一种检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素A的双抗体夹心法制造技术

一种检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素A的双抗体夹心法，属于免疫分析技术领域。本发明专利技术应用购于北京军事医学院的重组金黄色葡萄球菌肠毒素A（SEA）免疫8周龄的BALB/c小鼠，经过正常的免疫、细胞融合、筛选后得到10株SEA单克隆抗体，10株抗体分别标记辣根过氧化物酶（HRP）并进行两两配对。最后选定以JN2011-01、JN2011-02分别为包被抗体和酶标抗体，以SEA为标准品建立了SEA的夹心ELISA分析方法，LOD为0.23ng/mL，线性范围为0.5-8ng/mL。本发明专利技术采用理化性质高度均一、特异性好、可以大量制备的单克隆抗体，建立的双抗体夹心法灵敏度高，成本低，与金黄色葡萄球菌肠毒素B、C、D、E无交叉反应，为食品中SEA的检测提供了快速高效的分析手段。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素A的双抗体夹心法，其特征在于：酶标板上包被了包被抗体JN2011?01，合适的浓度下最大限度捕获SEA；洗板3次，洗去未结合的包被抗体，加入封闭液200μL封闭板孔上多余结合位点；洗板3次，加入样品及对照，37℃孵育1h；洗板3次，加入酶标抗体JN2011?02?HRP，37℃孵育1h；洗板4次，加入显色液显色12min；样品中SEA浓度≥0.5ng/mL，样品中SEA被包被抗体JN2011?01捕获并与酶标抗体JN2011?02?HRP结合，并催化底物在450nm产生吸收值，被判定为阳性；样品中SEA浓度＜0.5ng/mL，样品中SEA不被包被抗体JN2011?01捕获或者捕获数量太小不足以引起足够的信号，被判定为阴性。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：胥传来，王文彬，匡华，宋珊珊，刘丽强，徐丽广，胡拥明，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：