一种质粒DNA定量检测试剂盒制造技术

本发明专利技术首次提供了一种质粒DNA定量检测试剂盒，具有采用高准确度的超声波-同位素稀释质谱法准确定量的质粒DNA标准品，弥补了现有试剂盒不能对质粒DNA进行定量的缺点。本发明专利技术还提供了一种质粒DNA定量检测方法，分别测定不同浓度的质粒DNA标准品的荧光信号强度，绘制浓度—荧光信号强度标准曲线；然后测定待测质粒DNA样品荧光信号强度，根据所绘制标准曲线可准确计算出待测样品的DNA浓度。本方法和试剂盒首次采用标准质粒作为荧光染料法中的DNA标准进行定量，灵敏度高，可检测低至1pg的DNA；线性范围广，可检测0.25ng/mL~1000ng/mL的质粒DNA；对标准质粒采用超声波-同位素稀释质谱方法定量，得到的量值不确定度低，准确度高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生化分析领域，具体涉及一种质粒DNA荧光染料定量检测方法和检测试剂盒。
技术介绍
质粒DNA是游离于染色体外的小型(l_200kb)的共价、闭合、环状的双链DNA分子，能自主复制并能稳定遗传的遗传因子。它通常编码一些酶基因，如产生抗生素、抗生素抗性、限制酶、修饰酶等有利于宿主的酶基因。由于它分子小、能够自主复制并且稳定遗传，因此是分子生物学、基因工程技术中常用的载体。在分子生物学领域进行DNA分析时常常需要对质粒DNA进行准确定量，如进行克隆文库构建时的酶切和连接操作，以及对质粒DNA进行测序时，为了得到良好的后续实验结果，都需要对质粒DNA的浓度进行准确测定。因此对质粒DNA定量有着广泛的应用。 采用Pic0Green荧光染料法对核酸进行定量，因其方法的灵敏度高、线性范围广，因此应用非常广。然而，PicoGreen荧光染料法在对DNA进行定量时的局限性表现为，第一，方法的准确度高低取决于试剂盒中DNA标准品含量的准确度，而目前市售的试剂盒中DNA标准品的含量值均为厂家提供的一个参考值，S卩？ ng/ml，这个值一般是通过紫外吸收(0D260)确定的，该值也没有相关的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种质粒DNA定量检测试剂盒，试剂盒中具有标准品、工作液和染料，其特征为：1）所述标准品为具有准确DNA浓度定量值的环状质粒分子DNA，浓度范围是1ng/μL～300ng/μL；2）所述工作液成分为10mM?Tris?HCl，含1mM?EDTA，pH=8.0；3）所述染料是PicoGreen荧光染料。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：董莲华，孟盈，王晶，傅博强，高运华，张玲，
申请(专利权)人：中国计量科学研究院，
类型：发明
国别省市：