本发明专利技术公开了原位杂交检测鼻咽癌组织中长链非编码RNA LOC284454试剂的应用，主要用于制备鼻咽癌辅助诊断或者疗效预测制剂。通过原位杂交技术证实LOC284454在正常鼻咽上皮(NPE)中表达水平较低，40例正常鼻咽上皮中仅有6例(15％)中检测到有LOC284454的低表达，在其余34例中检测不到；而在112例鼻咽癌组织中有89例鼻咽癌(79.5％)中检测到有LOC284454的表达，其中71例为高表达，18例为低表达，其余的23例鼻咽癌组织中未检测到LOC284454的表达；高表达LOC284454的鼻咽癌患者总的生存时间和无病生存时间均明显短于LOC284454表达低或不表达的患者。本发明专利技术为鼻咽癌的早期发现、早期治疗提供了重要的参考依据。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于肿瘤分子生物学领域，具体涉及原位杂交检测鼻咽癌组织中长链非编码RNALOC284454试剂用于制备鼻咽癌辅助诊断或者疗效预测制剂的用途。
技术介绍
人类基因组计划及其后续的DNA元件百科全书计划(TheEncyclopediaofDNAElementsProject,ENCODE)研究成果表明，蛋白编码基因序列仅占人类基因组序列的1-3％，而人基因组中绝大部分可转录的序列为长链非编码RNA(Longnon-codingRNA,lncRNA)。LncRNA广泛地存在于各种生物中，且随着生物复杂程度的升高，基因组中lncRNA序列的比例也相应地增大，提示lncRNA在生物进化过程中有重要意义。随着lncRNA不断被发现，它们的功能逐渐被诠释，科学家们发现lncRNA广泛而活跃地参与到生命活动不同层面的功能调控中，作为一个崭新的领域，已经成为国际生命科学研究领域新的前沿与热点。LncRNA可作为功能蛋白质的信号(signal)、诱导(guide)、诱饵(decoy)或支架(scaffold)分子等多种方式，在染色质重构、基因转录、翻译及蛋白修饰等多重水平调控基因的表达，并在包括发育、免疫、生殖等基本生理过程中扮演了不可替代的角色，更重要的是，lncRNA的表达与功能失调已经与包括恶性肿瘤在内的人类多种疾病紧密联系在了一起。因此，深入研究lncRNA的功能，揭示由lncRNA介导的遗传信息传递方式和表达调控网络，不仅可以从蛋白编码基因以外的角度重新注释和阐明基因组的结构与功能，深入发现生命活动的本质和规律，还有望从一个新的视角认识包括肿瘤在内的多种人类常见疾病的发病机理，并为这些疾病的诊断与治疗提供新的分子标志物与治疗靶点。鼻咽癌是常见高发的头颈部恶性肿瘤，容易发生颈部淋巴结转移，预后较差。研究表明，这种肿瘤的发生发展是多基因参与、多步骤、多阶段的复杂过程，LncRNA在鼻咽癌的发生发展过程中可能也起到了重要的作用。最近我们发现lncRNALOC284454(NCBIaccessionnumber:NR_036515)在鼻咽癌组织和血清中表达上调，针对该lncRNA的检测制剂也可以用于鼻咽癌的辅助诊断。我们进一步增加样本，在112例有临床随访资料的鼻咽癌石蜡存档标本中，通过原位杂交(insituhybridization)的方法检测了LOC284454的表达水平，发现LOC284454在鼻咽癌组织中表达上调，高表达LOC284454的鼻咽癌患者比低表达LOC284454的鼻咽癌患者预后差，因此针对该lncRNA的检测制剂也可以用于鼻咽癌的预后判断。我们通过设计并合成靶向LOC284454的短发夹RNA(short-hairpinRNA,shRNAs)序列，构建了靶向LOC284454的RNA干扰载体，转染到鼻咽癌细胞株中，在体外培养系统和裸鼠转移瘤体内模型中均证实靶向干扰LOC284454的表达可明显抑制鼻咽癌细胞的侵袭与转移能力。将LOC284454的RNA干扰载体负载到多聚赖氨酸修饰的硅纳米颗粒上制成纳米基因转运体，多聚赖氨酸修饰的硅纳米颗粒可保护LOC284454的RNA干扰载体免受核酸酶降解，延长作用时间，且有更高的转染效率。
技术实现思路
针对上述现有技术，本专利技术的目的是提供原位杂交检测鼻咽癌组织中长链非编码RNALOC284454试剂用于制备鼻咽癌辅助诊断或者疗效预测制剂的用途。原位杂交检测鼻咽癌组织中长链非编码RNALOC284454试剂的应用，所述的试剂用于制备鼻咽癌辅助诊断或者疗效预测制剂；该长链非编码RNALOC284454的序列如SEQNO:1所示。所述的原位杂交检测鼻咽癌组织中长链非编码RNALOC284454试剂包括以下用于原位杂交检测LOC284454表达的寡核苷酸探针中的一种或几种：LOC284454探针1：5’-GACCGGAAAATAACAAACAAAAACTCTGCCTCAG-3’；LOC284454探针2：5’-GTGATAGAACTTTAGTCTACCCTCCTCCGAAAAA-3’；LOC284454探针3：5’-GTACAGACAACAAGTTCATTTATTTTCAACGGGAC-3’。所述的原位杂交检测鼻咽癌组织中长链非编码RNALOC284454试剂包括以下阳性对照探针中的一种或几种：GAPDH探针1：5'-CCACTTTACCAGAGTTAAAAGCAGCCCTGG-3'；GAPDH探针2：5'-CAGTAGAGGCAGGGATGATGTTCTGGAGAG-3'；GAPDH探针3：5'-GTCAGAGGAGACCACCTGGTGCTCAGTGTA-3'。本专利技术通过原位杂交技术证实LOC284454在正常鼻咽上皮(NPE)中表达水平较低，40例正常鼻咽上皮中仅有6例(15％)中检测到有LOC284454的低表达，在其余34例中检测不到；而在112例鼻咽癌组织中有89例鼻咽癌(79.5％)中检测到有LOC284454的表达，其中71例为高表达，18例为低表达，其余的23例鼻咽癌组织中未检测到LOC284454的表达；高表达LOC284454的鼻咽癌患者总的生存时间和无病生存时间均明显短于LOC284454表达低或不表达的患者。本专利技术为鼻咽癌的早期发现、早期治疗提供了重要的参考依据。附图说明图1为荧光定量PCR检测发现LOC284454在鼻咽癌中表达上调情况；实时荧光定量PCR技术验证lncRNALOC284454在鼻咽癌(27例)和慢性炎症鼻咽上皮组织(9例)中的表达情况，LOC284454表达显著上调(P＝0.0056)；图2为LOC284454在鼻咽癌患者血清中同样表达上调情况；实时荧光定量PCR技术检测lncRNALOC284454在鼻咽癌患者血清(77例)和正常人血清(14例)中的表达情况；LOC284454在鼻咽癌患者血清中的表达比正常人血清中显著提高。图3为原位杂交检测LOC284454在鼻咽癌及正常鼻咽上皮中的表达情况；LOC284454在正常鼻咽上皮(NPE)中表达水平较低，40例正常鼻咽上皮中仅有6例(15％)中检测到有LOC284454的低表达，在其余34例中检测不到；而在112例鼻咽癌组织中有89例鼻咽癌(79.5％)中检测到有LOC284454的表达，其中71例为高表达，18例为低表达，其余的23例鼻咽癌组织中未检测到LOC284454的表达；P<0.001。图4为鼻咽癌组织中LOC284454高表达患者预后差，更易复发和转移；鼻咽癌中LOC284454的高表达本文档来自技高网...
【技术保护点】
原位杂交检测鼻咽癌组织中长链非编码RNA LOC284454试剂的应用，其特征在于，所述的试剂用于制备鼻咽癌辅助诊断或者疗效预测制剂；该长链非编码RNA LOC284454的序列如SEQ NO:1所示。
【技术特征摘要】
1.原位杂交检测鼻咽癌组织中长链非编码RNALOC284454试剂的应用，其特征在于，所
述的试剂用于制备鼻咽癌辅助诊断或者疗效预测制剂；该长链非编码RNALOC284454的序
列如SEQNO:1所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的原位杂交检测鼻咽癌组织中长链非
编码RNALOC284454试剂包括以下用于原位杂交检测LOC284454表达的寡核苷酸探针中的
一种或几种：
LOC284454探针1：5’-GACCGGAAAATAACAAACAAAAACTCTGCCTCAG-3’；
LOC284454探针2：5’-GTGATAGAACTTTAGTCTACC...
【专利技术属性】
技术研发人员：曾朝阳，李桂源，熊炜，李小玲，唐艳艳，杨丽婷，孛昊，李夏雨，龚朝建，张文玲，张姗姗，郭灿，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：湖南;43
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