使用嵌合性嗅觉受体产生cAMP的方法技术

本发明专利技术提供使用嵌合性嗅觉受体产生cAMP的方法，其具备以下的工序：准备具备第1层、脂质双层膜及第2层的反应体系的工序（a），这里，脂质双层膜被第1层及第2层夹持，脂质双层膜具备嵌合性嗅觉受体及腺苷酸环化酶，嵌合性嗅觉受体贯穿脂质双层膜，腺苷酸环化酶贯穿脂质双层膜，第2层含有ATP及G蛋白，G蛋白配置在嵌合性嗅觉受体的一端附近，嵌合性嗅觉受体的N末端被Rho标签（序列号01）-myc附加表位（序列号04）的氨基酸序列修饰，并且IC4结构域被置换成β1肾上腺素能受体的IC4结构域；以及将刺激嵌合性嗅觉受体的化学物质供至第1层以由ATP产生cAMP的工序（b）。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及。
技术介绍
嗅觉受体是三聚体G蛋白偶联受体(GPCR)，更具体地说是三聚体G蛋白偶联七跨膜型受体的I种。图1表示将气味分子对细胞膜的刺激转换成电信号的机制。嗅觉受体是在细胞膜上表达的膜蛋白。该细胞膜主要由脂质双层膜构成。脂质双层膜具有各层由高密度排列的磷脂分子构成的双层结构。该脂质双层膜示意性地示于图1的中央。图1中，脂质双层膜的上侧为细胞外侧，而脂质双层膜的下侧为细胞内侧。在该嗅觉受体的附近配置有三聚体G蛋白。该三聚体G蛋白是由α亚基(Ga olf)、β亚基(G0)及Y亚基(Gy)所构成的异三聚体。细胞含有腺苷酸环化酶。图1中，腺苷酸环化酶用符号“AC”表述。腺苷酸环化酶准确地说是跨膜型蛋白质。蛋白质RTPlS (序列号42)具有辅助嗅觉受体在细胞膜上表达的功能。另外，该蛋白质RTPlS与上述机制并不直接有关系。接着说明上述机制。气味分子结合在该嗅觉受体上。该结合将三聚体G蛋白分离为a亚基(Ga olf)和β y复合体。该β γ复合体由亚基G0及Gy构成。分离出的G a olf将腺苷酸环化酶(AC)活化。活化后的腺苷酸环化酶(AC)将三磷酸腺苷(ATP)转换成环状本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.10.25 JP 2010-238202;2011.04.27 JP PCT/2011/01.一种使用嵌合性嗅觉受体产生CAMP的方法，其具备以下的工序: 准备具备第I层、脂质双层膜及第2层的反应体系的工序(a)， 这里，所述脂质双层膜被所述第I层及所述第2层夹持， 所述脂质双层膜具备所述嵌合性嗅觉受体及腺苷酸环化酶， 所述嵌合性嗅觉受体贯穿所述脂质双层膜， 所述腺苷酸环化酶贯穿所述脂质双层膜， 所述第2层含有ATP及G蛋白， 所述G蛋白配置在所述嵌合性嗅觉受体的一端附近， 所述嵌合性嗅觉受体来自于由(N末端)-ECl结构域-TMl结构域-1Cl结构域-TM2结构域-EC2结构域-TM3结 构域-1C2结构域-TM4结构域-EC3结构域-TM5结构域-1C3结构域-TM6结构域-EC4结构域-TM7结构域-1C4结构域-(C末端)的氨基酸序列所构成的小鼠来源的嗅觉受体， 所述嵌合性嗅觉受体的N末端被Rho标签(序列号01)-myc附加表位(序列号04)的氨基酸序列修饰，并且 所述IC4结构域被置换成β I肾上腺素能受体的IC4结构域；以及将刺激所述嵌合性嗅觉受体的化学物质供至所述第I层以由所述ATP产生cAMP的工序(b)。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述小鼠来源的嗅觉受体为小鼠来源的丁子香酚识别嗅觉受体，所述化学物质为丁子香酚。3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述小鼠来源的嗅觉受体为小鼠来源的嗅觉受体01frl68，所述化学物质为2-戊酮。4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述小鼠来源的嗅觉受体为小鼠来源的嗅觉受体01frl5，所述化学物质为环己酮。5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述小鼠来源的嗅觉受体为小鼠来源的嗅觉受体01fr609，所述化学物质为香草酸。6.根据权利要求2所述的方法，其中，所述嵌合性嗅觉受体由序列号36所表示的氨基酸序列构成。7.根据权利要求3所述的方法，其中，所述嵌合性嗅觉受体由序列号51所表示的氨基酸序列构成。8.根据权利要求4所述的方法，其中，所述嵌合性嗅觉受体由序列号60所表示的氨基酸序列构成。9.根据权利要求5所述的方法，其中，所述嵌合性嗅觉受体由序列号69所表示的氨基酸序列构成。10.根据权利要求1所述的方法，其中， 所述G蛋白具备G a olf、G β及Gy， 在所述工序(b)中,所述G蛋白分离为所述Ga olf及复合体， 所述复合体由所述Gβ及所述GY构成，并且 所述G a olf将所述腺苷酸环化酶活化。11.根据权利要求1所述的方法，其中，所述脂质双层膜还具备离子通道， 所述离子通道贯穿所述脂质双层膜，并且 所述工序(b)中产生的所述cAMP将所述离子通道活化。12.根据权利要求11所述的方法，其中，所述离子通道为钙离子通道。13.一种判定试样溶液中是否含有刺激嵌合性嗅觉受体的分子的方法，其具备以下的工序: 准备具备第I层、脂质双层膜及第2层的反应体系的工序(a)， 这里，所述脂质双层膜被所述第I层及所述第2层夹持， 所述第I层及所述第2层中的至少任一层含有离子， 所述脂质双层膜具备所述嵌合性嗅觉受体、离子通道及腺苷酸环化酶， 所述嵌合性嗅觉受体贯穿所述脂质双层膜， 所述腺苷酸环化酶贯穿所述脂质双层膜， 所述离子通道贯穿所述脂质双层膜， 所述第2层含有ATP及G蛋白， 所述G蛋白配置在所述嵌 合性嗅觉受体的一端附近， 所述嵌合性嗅觉受体来自于由(N末端)-ECl结构域-TMl结构域-1Cl结构域-TM2结构域-EC2结构域-TM3结构域-1C2结构域-TM4结构域-EC3结构域-TM5结构域-1C3结构域-TM6结构域-EC4结构域-TM7结构域-1C4结构域-(C末端)的氨基酸序列所构成的小鼠来源的嗅觉受体， 所述嵌合性嗅觉受体的N末端被Rho标签(序列号01)-myc附加表位(序列号04)的氨基酸序列修饰，并且 所述IC4结构域被置换成β I肾上腺素能受体的IC4结构域； 将所述试样溶液供至所述第I层并对所述第I层及所述第2层中的至少任一层所含有的所述离子的浓度进行测定的工序(b);以及 在所述测定得到的离子的浓度发生变化时判定所述试样溶液含有所述刺激嵌合性嗅觉受体的分子的工序(C)。14.根据权利要求13所述的方法，其中，所述小鼠来源的嗅觉受体为小鼠来源的丁子香酚识别嗅觉受体，所述化学物质为丁子香酚。15.根据权利要求13所述的方法，其中，所述小鼠来源的嗅觉受体为小鼠来源的嗅觉受体01frl68，所述化学物质为2-戊酮。16.根据权利要求13所述的方法，其中，所述小鼠来源的嗅觉受体为小鼠来源的嗅觉受体01frl5，所述化学物质为环己酮。17.根据权利要求13所述的方法，其中，所述小鼠来源的嗅觉受体为小鼠来源的嗅觉受体01fr609，所述化学物质为香草酸。18.根据权利要求14所述的方法，其中，所述嵌合性嗅觉受体由序列号36所表示的氨基酸序列构成。19.根据权利要求15所述的方法，其中，所述嵌合性嗅觉受体由序列号51所表示的氨基酸序列构成。20.根据权利要求16所述的方法，其中，所述嵌合性嗅觉受体由序列号60所表示的氨基酸序列构成。21.根据权利要求17所述的方法，其中，所述嵌合性嗅觉受体由序列号69所表示的氨基酸序列构成。22.根据权利要求13所述的方法，其中， 所述G蛋白具备G a olf、G β及Gy， 在所述工序(b)中,所述G蛋白分离成所述Ga olf及复合体， 所述复合体由所述Gβ及所述GY构成，并且 所述G a olf将所述腺苷酸环化酶活化。23.根据权利要求13所述的方法，其中， 所述脂质双层膜还具备离子通道， 所述离子通道贯穿所述脂质双层膜，并且 所述工序(b)中产生的所述cAMP将所述离子通道活化。24.根据权利要求23所述的方法，其中，所述离子通道为钙离子通道。25.一种对含有在试样溶液中且刺激嵌合性嗅觉受体的化学物质进行定量的方法，其具备以下的工序(a) 工序(c...

【专利技术属性】
技术研发人员：铃木雅登，冈弘章，清中茂树，森泰生，
申请(专利权)人：松下电器产业株式会社，
类型：
国别省市：