基于黑麦EST序列的黑麦1R～7R染色体特异的分子标记及其应用制造技术

本发明专利技术公开了14个基于黑麦EST序列的黑麦1R～7R染色体特异的分子标记，这些分子标记为根据黑麦染色体上的表达序列标签(expressedsequencetag,EST)序列而设计的正向引物和反向引物，这些分子标记为用于鉴定黑麦1R～7R染色体的特异标记；应用这些分子标记对黑麦1R～7R染色体进行鉴定的基本步骤包括：A、标记引物的选定和制备；B、标记引物的稀释；C、黑麦染色体的特异标记：C-1、模板DNA的提取；C-2、PCR扩增；C-3、扩增产物的检测；C-4、结果比对。本发明专利技术基于黑麦染色体上的EST序列设计开发出了一套黑麦染色体的特异分子标记，借助这些分子标记能够用普通PCR技术快速、准确的鉴定小麦遗传背景中的1R～7R全部黑麦染色体，为黑麦染色体上有益基因转移到栽培小麦背景中提供了简便有效的分子鉴定方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学和遗传育种领域，具体涉及基于黑麦表达序列标签 (expressed sequence tag, EST)序列设计的分子标记，以及这些分子标记在跟踪检测黑麦染色体方面的应用。
技术介绍
小麦的近缘种黑麦cereale L.)具有许多优良的性状，如根系发达、分蘖强、抗旱、耐瘠薄、耐寒、耐盐碱和酸性土壤，尤其是抗多种病害，如小麦白粉病 graminis f. sp. tri tici ) > ^r M iPuccinia graminis f. sp. triiici )、口十绣病(/· triticina Eriks.)、禾干绣病(/· graminis Pers. f. sp. triiici )、月星黑種病(Tilletia Controversa Kuhn, TCK)和大麦黄矮病(Barley yellow dwarf virus, BYDV)等。因此，黑麦是对小麦进行遗传改良，拓宽小麦遗传基础，增加小麦栽培品种遗传变异的重要基因源。黑麦优异基因向小麦中转移的途径主要是创制一系列小麦/黑麦双二倍体、附加系、代换系和易位系。通过远缘杂交和染色体工程等手本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．基于黑麦ＥＳＴ序列的黑麦１Ｒ～７Ｒ染色体特异的分子标记，其特征在于：这些分子标记为根据黑麦染色体上的表达序列标签ＥＳＴ序列设计的正向引物和反向引物，这些分子标记为用于鉴定黑麦１Ｒ～７Ｒ染色体的特异标记，其碱基序列见表１，表１．　根据黑麦染色体上的表达序列标签ＥＳＴ序列设计的１４对标记引物序列其中，１－ＣＧＧ１４３标记用于鉴定黑麦１Ｒ和６Ｒ染色体；２－ＣＧＧ６２、３－ＣＧＧ８和４－ＣＧＧ９标记用于鉴定黑麦２Ｒ染色体；５－ＣＧＧ３２标记用于鉴定黑麦３Ｒ染色体；６－ＣＧＧ４９标记用于鉴定黑麦４Ｒ染色体；７－ＣＧＧ４、８－ＣＧＧ１６、９－ＣＧＧ１８、１０－ＣＧＧ１９和１１－ＣＧＧ４３标记用于鉴定黑...

【技术特征摘要】
1.基于黑麦EST序列的黑麦IR 7R染色体特异的分子标记，其特征在于这些分子标记为根据黑麦染色体上的表达序列标签EST序列设计的正向引物和反向引物，这些分子标记为用于鉴定黑麦IR 7R染色体的特异标记，其碱基序列见表1，表1.根据黑麦染色体上的表达序列标签EST序列设计的14对标记引物序列体正向引物序列 (S' -3')反向引物 -3')1-CGG143iR, etB SBQ ID NO1 1見 SBQ ID Μ) 22-CGG622S% 观 ID NO: 3BSEQ ID 43-CGG82R見卿ID ND: 5BSBQ ID NO: 64-CGG9 5-CGG3228 3R见測ID NO1 7 见卿ID NG1 9见卿ID NO^ δ 见 SEQ ID Nth 106-CGG49■见測 ID NOi 11ASEQ ID MOi 127 CGG45R见 SEKJ ID NO: 13見SEQ ID NO: 148-CGG16 9-CGG185R 58見卿 ID NDi 15 Λ 挪 ID NOi 17见SEQ ID NOi 16 Eseq id Noi is10-CGG1958見卿 ID NO1 19见SEQ ID NO 2011-CGG4358見卿 ID NO1 21見 SEQ ID NO 2212CGG23 13-CGG596K 6R% SFjQ ID 23 JL SBQ ID NO 25B SfiQ ID Wt Α 见SEQ ID NOt 2614-CGG267BE 測 ID NO: 27JiSEQ ID NO^ 28其中，1-CGG143标记用于鉴定黑麦IR和6R染色体；2_CGG62、3_CGG8和4-CGG9标记用于鉴定黑麦2R染色体；5-CGG32标记用于鉴定黑麦3R染色体；6-CGG49标记用于鉴定黑麦 4R染色体；7-CGG4、8-CGG16、9-CGG18、10-CGG19和11-CGG43标记用于鉴定黑麦5R染色体； 12-CGG23和13-CGG59标记用于鉴定黑麦6R染色体；14_CGG^标记用于鉴定黑麦7R染色体。2.应用权力要求1所述的基于黑麦EST序列的黑麦IR 7R染色体特异的分子标记对小麦背景中黑麦染色体进行鉴定的方法，其特征步骤包括A、分子标记的选定和制备根据所需鉴定的黑麦染色体选定分子标记，比如，预备检测鉴定的小麦与黑麦远缘杂交后代材料当中是否含有黑麦4R染色体，则选定6-CGG49分子标记，然后根据权利要求1给出的序列合成此标记引物；B、标记引物的稀释将上步合成的标记引物，先用IXTE缓冲液溶解成IOOmmolL—1的母液放入-20°C的冰箱中保存，使用前吸取母液用超纯水稀释成IOmmol L—1的工作液待用； 其中 IXTE 缓冲液的配方为，IOmmol Γ1 Tris-HCl 与 l...

【专利技术属性】
技术研发人员：安调过，尹冬冬，许红星，李立会，
申请(专利权)人：中国科学院遗传与发育生物学研究所，
类型：发明
国别省市：13