法综合检测胰腺癌试剂盒在综合检测胰腺癌肿瘤标志物CA242、CA50、CEA、CA199 中的应用。时间分辨荧光法综合检测胰腺癌试剂盒在综合检测胰腺癌肿瘤标志物CA242、CA50、CEA、CA199中的应用，包括以下步骤:(I)用分析缓冲液稀释质控品，制成具有系列浓度梯度包含有CA242、CA50、CEA、CA 199四种标准品的混合溶液；(2)将待测样品与步骤(I)制备的四种标准品混合溶液分别加入抗CA242、CA50、CEA、CA199第一株单克隆抗体混合抗体包被的微孔板的不同孔中，然后再向孔中加入能分别与CA242、CA50、CEA、CA 199结合的标记有稀土离子螯合物的第二株单克隆抗体混合抗体，之后加入共用荧光增强剂，进行时间分辨荧光免疫检测，得到发光值；(3)根据测定的具有系列浓度梯度的包含CA242、CA50、CEA、CA 199四种标准品的混合溶液的发光值做标准曲线；(4)以测定的待测样品中的CA242、CA50、CEA、CA 199发光值和标准品中CA242、CA50、CEA、CA 199各自的标准曲线的发光值做比较，得出待测样品中CA242、CA50、CEA、CA199各自的含量。其中，所述待测样品为人体血清。进一步的，所述包被缓冲液的制备方法为:取浓度为0.03mol/L、pH值为9.0的碳酸盐缓冲液，然后用质量百分比浓度为0.2%的NaN3溶液防腐处理，制得包被缓冲液。所述封板液的制备方法为:向浓度为0.01mol/L、pH值为7.4的PBS缓冲液中加入BSA,配制成BSA质量百分比浓度为1%的BSA的PBS缓冲液，然后用质量百分比浓度为0.2%的NaN3溶液防腐处理，制得封板液。本专利技术提供的试剂盒，采用时间分辨荧光免疫检测方法，实现同时综合检测胰腺癌肿瘤标志物CA242、CA50、CEA、CA 199的目的。时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)是一种以稀土离子为标记物，根据稀土离子螯合物的发光特点，用时间分辨技术测定特异性荧光的技术方法。TRFIA利用稀土离子的激发光和发射光的波长不同，同时发射光具有长的衰减时间，这样可以有效的排除非特异性荧光的干扰，具有线性范围宽、灵敏度高和稳定性好等优点，另外，可以利用不同的稀土本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种时间分辨荧光法综合检测胰腺癌试剂盒，把四种胰腺癌肿瘤标志物CA242、CA50、CEA、CA199综合在同一微孔的同一反应体系内，采用时间分辨荧光免疫法检测，其特征在于：该试剂盒包括：分别抗CA242、CA50、CEA、CA199第一株单克隆抗体混合抗体包被的微孔板；用Eu3+标记的抗CA242、Tb3+标记的抗CA50、Sm3+标记的抗CA199、Dy3+标记的抗CEA第二株单克隆抗体混合抗体；分析缓冲液；共用荧光增强剂；洗涤液；质控品。
【技术特征摘要】
2012.09.20 CN 201210349600.X1.一种时间分辨荧光法综合检测胰腺癌试剂盒，把四种胰腺癌肿瘤标志物CA242、CA50、CEA、CA 199综合在同一微孔的同一反应体系内，采用时间分辨荧光免疫法检测，其特征在于:该试剂盒包括:分别抗CA242、CA50、CEA、CA 199第一株单克隆抗体混合抗体包被的微孔板；用Eu3+标记的抗CA242、Tb3+标记的抗CA50、Sm3+标记的抗CA199、Dy3+标记的抗CEA第二株单克隆抗体混合抗体；分析缓冲液；共用荧光增强剂；洗涤液；质控品。2.根据权利要求1所述的时间分辨荧光法综合检测胰腺癌试剂盒，其特征在于:所述的第一株单克隆抗体混合抗体包被的微孔板的制备方法为:把分别抗CA242、CA50、CEA、CA199第一株单克隆抗体混合抗体用包被缓冲液稀释，制得抗体包被液，然后向微孔板的每个孔中分别加入100 μ I的所述抗体包被液，于37°C包被2小时，然后用生理盐水冲洗微孔板三次，然后再向微孔板的每个孔中分别加入200μ I的封板液，于室温封闭2小时或置于4°C环境中过夜，然后用生理盐水冲洗微孔板两次，冷冻干燥，制得第一株单克隆抗体混合抗体包被的微孔板。3.根据权利要求2所述的时间分辨荧光法综合检测胰腺癌试剂盒，其特征在于:所述抗体包被液中，分别抗CA242、CA50、CEA、CA 199的第一株单克隆抗体的浓度均为0.009 0.017g/L。4.根据权利要求1所述的时间分辨荧光法综合检测胰腺癌试剂盒，其特征在于:所述的用Eu3+标记的抗CA242、Tb3+标记的抗CA50、Sm3+标记的抗CA199、Dy3+标记的抗CEA第二株单克隆抗体混合抗体中，用Eu3+标记的抗CA242抗体、Tb3+标记的抗CA50抗体、Sm3+标记的抗CA199抗体、Dy3+标记的抗CEA抗体的质量配比为:Eu3+标记的抗CA242抗体:Tb3+标记的抗CA50抗体:Sm3+标记的抗CA199抗体:Dy3+标记的抗CEA抗体=(2 6): (5 9): (6 11): (7 10)。5.根据权利要求1所述的时间分辨荧光法综合检测胰腺癌试剂盒，其特征在于:所述共用荧光增强剂的制备方法为:解离部分:将70...
【专利技术属性】
技术研发人员：王嘎，程自卿，
申请(专利权)人：河南生生医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：
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