一种检测活动性肺结核病的试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种检测活动性肺结核病的诊断试剂盒，由RNA提取缓冲液，活动性肺结核病特异的血清miRNA组合物、内参反转录引物、PCR引物以及荧光定量RT-PCR反应液构成，其中活动性肺结核病特异的血清miRNA组合物由4个差异表达的血清miRNAs组成：hsa-miR-29c、hsa-miR-22、hsa-miR-320b和hsa-miR-101。本发明专利技术采用活动性肺结核病的特异血清miRNAs组合，在血清miRNAs水平上对活动性肺结核病检测，灵敏度为90.2%、特异性为75.0%，对活动性肺结核病具有早期诊断价值，可实现对活动性肺结核病的早期预警和早期诊断。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于血清生物学标志物研究，涉及检测活动性肺结核病特异的miRNA的试剂盒，通过一种能鉴定活动性肺结核病特异的miRNA去捕获血清生物学标志物，并用有定量控制的miRNA分析，在血清中检测活动性肺结核病。
技术介绍
肺结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性肺部感染性疾病，是严重威胁人类健康的疾病。中国流行形势十分严峻；现有活动性肺结核病患者约130万例，新发病例145万例/年，每年新发病例占全球人口总数的18%，死亡人数达13万例/年，超过了其他传染病死亡人数的总和。肺结核病的高发病和死亡率，以及通过空气传播,对病人、病人所接触的事物和社会都产生相当大的负担。因此，对肺结核病患者及时早期诊断是控制传染源，遏制肺结核病流行的最重要措施。目前，临床常规应用的诊断方法均有显著缺陷，如痰涂片检测一灵敏度低；结核分支杆菌培养一阳性率低(约30%)且耗时久(长达6-8周);胸部X线检查一无肺结核病特征性改变；PCR检测一假阳性和假阴性均高；结核菌素试验一不能区分结核自然感染和卡介苗接种；血清结核抗体检测一灵敏度和特异性均不理想。因此，迫切需要发现一种特异性强的新的生物学标志物，建立快速、敏感本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测活动性肺结核病的诊断试剂盒，由RNA提取缓冲液，活动性肺结核病特异的血清miRNA组合物、内参反转录引物和PCR引物以及荧光定量RT?PCR反应液构成，其中活动性肺结核病特异的血清miRNA组合物由4个差异表达的血清miRNAs组成：hsa?miR?29c、hsa?miR?22、hsa?miR?320b和hsa?miR?101；所述的RNA提取缓冲液有：QIAzol??Lysis?Reagent、氯仿、无水乙醇、RWT溶液、RPE溶液和RNAase?free水；所述的荧光定量RT?PCR反应液，包括反转录和荧光定量PCR反应液；其中反转录反应液有：总RNA、2?μM反转录引物、5×反应...

【技术特征摘要】
1.一种检测活动性肺结核病的诊断试剂盒，由RNA提取缓冲液，活动性肺结核病特异的血清miRNA组合物、内参反转录引物和PCR引物以及荧光定量RT-PCR反应液构成，其中活动性肺结核病特异的血清miRNA组合物由4个差异表达的血清miRNAs组成hsa-miR-29c、hsa-miR-22、hsa_miR-320b 和 hsa-miR-101 ;所述的 RNA 提取缓冲液有QIAzol Lysis Reagent、氯仿、无水乙醇、RffT溶液、RPE溶液和RNAase-free水；所述的突光定量RT-PCR反应液，包括反转录和荧光定量PCR反应液；其中反转录反应液有总RNA、2剛反转录引物、5X反应缓冲液、10 mM dNTP、RNase抑制剂、反转录酶；荧光定量PCR反应液有SYBR7￥e iz 位 Taq , Tli RnaseH Plus、PCR 上游引物、PCR 下游引物、ROX ReferenceDye、模板 cDNA 和 ddH20 ； 逆转录引物序列为hsa-miR-29c :5’ -GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACTAACCG-3’，hsa-miR-22 :5’ -GTCGTATCCAGTGCAGG...

【专利技术属性】
技术研发人员：李继承，张星，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：