应用基于小麦EST序列的黑麦染色体特异分子标记对黑麦5R染色体进行鉴定的方法技术

本发明专利技术公开了基于小麦EST序列的黑麦5R染色体特异的分子标记，此分子标记为根据小麦染色体上的表达序列标签序列而设计的正向引物和反向引物，用于鉴定黑麦5R染色体的特异标记；应用这些分子标记对黑麦5R染色体进行鉴定的基本步骤包括：A、标记引物的选定和制备；B、标记引物的稀释；C、黑麦染色体的特异标记：C-1、模板DNA的提取，C-2、PCR扩增，C-3、扩增产物的检测，C-4、结果比对。本发明专利技术基于小麦染色体上的EST序列设计开发出了一套黑麦染色体的特异分子标记，借助此分子标记能够用普通PCR技术快速、准确的鉴定小麦遗传背景中的5R黑麦染色体，为黑麦染色体上的有益基因转移到栽培小麦背景中提供了简便有效的分子鉴定方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学和遗传育种领域，具体涉及基于小麦表达序列标签(expressed sequence tag, EST)序列设计的分子标记，以及这些分子标记在跟踪检测黑麦染色体方面的应用。
技术介绍
小麦的近缘种黑麦cereale L.)具有许多优良的性状，如根系发达、分蘖强、抗旱、耐瘠薄、耐寒、耐盐碱和酸性土壤，尤其是抗多种病害，如小麦白粉病iBlumeriagraminis f. sp. triiici)、条镑病graminis f. sp. triiici )、口十镑病(/*·triticina Eriks.)、杆镑病(/*· graminis Pers. f. sp. triiici )、月星黑糖病(TilletiaControversa Kuhn, TCK)和大麦黄矮病(Barley yellow dwarf virus, BYDV)等。因此，黑麦是对小麦进行遗传改良，拓宽小麦遗传基础，增加小麦栽培品种遗传变异的重要基因源。 黑麦中优异基因向小麦中转移的途径主要是创制一系列小麦/黑麦双二倍体、附加系、代换系和易位系。通过远缘杂交和染色体工程等手段将黑麦染色体导入到小本文档来自技高网...

【技术保护点】
应用基于小麦EST序列的黑麦染色体特异分子标记对黑麦5R染色体进行鉴定的方法，其特征步骤包括：A、分子标记的选定和制备：合成标记引物“11?MAG1242”，其正向引物序列见SEQ?ID?NO：21，其反向引物序列见SEQ?ID?NO：22；B、标记引物的稀释：将上步合成的标记引物，先用1×TE缓冲液溶解成100mmol?L?1的母液放入?20℃的冰箱中保存，使用前吸取母液用超纯水稀释成10mmol?L?1的工作液待用；其中1×TE缓冲液的配方为，10mmol?L?1?Tris?HCl与1mmol?L?1?EDTA，pH=8.0；C、黑麦染色体的特异标记：C?1、模板DNA的提取：取待测物——...

【技术特征摘要】
1.应用基于小麦EST序列的黒麦染色体特异分子标记对黒麦5R染色体进行鉴定的方法，其特征步骤包括 A、分子标记的选定和制备合成标记引物“11-MAG1242”，其正向引物序列见SEQ IDNO :21，其反向引物序列见SEQ ID NO 22 ； B、标记引物的稀释将上步合成的标记引物，先用IXTE缓冲液溶解成IOOmmolじ1的母液放入-20°C的冰箱中保存，使用前吸取母液用超纯水稀释成IOmmolじ1的工作液待用；其中 IXTE 缓冲液的配方为，IOmmol じ1 Tris-HCl 与 Immol じ1 EDTA, pH=8. 0 ； C、黒麦染色体的特异标记 C-1、模板DNA的提取取待测物——小麦与黒麦的远缘杂交后代材料，对照物0——不包含待测黑麦染色体的样品，对照物I——包含待测黑麦染色体的样品，然后利用常规DNA提取方法分别提取三者的DNA ； C-2、PCR扩增以C-1所得DNA样品为模板，利用步骤B所得工作液在PCR扩增仪中分别对待测物、对照物0及对照物I进行扩增； C-3、扩增产物的检测非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测步骤C-2所得的扩增产物，用银染法进行染色，并在凝胶成像仪上照相； C-4、结果比对将待测远缘杂交后代材料的电泳图谱分别与对照物O、对照物I的电泳图谱进行比对，如果待测远缘杂交后代材料和对照物I的电泳图谱均有...

【专利技术属性】
技术研发人员：许红星，尹冬冬，安调过，李立会，
申请(专利权)人：中国科学院遗传与发育生物学研究所，
类型：发明
国别省市：