一种IPTG诱导猪圆环病毒2型重组Cap蛋白表达的方法技术

本发明专利技术公开了一种IPTG诱导猪圆环病毒2型（PCV2）重组Cap蛋白表达的方法，具体步骤如下：将pET28a-PCV2-ORF2原核表达载体，转化大肠杆菌DH5a，经过选择性培养、单克隆液体培养、PCR检测，选择带有目的基因的质粒；再将构建的pET28a-ORF2-DH5a质粒，转化大肠杆菌BL21(DE3)，经过选择性培养、液体培养，加入IPTG，在IPTG终浓度0.1-1.0mmlo/L条件下，10-37℃诱导猪圆环病毒2型重组Cap蛋白表达1-8小时，得到Cap蛋白。其中，最佳诱导条件为IPTG终浓度0.6mmol/L，诱导温度30℃，诱导时间6h。本发明专利技术所述的最佳诱导条件能够极大程度提高重组Cap蛋白在大肠杆菌中的表达量，为开发PCV2基因工程苗和相关研究奠定了良好的基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，属于疾病免疫

技术介绍
猪圆环病毒2型(PCV2)是引起猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原。除引起PMWS外，PCV2还能引起母猪繁殖障碍，仔猪先天性震颤等，并可能与猪皮炎肾病综合征(PDNS)呼吸道疾病复合征(PRDC)等病密切相关，还可造成一些传染病的继发感染。PCV2主要在宿主的淋巴系统增殖，可致使B淋巴细胞凋亡，影响肺泡巨噬细胞的正常功能，降低外周血中CD8+分子含量，造成免疫抑制，从而易发生混合感染和继发感染，给猪场疫病防治带来困难。目前国内外猪场普遍存在PCV2，现已对全球养猪业构成重大危害已成为危害 养猪业的又一种新的重要传染病。PCV2含有2个主要的开放式阅读框(Open reading frames，ORFs)，其中0RF2编码核衣壳蛋白(Cap蛋白)，是病毒的主要结构蛋白。Blanchard等用杆状病毒表达的PCV2核衣壳蛋白和0RF2核酸疫苗分别免疫仔猪，均可使仔猪对PCV2产生攻毒保护，且PCV2亚单位疫苗比接种DNA疫苗能产生更好的保护作用(An 0RF2 protein-based ELISA for porcine本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种IPTG诱导猪圆环病毒2型重组Cap蛋白表达的方法，其特征在于，具体步骤如下：1）将pET28a?PCV2?ORF2原核表达载体，转化大肠杆菌DH5a，经过选择性培养、单克隆液体培养、PCR检测，选择带有目的条带的菌液提取质粒；2）将提取的质粒，转化大肠杆菌BL21(DE3)，经过选择性培养、单克隆液体培养、PCR检测，选择带有目的条带的菌液，转接培养；3）在转接培养的菌液中加入IPTG，在IPTG终浓度0.1?1.0mmlo/L条件下，10?37℃诱导猪圆环病毒2型重组Cap蛋白表达1?8小时；4）取步骤3）不同条件制得的菌液，离心，弃上清液；5）在沉淀中加入loading?buffer...

【技术特征摘要】
1.一种IPTG诱导猪圆环病毒2型重组Cap蛋白表达的方法，其特征在于，具体步骤如下 1)将pET28a-PCV2-0RF2原核表达载体，转化大肠杆菌DH5a，经过选择性培养、单克隆液体培养、PCR检测，选择带有目的条带的菌液提取质粒； 2)将提取的质粒，转化大肠杆菌BL21(DE3)，经过选择性培养、单克隆液体培养、PCR检测，选择带有目的条带的菌液，转接培养； 3)在转接培养的菌液中加入IPTG，在IPTG终浓度O.1-1. Ommlo/L条件下，10_37°C诱导猪圆环病毒2型重组Cap蛋白表达1-8小时； 4)取步骤3)不同条件制得的菌液，离心，弃上清液； 5)在沉淀中加入...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴红云，徐进，王卫芳，
申请(专利权)人：郑州后羿制药有限公司，
类型：发明
国别省市：