一种诊断宫颈癌的miRNA标志物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种诊断宫颈癌的miRNA标志物，属于基因工程及生殖医学技术领域，所述的miRNA标志物为miR-320，其引物为SEQ ID No.1和SEQ ID No.2。该标志物及其引物可用于可用于制备宫颈癌辅助早期诊断试剂盒，用于宫颈癌的早期辅助诊断及预后评估。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程及生殖医学
，涉及一种诊断宫颈癌的miRNA标志物及其应用，具体为一种与宫颈癌辅助早期诊断及预后评估相关的miRNA标志物及其应用。
技术介绍
宫颈癌是女性最常见的生殖系统恶性肿瘤，严重危害女性健康和生命。2011年，Lancet刊出的宫颈癌最新统计结果显示：从1980年到2010年，全球宫颈癌发病率平均以每年0.6％的增幅递增，仅2010年一年中，发展中国家因宫颈癌死亡的女性总数就达到200,000之多，死亡年龄也更趋于年轻化。宫颈癌流行病学研究结果所揭示的严峻现实，使得进一步寻找敏感特异的宫颈癌临床诊断及预后评估的分子标志物成为迫切需要，是实现宫颈癌的早期诊断、早期干预及时合理治疗的关键，是亟待解决的重大科学问题，对宫颈癌的早期诊断及有效防治具有重要的理论意义和临床应用价值。MicroRNAs(即miRNAs)是近年来分子生物学研究领域的一个热点，它的成熟状态是一类长约19-23个核苷酸的小单链RNA分子，进化上具有高度保守性。miRNA的主要功能是调节生物体内在的与机体生长、发育、疾病发生过程有关的基因的表达。自从参与调控线虫时序发育的lin-4与let-7被发现以来，miRNA分别在2002年和2003年两度入选Science杂志年度十大科技突破。2005年预测miRNAs至少能调控5300个人类基因，即所有基因的30％。随着研究的深入，越来越多的miRNAs不断被发现。聚光灯下的miRNA已经逐步摆脱了DNA光芒的掩盖，从“配角”变成“主角”，并且对DNA的中心地位提出了新的挑战。近年来，miRNA与疾病的关系已经成为研究的热点和重点，已经发现miRNA通过负调控基因的表达与肿瘤，糖尿病等多种人类疾病的发病高度相关。研究已经证实血清/组织中存在几百种的miRNAs，这些小分子RNAs性质稳定、含量丰富、易于定量检测，且存在显著的疾病特异性。现有的成熟的技术，包括定性和定量miRNA分子的技术，表明利用miRNAs作为分子生物标志物的方法比传统的特异蛋白分子标记方法将更加有效，为生物标志物开拓了新境界。miR-320是近年发现的一类与肿瘤发病相关的miRNA。学者们对其功能逐渐有了深入的认识：miR-320不但可以抑制正常细胞周期G1/S的转变，而且可以抑制肿瘤细胞增殖；在肿瘤组织如乳腺癌中可以观察到miR-320表达明显下调，miR-320表达下调能够促进肿瘤血管生成和癌细胞侵袭。这些研究结果均提示miR-320可能具有肿瘤抑制效应。本课题组对宫颈癌组织miR-320表达情况进行了检测，结果发现宫颈癌组织miR-320表达呈明显下调。然而，目前miR-320作为较为稳定的生物标志物用于宫颈癌辅助早期诊断价值尚未见相关报道，若能筛选miRNAs作为生物标志物，并研制相应的辅助早期诊断试剂盒，对我国宫颈癌的诊断现状必将是一次有力的推动。
技术实现思路
针对上述技术问题，本专利技术的目的在于提供一种与宫颈癌辅助早期诊断及预后评估相关的miRNA标志物及其引物，该标志物及其引物可用于制备宫颈癌辅助早期诊断试剂盒，为宫颈癌的筛查和早期诊断提供数据支持，为宫颈癌的干预提供数据支持。本专利技术具体通过以下技术方案实现：专利技术人通过分离和研究宫颈癌病例和健康对照组织中的miR-320，寻找与宫颈癌发生发展高度相关的高特异性和敏感性的miRNAs标志物，并研制出可便于临床应用的宫颈癌辅助早期诊断试剂盒。具体为：一种诊断宫颈癌的miRNA标志物，所述的miRNA标志物为miR-320。所述的miRNA标志物miR-320的引物为SEQIDNo.1和SEQIDNo.2。本专利技术提供了所述miRNA标志物miR-320在制备宫颈癌辅助早期诊断试剂盒中的应用。所述miRNA标志物miR-320的引物在制备宫颈癌辅助早期诊断试剂盒中的应用。本专利技术还提供了一种宫颈癌辅助早期诊断试剂盒，该试剂盒用于检测宫颈组织中的miR-320。所述的诊断试剂盒含有标志物miR-320的引物：SEQIDNo.1和SEQIDNo.2。所述诊断试剂盒还可以包括PCR反应常用的酶和试剂，如逆转录酶，缓冲液，dNTPs，MgCl2，DEPC水和Taq酶等；还可以含有标准品和/或对照品。本专利技术的有益效果为：本专利技术提供的微小核糖核酸(microRNAs/miRNAs)标志物作为宫颈癌早期诊断的标志物的优越性在于：1)miRNAs是一种新型生物标志物，区别于传统生物标志物，不仅稳定、微创、易于检测，且定量精确，将大大提高疾病诊断的敏感性和特异性，该类小分子RNA生物标志物的成功开发将为宫颈癌的早期诊断开创全新局面，为其他疾病生物标志物的研制提供借鉴。2)miRNAs试剂盒是一种系统、全面的诊断和监测试剂盒，可用于宫颈癌的早期诊断，为临床医生快速准确预测宫颈癌结局、及时采取更具个性化的防治方案提供支持。本专利技术通过控制年龄等对疾病发展的影响因素，研究miRNA在宫颈癌早期诊断的应用前景，阐述异常表达的miR-320对于宫颈癌进展的影响，揭示其筛查和早期诊断价值。因此，本专利技术获得了宫颈癌发病特异性miR-320标志物；通过miRNAs生物标志物和诊断试剂盒的研制和应用，可使得宫颈癌的早期诊断更加方便易行，为临床医生快速准确掌握患者病情，为临床治疗效果评价奠定基础，并为发现具有潜在治疗价值的新型小分子药物靶标提供帮助。附图说明图1是本专利技术实施例2宫颈癌病例组和对照组的miR-320表达的柱形图；Normal：正常对照组；Tumor：宫颈癌组。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步的说明，以下所述，仅是对本专利技术的较佳实施例而已，并非对本专利技术做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的
技术实现思路
加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本专利技术方案内容，依据本专利技术的技术实质对以下实施例所做的任何简单修改或等同变化，均落在本专利技术的保护范围内。本专利技术解决问题的技术方案包括：(1)建立统一标准的标本库和数据库：以标准操作程序(SOP)采集符合标准的组织样本，系统收集完整的人口学资料和临床资料。(2)宫颈组织miR-320差异表达分析：选择宫颈癌病例、与宫颈癌病例年龄匹配的子宫肌瘤女性为对照，检测病例及对照宫颈组织中miR-320表达量，分析宫颈癌病例和对照间宫颈组织miR-320的表达差异，进一步分析miR-320在宫颈癌发生发展中的作用。(3)miR-320筛查和辅助早期诊断试剂盒的研制：根据宫颈癌病例和对照的组织m本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种诊断宫颈癌的miRNA标志物，其特征在于：所述的miRNA标志物为miR‑320。

【技术特征摘要】
1.一种诊断宫颈癌的miRNA标志物，其特征在于：所述的miRNA标志物为miR-320。
2.根据权利要求1所述的一种诊断宫颈癌的miRNA标志物，其特征在于：所述的miRNA标
志物miR-320的引物为SEQIDNo.1和SEQIDNo.2。
3.权利要求1所述miRNA标志物miR-320在制备宫颈癌辅助早期诊断试剂盒中的应用。
4.权利要求2所述miRNA标志物miR-320的引物在制备宫颈癌辅助早期诊断试剂盒中的
应用。
5.一种宫颈癌辅助早期诊断...

【专利技术属性】
技术研发人员：张婷，陈道桢，邹萍，陈钰，蒋洁，
申请(专利权)人：无锡市妇幼保健院，
类型：发明
国别省市：江苏;32