一种二氢乳清酸酶法制备α-天冬氨酰小肽的方法技术

技术编号:8188158 阅读:205 留言:0更新日期:2013-01-09 23:51
本发明专利技术公开了一种二氢乳清酸酶法制备α-天冬氨酰小肽的方法。该方法包括下列步骤:采用二氢乳清酸与氨基酸酯或小二肽类酯化合物进行接肽反应,形成二氢乳清酸小肽酯类化合物;进而采用稀碱溶液水解酯键,暴露出末端羧基;利用二氢乳清酸酶水解暴露出相应羧基的二氢乳清酸小肽类化合物,形成N-氨甲酰化天冬氨酰小肽化合物;进而采用亚硝酸水解脱去氨甲酰基团即可获得α-天冬氨酰小肽类化合物。本发明专利技术方法采用二氢乳清酸环共保护天冬氨酸中的α-氨基和β-羧基,仅暴露出α-羧基,保证了接肽反应的位置专一性;同时采用酶法水解开环,避免了多数化学合成中反复的保护与脱保护步骤,操作简单,减少了副反应的发生。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种二氢乳清酸酶法制备α -天冬氨酰小肽的方法。
技术介绍
权利要求1.一种二氢乳清酸酶法制备天冬氨酰小肽(I)的方法,其特征在于该方法包括下列步骤2.根据权利要求I所述的二氢乳清酸酶法制备天冬氨酰小肽的方法,其特征在于所述的σ-天冬氨酰小肽(I)的R1基团为甘氨酸、Z或D-丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、丝氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、苏氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、氨基丁酸的残基;或者是L或D-甘氨酰_、丙氨酰_、缬氨酰_、亮氨酰_、异亮氨酰_、苯丙氨酰_、脯氨酰_、色氨酰_、丝氨酰_、酪氨酰_、半胱氨酰_、蛋氨酰_、天冬酰胺酰_、谷氨酰胺酰_、苏氨酰_、天冬氨酰_、谷氨酰_、赖氨酰_、精氨酰_、组氨酰-甘氨酸小肽的残基。3.根据权利要求I所述的二氢乳清酸酶法制备天冬氨酰小肽的方法,其特征在于步骤O中所述的氨基酸酯或小二肽类酯化合物为甘氨酸、Z或D-丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、丝氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、苏氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、氨基丁酸的酯;或者是L或D-甘氨酰_、丙氨酰_、缬氨酰_、亮氨酰_、异亮氨酰_、苯丙氨酰_、脯氨酰_、色氨酰_、丝氨酰_、酪氨酰_、半胱氨酰_、蛋氨酰_、天冬酰胺酰_、谷氨酰胺酰_、苏氨酰_、天冬氨酰_、谷氨酰_、赖氨酰_、精氨酰_、组氨酰-甘氨酸的a -酯中的任意一种。4.根据权利要求I所述的二氢乳清酸酶法制备天冬氨酰小肽的方法,其特征在于步骤I)中,所用的接肽试剂为DCC/HOBt、DIC/HOBt、DCC/HOSu和DCC/HOAt中的任意一种。5.根据权利要求I所述的二氢乳清酸酶法制备天冬氨酰小肽的方法,其特征在于步骤3)中,所述含有二氢乳清酸酶的菌体为大肠杆菌K-12 ;所述的二氢乳清酸酶为含有二氢乳清酸酶基因pET-22b(+)-DH0-his质粒的重组菌株疋coli Rosetta (DE3)所表达、纯化的二氢乳清酸酶。6.根据权利要求I所述的二氢乳清酸酶法制备天冬氨酰小肽的方法,其特征在于步3)中,所述的弱碱性条件为PH7. 5^9. 5。7.根据权利要求I所述的二氢乳清酸酶法制备天冬氨酰小肽的方法,其特征在于步骤3)中,所述的酶或湿菌体与带有末端羧基的二氢乳清酸小肽类化合物的重量比为1:广80。8.根据权利要求I所述的二氢乳清酸酶法制备天冬氨酰小肽方法,其特征在于步骤4)中,所述的亚硝酸为亚硝酸钠与稀盐酸的混合溶液;或者在稀盐酸-底物溶液中滴加亚硝酸钠 溶液。全文摘要本专利技术公开了。该方法包括下列步骤采用二氢乳清酸与氨基酸酯或小二肽类酯化合物进行接肽反应,形成二氢乳清酸小肽酯类化合物;进而采用稀碱溶液水解酯键,暴露出末端羧基;利用二氢乳清酸酶水解暴露出相应羧基的二氢乳清酸小肽类化合物,形成N-氨甲酰化天冬氨酰小肽化合物;进而采用亚硝酸水解脱去氨甲酰基团即可获得α-天冬氨酰小肽类化合物。本专利技术方法采用二氢乳清酸环共保护天冬氨酸中的α-氨基和β-羧基,仅暴露出α-羧基,保证了接肽反应的位置专一性;同时采用酶法水解开环,避免了多数化学合成中反复的保护与脱保护步骤,操作简单,减少了副反应的发生。文档编号C12P21/02GK102864196SQ20121037959公开日2013年1月9日 申请日期2012年10月9日 优先权日2012年10月9日专利技术者武红丽, 曹飞, 张煜, 薄薇, 周佳栋, 姚琴 申请人:南京工业大学本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种二氢乳清酸酶法制备α?天冬氨酰小肽(1)的方法,其特征在于该方法包括下列步骤:??1)以L?二氢乳清酸为原料,与氨基酸酯或小二肽类酯化合物在接肽试剂作用下进行接肽反应,形成L?二氢乳清酸小肽酯类化合物;2)采用稀碱溶液处理L?二氢乳清酸小肽酯类化合物,水解酯键,暴露出末端羧基;3)以二氢乳清酸酶或含有二氢乳清酸酶的菌体为催化剂,在弱碱性条件下水解暴露出末端羧基的L?二氢乳清酸小肽类化合物,形成N?氨甲酰化?α?天冬氨酰小肽化合物;4)采用亚硝酸水解脱去N?氨甲酰化?α?天冬氨酰小肽化合物的氨甲酰基团即可获得α?天冬氨酰小肽类化合物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:武红丽曹飞张煜薄薇周佳栋姚琴
申请(专利权)人:南京工业大学
类型:发明
国别省市:

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