【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种检测结核分枝杆菌耐药性的方法，尤其涉及一种使用焦磷酸测序方法从痰标本中直接检测结核分枝杆菌对利福平耐药突变的引物和检测方法。
技术介绍
利福平是抗结核联合化疗中主要的一线药物，利福平耐药性是MDR-TB的标志物。利福平通过与RNA聚合酶的β亚单位结合阻碍了 RNA的转录和延伸。rpoB基因编码RNA聚合酶的β亚单位。90%以上结核分枝杆菌利福平耐药菌株rpoB基因的利福平耐药确定区域(Rifampin Resistance Retermining Region,RRDR)内存在遗传变异。突变类型包括单个核苷酸、缺失和插入变异。通过大量研究表明，利福平耐药结核分枝杆菌临床分离株有87种不同类型的点突变或短核苷酸的插入与缺失，突变位于507 533密码子处、编码27个氨基酸、长度为81bp的RRDR。目前，前期建立的焦磷酸测序结核杆菌利福平耐药性检测方法是从结核分枝杆菌痰标本培养物中进行检测，但结核杆菌分离培养的过程至少需时I月，严重制约了分子生物学检测手段快速的优越性，如果能从痰标本中直接进行耐药性检测，则可以大大缩短药敏结果的时间，对临床指导价...
【技术保护点】
一种焦磷酸测序技术检测结核分枝杆菌利福平耐药性的方法，其特征在于，包括以下顺序步骤：步骤1，对rpoB基因进行PCR扩增；步骤2，对PCR扩增产物进行焦磷酸测序，判断rpoB基因是否具有突变位点；其中焦磷酸测序采用SQA模式、核苷酸加样顺序为AGCT。
【技术特征摘要】
1.一种焦磷酸测序技术检测结核分枝杆菌利福平耐药性的方法，其特征在于，包括以下顺序步骤 步骤I，对rpoB基因进行PCR扩增； 步骤2，对PCR扩增产物进行焦磷酸测序，判断rpoB基因是否具有突变位点；其中焦磷酸测序采用SQA模式、核苷酸加样顺序为AGCT。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，对rpoB基因RRDR区进行焦磷酸测序。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在干，所述焦磷酸测序过程中，针对rpoB基因507 515位点和516 531位点设计引物。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核苷酸以A、G、C、T顺序循环加样16次。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对rpoB基因进行PCR扩增进行两次PCR扩增，其中第一次扩增以痰标本结核杆菌DNA提取物为模板，第二次扩增以第一次扩增PCR产物为模板。6.根据权利要求5所述的方...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑瑞娟，胡忠义，朱长太，周燕，王洁，秦莲花，
申请(专利权)人：上海市肺科医院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。