尿苷二磷酸-葡萄糖脱氢酶的表达及酶活测定制造技术

本发明专利技术涉及尿苷二磷酸-葡萄糖脱氢酶的表达及酶活测定。本发明专利技术人将PL启动子、大肠杆菌UDP-GlcDH的基因(ugd)串联构建表达质粒，将所述表达质粒转化原核菌株，利用该菌株温度诱导表达UDP-GlcDH，并对其酶活性进行测定。采用该表达方法得到的UDP-GlcDH，表达效率高，酶活性高，酶活性保持的持续时间长。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程领域；更具体地，本专利技术涉及通过采用基因工程方法克隆并表达尿苷二磷酸-葡萄糖脱氢酶(Uridine Diphosphate Glucose Dehydrogenase,UDP-GlcDH)。
技术介绍
透明质酸(Hyaluronic Acid,HA)是由N-乙酰氨基葡萄糖与葡萄糖醛酸为双糖单位等摩尔聚合而成的酸性黏多糖，Mr多在IO4 IO7Da之间，不同的Mr具有不同的应用领域。由于HA独特的黏弹性和生理功能，HA已被广泛应用于医药、化妆品和食品领域。C组的兽疫链球菌和马疫链球菌都可以合成HA，鉴于HA在发酵液中以游离状态存在，具有易于分离纯化和工业化生产等优点，因此目前工业上主要采取发酵法获取HA。然而链球菌具有一定的致病性并含有外毒素，而且对于培养基营养条件要求苛刻，利用它发酵生产难于通过代谢调控获得不同分子量的HA等劣势已展现出来，以传统的工艺优化难以克服上述弊端，而采用基因工程手段构建工程菌表达HA则克服了上述缺点，具有成本低，便于代谢调控以及下游纯化工艺便捷等优点，已逐渐成为未来工业化生产HA的优选方法。研究表明，链球菌中的has操纵子是其表达本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组表达尿苷二磷酸？葡萄糖脱氢酶的方法，包括：(1)提供表达构建物，其从5’至3’端依次包括以下操作性连接的元件：噬菌体PL启动子，编码尿苷二磷酸？葡萄糖脱氢酶的基因ugd；(2)将(1)的表达构建物转化大肠杆菌，进行升温诱导表达，迅速升温到38？42℃，振荡培养8？15小时。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：钱悦，侯永泰，吴剑英，陈奕涵，甘人宝，周庆玮，荣绍丰，
申请(专利权)人：上海昊海生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：