一种耐高糖β-葡萄糖苷酶-CBD融合酶及其表达基因和应用制造技术

一种耐高糖β-葡萄糖苷酶-CBD融合酶及其表达基因和应用，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。与现有的β-葡萄糖苷酶相比，本发明专利技术提供的融合酶（BGL-CBD）具有以下特点：（1）纤维素结合能力强，融合酶（1μg/μL）与4%wt微晶纤维素孵育30min，98%融合酶被纤维素吸附；（2）能有效降解纤维二糖，融合酶（0.15μg/μL）在8h内对10%wt的纤维二糖降解率为95%；（3）能耐高浓度的葡萄糖，其耐糖系数Ki为1000mmol/L。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程技术及生物质利用领域，具体涉及对耐高糖β-葡萄糖苷酶和纤维素结合结构域融合及其基因的重组表达与应用。
技术介绍
随着人们生产和生活水平的提高，能源、资源和环境问题日益受到关注，利用农林废弃物制备生物能源、通过生物技术改善农林产品的品质、提高产品的附加值成为科学家关注的热点，也是发展绿色经济的希望所在。β -葡萄糖苷酶(β -glucosidase,EC3. 2.1. 21)又称β -D-葡萄糖苷水解酶、龙胆二糖酶、纤维二糖酶、苦杏仁苷酶，是一种能催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键的酶(Science，2006, 311:484-489.)，因而被广泛应用纤维素水解领域。纤维素作为植物光合作用的主要多糖类物质，是地球上最为丰富的可再生资源，这在石化能源日渐枯竭的今天是一个亟待开发的天然宝库。在纤维素水解过程中，β_葡萄糖苷酶的主要作用是降解纤维二糖生成葡萄糖，从而解除酶解体系中纤维二糖对内切葡聚糖酶(EC3. 2.1. 4)和外切葡聚糖酶(EC3. 2.1. 91)活性的抑制，从而提高酶解效率并降低成本(Biotechnology Advances, 2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种耐高糖β?葡萄糖苷酶?CBD融合酶，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种耐高糖β-葡萄糖苷酶-CBD融合酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.表达权利要求1所述耐高糖β-葡萄糖苷酶-CBD融合酶的基因，其DNA序列如SEQID NO. 2 所示。3.包含权利要求2所述核苷酸序列的重组质粒。4.包含权利要求2所述核苷酸序列的重组质粒pET-BGL-CBD。5.包含耐高糖葡萄糖苷酶-CBD融合酶基因的重组质粒制备方法，其特征在于 (I)以 Thermoanaerobacterium thermosaccharoIyticum DSM571 的基因组为模板，以Pl和P2为引物进行PCR扩增，得到耐高糖β -葡萄糖苷酶基因的PCR扩增产物，所述引物为 Pl CCCCATATGTCGGACTTTAACAAGGAC,下划线表示 Nde I 位点；Ρ2 CCCGGATCCAATGGTCCTAGTGGAAATAAG,下划线表示BamH I位点，并去除终止密码子；(2 )将步骤(I)所得PCR扩增产物和pET-20b分别用Nde I和BanH I双酶切，并分别割胶回收，16°C过夜连接；将连接产物转化大肠杆菌JM109感受态...

【专利技术属性】
技术研发人员：裴建军，庞倩，赵林果，王飞，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：