一种耐高糖的β-葡萄糖苷酶Bgl4及其表达基因和应用制造技术

一种耐高糖的β-葡萄糖苷酶Bgl4及其表达基因和应用，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。本发明专利技术首次克隆并重组表达了黑曲霉菌株（Aspergillusniger）耐高糖β-葡萄糖苷酶Bgl4的基因，重组酶Bgl4的耐葡萄糖系数Ki为2mol/L。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程及酶工程
，具体涉及对黑曲霉来源的新型耐高糖^ -葡萄糖苷酶Bgl4基因克隆和重组表达及应用。
技术介绍
P -葡萄糖苷酶(P-glucosidase, EC 3. 2.1. 21)属于外切水解酶类，又称3-D-葡萄糖苷水解酶，是ー类在亲核分子间催化转移糖苷的酶，可以在短链的寡糖或纤维ニ糖内部、在带有芳香基团或烷基的碳水化合物的残基之间打断￠-1,4-糖苷键，因而被广泛应用纤维素水解等领域(Science 311:484-489.)。纤维素作为绿色植物光合作用所产生的主要生物有机体之一，与半纤维素和木质素一起作为植物的支撑组织随着农林废弃物不断再生，是地球上最丰富的可再生能源。在纤维素水解过程中，3 -葡萄糖苷酶通常不与纤维素直接作用，但是它可以降解对纤维素水解起強烈抑制作用的纤维ニ糖，同时随着水解液中葡萄糖含量的増加，同样也会对￠-葡萄糖苷酶产生強烈的抑制作用。所以发掘具有高葡萄糖耐受能力3-葡萄糖苷酶补充到现有的纤维素水解酶系中是提高酶解效率的有效方法之一。^ -葡萄糖苷酶来源相当广泛，在植物、动物和微生物都能分离纯化出来，而其中曲霉属被认为是最优良本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种耐高糖的β?葡萄糖苷酶Bgl4，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种耐高糖的β-葡萄糖苷酶Bgl4，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.权利要求1所述耐高糖的葡萄糖苷酶Bgl4的表达基因，其核苷酸序列如SEQID NO. 2所示。3.包含权利要求2所述核苷酸序列的重组质粒。4.包含权利要求2所述核苷酸序列的重组质粒pPICZa A-Bgl4。5.包含SEQID NO. 2所述基因序列的重组质粒的制备方法，其特征在于(1)设计引物Pl和P2,以黑曲霉菌株(Aspergillus,niger)的mRNA反转录的cDNA为模板，以Pl和P2为引物进行PCR扩增，得到耐高糖β -葡萄糖苷酶Bgl4基因的PCR扩增产物，所述引物为Pl :5’ -CCGGAATTCATGAAGGGCACCGCTGTCG-3’,下划线表示 EcoR I 位点；P2 :5’ -GCTCTAGATTACAACAGGACGAGTCCGGCA-3’,下划线表示 Xba I 位点；(2)将步骤(I)所得PCR扩增产物与pMD-19T克隆载体在16°C下过夜连接；将连...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵林果，谢静聪，裴建军，王飞，庞倩，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：