一种PirB胞外多肽及应用制造技术

本发明专利技术提供了一种具有潜在治疗中枢系统损伤作用的PirB胞外多肽，该多肽具有配对免疫球蛋白样受体B的胞外段氨基酸序列；该多肽片段能够在大肠杆菌中大量表达；并能够与髓磷脂抑制因子MAG、Nogo-66、OMgp高亲和力结合，从而拮抗PirB的生物活性和功能。本发明专利技术的PEP能够有效与髓磷脂抑制因子MAG、Nogo-66、OMgp结合，从而促进轴突生长。本发明专利技术的PEP可大量制备、成本低、活性高，用于治疗脑缺血缺氧、脑出血、脑创伤以及脊髓损伤等多种CNS损伤疾病的药物应用，它能够有效促进神经组织的再生和神经功能恢复。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程蛋白重组领域，具体涉及一种具有治疗中枢系统损伤作用的PirB 胞外多月太(PirB extracellular peptides, PEP)及其应用。
技术介绍
创伤、中风、脑出血、脊髓损伤等具有高死亡率和高致残率的特点。如何降低神经功能受损程度和如何更好地使受损神经元功能得到更好地改善，提高患者的生存质量，对患者及其家庭、社会都有重要意义，是一个世界性的难题。目前，对于中枢神经系统(central nervous system, CNS)损伤引起的神经功能障碍尚无有效治疗药物。因此,寻找新型有效的治疗脑CNS损伤药物是研究热点。以往普遍认为成年哺乳动物CNS损伤引起的神经功能障碍，难以恢复的主要原因为神经元不能再生。近二十年来的研究已有突破性进展，目前认为CNS再生困难的原因除促进再生的营养因子不足外，另一重要的原因是中枢的抑制性再生环境。近几年来，髓磷脂中3种主要轴突生长抑制因子Nogo-A、髓磷脂相关糖蛋白(MAG)、少突胶质细胞髓磷脂糖蛋白(OMgp)及其受体(Nogo-66receptor, NgRl)的发现，为CNS损伤的研究掀开了新的一页，被誉为是“探索中枢神经损伤修复漫长道路中的一个里程碑”。新近Neuron发表的研究，应用基因敲除(knockout)技术，发现敲除Nogo-A和NgRl改善脊髓损伤后再生和可塑反应，应用NgRl拮抗剂(NgRecto，可溶性NgRl受体胞外段)治疗，促进轴突再生和脊髓损伤的功能恢复。同样应用Nogo-A抗体(IN-1，7B12)显著改善MACO导致的行为学结果，促进轴突可塑性。为此，Lee 等在《NatureReview Drug Discovery》撰写 “Targeting the Nogoreceptor to treat centralnervous system injuries” 的论文，提出 “NgR as a drugdiscovery target”,认为以调控NgRl为治疗目标，可大大促进CNS损伤后神经元的功能恢复，逆转其灾难性的后果。目前NgR成为CNS损伤领域的研究热点和关注焦点，认为阻断它可影响脑缺血的发展和结果，促进和增强神经功能恢复。PirB是一种I型跨膜糖蛋白，由胞外六个免疫球蛋白样结构域和胞内四个免疫受体酪氨酸依赖的抑制性基序(ITMs)的多肽组成。早期的研究认为PirB是一种在小鼠和人体中发挥相同作用的白细胞免疫球蛋白样受体，在树突状细胞(dendritic cells，DC)、B细胞、粒细胞及肥大细胞等表面表达较高，通过胞外端的IgG样结构域与来自胞内和胞外的其他分子结合，激活其胞内端ITIM基序，传导抑制信号，从而介导机体炎症和免疫反应。新近的一项研究发现，PirB在中枢神经系统的神经元亚型上亦有表达,表达于此的PirB在抑制视皮质经验依赖性重塑程度中发挥重要作用，推测PirB可能是轴突再生的抑制性受体。2008年《Science》、《Neuron》同时报道:依赖于文库筛选技术，Atwal等发现PirB是髓磷脂蛋白的功能性受体，能够与MAG、Nogo-66、OMgp高亲和力结合，表现出抑制轴突生长的慢性抑制作用。与NgRl相比 ，PirB在髓磷脂抑制作用中似乎更为重要，依据是基因敲除PirB后会引起比敲除NgRl更多的轴突再生，而且体外轴突再生实验证实，NgRl在髓磷脂导致的抑制过程中似乎起辅助抑制受体作用，因为基因敲除NgRl能够加强敲除PirB对髓磷脂抑制的逆转作用。同时，PirB在CNS的多个区域广泛表达，对CNS突触形成和可塑性以及神经回路的稳定性起着重要作用，与学习记忆功能也有密切相关，在海马中的表达随年龄的增长而增加。基于PirB的分子结构和生物学功能，本专利技术提出通过表达PirB胞外多肽(PirBextracellular peptides, PEP),与髓磷脂轴突生长抑制因子MAG、Nogo-66> OMgp高亲和力结合，以阻断髓磷脂轴突生长抑制因子与PirB结合，促进神经元轴突的生长，改善CNS损伤后的神经功能障碍，为研发治疗脑缺损伤有效药物奠定基础。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种具有拮抗髓磷脂轴突生长抑制因子与PirB结合、促进轴突生长作用的PirB胞外段多肽(PEP)的表达及其生物学活性验证，并给出PirB胞外段多肽(PEP)，用于制备哺乳动物脑中枢神经系统损伤的药物以及中枢神经系统损伤保护剂的应用。该药物能够用于在哺乳动物中枢神经系统损伤疾病包括脑缺血缺氧、脑出血、脑创伤、脊髓损伤的治疗，在哺乳动物细胞水平上作为蛋白药物治疗工具为了实现上述技术任务，本专利技术采用如下技术方案予以实现:1、一种PirB胞外多肽，其特征在于:该PirB胞外多肽的cDNA序列和蛋白序列如下: cDNA 序列: CTGACGGGTAGCCTGCCGAAACCGATTCTGCGTGTTCAACCGGATAGCGTTGTGAGCCGCCGCACCAAAGTGACCTTCCTGTGTGAAGAAACCATTGGCGCCAACGAATATCGTCTGTACAAAGATGGTAAACTGTATAAAACCGTGACGA A A A ACA A ACAGA A ACCGGA A A ATA A AGCTGA ATTTAGCTTCTCTAACGTTGATCTGAGCAATGCGGGCCAGTATCGCTGCAGTTACTCCACCCAATATAAAAGCTCTGGCTACTCGGACCTGCTGGAACTGGTGGTTACCGGTCATTATTGGACGCCGAGCCTGCTGGCACAGGCATCACCGGTCGTGACCTCGGGCGGTTATGTTACGCTGCAATGTGAAAGCTGGCATAACGATCACAAATTTATTCTGACCGTCGAAGGCCCGCAGAAACTGAGCTGGACCCAGGACTCTCAATATAATTACAGTACGCGTAAATACCACGCACTGTTCAGCGTCGGTCCGGTGACCCCGAACCAGCGTTGGATCTGCCGCTGTTATTCCTACGATCGTAATCGCCCGTATGTGTGGTCACCGCCGTCAGAATCGGTTGAACTGCTGGTCAGCGGCAACCTGCAGAAACCGACCATTAAAGCAGAACCGGGTTCAGTCATCACCTCGAAACGCGCTATGACGATTTGGTGCCAGGGTAACCTGGACGCGGAAGTGTATTTTCTGCATAACGAAAAATCCCAGAAAACCCAATCAACCCAGACGCTGCAAGAACCGGGCAACAAGGGTAAATTTTTCATCCCGTCTGTTACCCTGCAGCACGCCGGCCAATACCGTTGCTATTGTTACGGCAGTGCAGGTTGGAGCCAGCCGTCTGATACCCTGGAACTGGTTGTCACGGGTATCTATGAATATTACGAACCGCGTCTGAGCGTGCTGCCGTCTCCGGTGGTTACCGCGGGCGGTAACATGACGCTGCATTGTGCCTCCGATTTTCCGTATGA本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种PirB胞外多肽，其特征在于：该PirB胞外多肽的cDNA序列和蛋白序列如下：cDNA序列：CTGACGGGTAGCCTGCCGAAACCGATTCTGCGTGTTCAACCGGATAGCGTTGTGAGCCGCCGCACCAAAGTGACCTTCCTGTGTGAAGAAACCATTGGCGCCAACGAATATCGTCTGTACAAAGATGGTAAACTGTATAAAACCGTGACGAAAAACAAACAGAAACCGGAAAATAAAGCTGAATTTAGCTTCTCTAACGTTGATCTGAGCAATGCGGGCCAGTATCGCTGCAGTTACTCCACCCAATATAAAAGCTCTGGCTACTCGGACCTGCTGGAACTGGTGGTTACCGGTCATTATTGGACGCCGAGCCTGCTGGCACAGGCATCACCGGTCGTGACCTCGGGCGGTTATGTTACGCTGCAATGTGAAAGCTGGCATAACGATCACAAATTTATTCTGACCGTCGAAGGCCCGCAGAAACTGAGCTGGACCCAGGACTCTCAATATAATTACAGTACGCGTAAATACCACGCACTGTTCAGCGTCGGTCCGGTGACCCCGAACCAGCGTTGGATCTGCCGCTGTTATTCCTACGATCGTAATCGCCCGTATGTGTGGTCACCGCCGTCAGAATCGGTTGAACTGCTGGTCAGCGGCAACCTGCAGAAACCGACCATTAAAGCAGAACCGGGTTCAGTCATCACCTCGAAACGCGCTATGACGATTTGGTGCCAGGGTAACCTGGACGCGGAAGTGTATTTTCTGCATAACGAAAAATCCCAGAAAACCCAATCAACCCAGACGCTGCAAGAACCGGGCAACAAGGGTAAATTTTTCATCCCGTCTGTTACCCTGCAGCACGCCGGCCAATACCGTTGCTATTGTTACGGCAGTGCAGGTTGGAGCCAGCCGTCTGATACCCTGGAACTGGTTGTCACGGGTATCTATGAATATTACGAACCGCGTCT GAGCGTGCTGCCGTCTCCGGTGGTTACCGCGGGCGGTAACATGACGCTGCATTGTGCCTCCGATTTTCCGTATGACAAATTCATCCTGACCAAAGAAGATAAAAAATTCGGCAATTCACTGGACACGGAACATATCAGTTCCTCAGGCCAGTACCGTGCCCTGTTTATTATCGGTCCGACCACGCCGACCCACACGGGTGCATTCCGCTGCTATGGTTATTACAAAAACGCACCGCAGCTGTGGAGTGTTCCGTCCGCTCTGCAGCAAATTCTGATCTCAGGTCTGTCGAAAAAACCGTCTCTGCTGACCCATCAGGGCCACATCCTGGACCCGGGTATGACCCTGACGCTGCAATGTTTCAGTGATATCAACTACGACCGTTTCGCACTGCATAAAGTGGGCGGTGCTGATATCATGCAGCACTCGAGCCAGCAAACCGACACGGGCTTTTCTGTCGCCAACTTCACCCTGGGTTATGTGTCTAGTTCCACGGGCGGTCAATATCGTTGCTACGGTGCACATAATCTGTCATCGGAATGGAGCGCCAGCTCTGAACCGCTGGATATTCTGATCACCGGTCAGCTGCCGCTGACGCCGAGCCTGTCTGTCCAACCGAATCATACCGTGCACTCGGGTGAAACGGTTAGCCTGCTGTGTTGGAGCATGGATTCTGTTGACACCTTTATTCTGAGTAAAGAAGGCTCCGCTCAGCAACCGCTGCGTCTGAAAAGTAAATCCCATGATCAGCAAAGCCAGGCGGAATTTTCAATGTCGGCCGTGACCAGTCACCTGTCCGGCACGTATCGCTGCTACGGTGCGCAAGACAGTTCCTTCTATCTGCTGTCATCGGCATCTGCTCCGGTGGAACTGACCGTTAGTGGTCCGATTGAAACGAGCACGCCGCCGCCGACGATGTCCATGCCGCTGGGTGGTCTGCATATGTAT；蛋白质序列：GSLPKPILRVQPDSVVSRRTKVTFLCEETIGANEYRLYKDGKLYKTVTKNKQKPENKAEFSFSNVDLSNAGQYRCSYSTQYKSS...

【技术特征摘要】
1.一种PirB胞外多肽，其特征在于:该PirB胞外多肽的cDNA序列和蛋白序列如下: cDNA序列:2.权利要求1所述该PirB胞外多妝,命名为PEP(PirB extracellular peptides)。3.权...

【专利技术属性】
技术研发人员：王强，苟兴春，郭钒，邓斌，姜凤良，熊利泽，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61