一种检测青春型精神分裂症易感性的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种检测青春型精神分裂症易感基因的试剂盒，本发明专利技术提供的检测青春性精神分裂症易感基因的方法为聚合酶链式反应-限制性长度多态性分析方法，通过此方法检测易感基因DRD2基因序列的一个多态性位点:rs1800497，利用本发明专利技术的试剂盒可以用来准确检测青春型精神分裂症易感基因，为青春型精神分裂症的深入研究和防治、诊断、治疗提供了新的思路。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及检测精神分裂症易感基因检测领域，具体涉及到一种检测青春型精神分裂症易感性的试剂盒。
技术介绍
精神分裂症(schizophrenia)是一种慢性、严重性、致残性脑病，严重危害人体健康。是精神类疾病中最严重的一种精神疾病，2009年根据柳叶刀调查显示，我国的精神分裂症患者人数近1000万。精神分裂症需要终身治疗，治疗成本高昂，据统计，美国2002年精神分裂症的治疗总成本达627亿美元，其中直接成本227亿美元，因自杀而早夭和家属因照顾患者而导致的损失等为324亿美元，且精神分裂症具有高致残性，大多数精神分裂症患者会终身残留某些症状，需要终身治疗，由于精神分裂症的严重性和慢性化，对患者、家庭及社会影响很大，消耗大量公共资源，因此精神分裂症已经给社会和家庭带来严重的负担。精神分裂症在男性、女性中的发病率几乎相同，但男性发生较早，发生在青春期晚期和成年早期，约在15-25岁起病，而此阶段正是构筑人生道路的关键时期，女性主要在20-35岁起病。患者有幻觉、妄想、自发运动增多等阳性症状，有情感冷漠、言语减退、社交退缩等阴性症状，同时有认知功能缺损，抑郁，社会职业功能损害等认知损伤等症状。根据精神分裂症不同临床表现、发病形式、临床特点、病程、治疗方案、治疗反应及预后等因素，可以把精神分裂分为单纯型、偏执型、青春型、紧张型、未分化型及残留型。青春型精神分裂症在精神分裂症患者中，比例约占20％左右；常发病于青春期，急骤，病程发展较快，症状显著，内容荒谬。其临床表现以兴奋冲动、异常古怪及意向倒错为主，精神症状丰富易变，情感喜怒无常。以阳性症状为主的青春型，早期治疗效果较好。一个世纪以来，人们对精神分裂症的生理、生化、影像、药物治疗以及社会家庭、环境等方面观察，对精神疾病的发病机理做出了各种假说和判断，随着科技进步，人们越来越认识到基因缺陷是许多严重精神疾病产生的重要原因，当人们遇到环境压力时，那些携带疾病易感基因的人比不携带易感基因的人更可能患精神卫生疾患，经调查研究，精神分裂症是遗传度很高的多基因病，主要呈现家族聚集，一旦一个家族成员患病，这个家庭的其他成员携带的易感基因远远高于正常人，需要进行有效的预防与治疗，在科技日益发展的今天如何对待精神分裂症，如何从遗传角度检测易感基因以及个体的疾病易感性，从而进行进一步风险预测和诊断，药物开发，成为广大科技人员和医疗卫生人员面临的严峻问题，尽管国内外易感基因研究开展多年，但是进展缓慢，只有少数关于鉴定遗传易感基因的报道，但是没有具体针对某种类型的精神分裂症的检研究，国际上把精神分裂症分为五种类型，每种类型涉及的易感基因都不一样，不能笼统的用一种或者几种基因把这五种类型都鉴定，这样必然专一性差。而且即使诊断出精神分裂症，但是不知道是哪种类型的精神分裂症，对后续的治疗缺乏指导意义。利用遗传标记对治病基因进行检测，是近几年来发展的技术。遗传标记，即在染色体上有一段特异DNA序列片段，且有多态性，在世世代代传递中，遵循规律为分离、独立分配和连锁规律，因此可获得遗传物质传递信息。遗传标记可以把基因组分为不同区域，通过连锁和关联分析可获得致病基因所在染色体区域，可对该病基因进一步进行克隆。对于各种不同疾病，寻找致病基因和分析是研究的关键之一。第三代遗传标记—SNP(singlenucleotidepolymorphism)指基因组中某特定核苷酸的位置上会存在两种或两种以上的不同碱基，在群体中最小等位基因频率≥1％。人类的基因组中多数SNP位点仅存在2种等位基因，所以通常SNP会指在特定位置上，某一核苷酸出现双等位基因的改变。SNP是人类基因组计划走向应用的非常重要方法。主要因为SNP提供一个非常有力的工具，用于高危人群的发现、疾病易感基因的鉴定、药物设计和基础生物学研究等。因为人类大量存在SNP位点，提供了更多的机会发现基因与疾病间的关系。通过SNP发现疾病相关基因的突变要比家系等研究容易。某些SNP并不是致病基因，但它可能与某些相邻的致病基因连锁，也同样为重要标记。最近基因组扫描结果提示，11号染色体与青春型精神分裂症易感性相关联，但至今在该染色体区域内未发现确定特异的与青春型精神分裂症相关的易感基因。本专利技术第一次利用SNP技术对青春型精神分裂症易感基因进行检测，为青春型精神分裂症的深入研究和防治、诊断、治疗提供了新的思路。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种检测青春型精神分裂症易感基因的试剂盒，从而满足本领域对于正确识别青春型精神分裂症易感基因的需求，为青春型精神分裂症的深入研究、预防、治疗、诊断提供了新的思路。专利技术人通过研究结果表明，11号染色体DRD2基因位于11q23，全称是多巴胺D2受体基因，是青春型精神分裂症的易感基因，通过对DRD2基因的SNP位点：rs1800497进行分析，结果显示，rs1800497与青春型精神分裂症高度相关。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：一种检测青春型精神分裂症易感性的试剂盒，包括：1)引物：扩增DRD2基因rs1800497多态性的引物分别为：ACGTTGGATGTGTGCAGCTCACTCCATCCTACGTTGGATGCAACACAGCCATCCTCAAAG2)PCR扩增缓冲液，Taq聚合酶，3)限制性内切酶TaqI和相应的缓冲液。具体研究过程如下：1、通过查阅文献、利用计算机互联网及生物信息学获取各方面精神分裂症候选基因研究，在11号染色体通过连锁不平衡分析方法进行单个核苷酸多态性(SNP)连锁不平衡分析，通过NCBI(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/mapviewer)数据库，获得DRD2基因，并通过http://www.ncbi.nlm.nih.gov/SNP，http://snp.cshl.org/数据库，搜索出符合其条件的候选基因SNPs。2、然后本研究以320例青春型精神分裂症和380例健康对照为研究对象。所有研究对象均为中国汉族人，并且精神分裂症患者要符合ICD-10和CCMD-II-R的诊断标准。3、在征得受试者知情同意的情况下，采集外周静脉血，采用Promega(USA)液体纯化提取DNA试剂盒，提取基因组DNA。通过测OD260、OD280的值，再通过公式计算DNA的纯度和含量。DNA纯度＝OD260/OD280。4、依据相应的碱基序列合成引物，设计引物：ACGTTGGATGTGTGCAGCTCACTCCATCCTACGTTGGATGCAACACAGCCATCCTCAAAG5、PCR扩增目的片段应用以上引物进行PCR扩增，PCR反应体系为20uL，其中含10mMTris-HCl(PH8.4)，50mMKCl，1.5mMMgCl2，200uMdNTP，上下游引物各0.4uM，Taq聚合酶1U，DNA模板30-50ng，PCR扩增条件为：1、94℃5min，2、96℃45s，60℃60s，72℃60s3个循环，3、95℃45本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测青春型精神分裂症易感性的试剂盒，其包括：1)引物：扩增DRD2基因rs1800497多态性的引物分别为：ACGTTGGATGTGTGCAGCTCACTCCATCCTACGTTGGATGCAACACAGCCATCCTCAAAG2)PCR扩增缓冲液，Taq聚合酶，3)限制性内切酶TaqI和相应的缓冲液。

【技术特征摘要】
1.一种检测青春型精神分裂症易感性的试剂盒，其包括：
1)引物：扩增DRD2基因rs1800497多态性的引物分别为：
ACGTTGGATGTGTGCAGCTCACTC...

【专利技术属性】
技术研发人员：李莉，张海茂，赵自云，
申请(专利权)人：青岛市肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：山东;37