重组人胰岛素样生长因子-2蛋白及其生产方法技术

本发明专利技术公开一种重组人胰岛素样生长因子-2蛋白及其生产方法，表达宿主BL21（DE3），载体pET32-a(+)，步骤如下：克隆hIGF2基因；构建原核表达载体；可溶性的N端带有His×6标记的Trx-hIGF2融合蛋白的表达；Trx-hIGF2融合蛋白的纯化；利用带His×6标记的肠激酶对Trx-hIGF2融合蛋白进行酶切，得高纯度的hIGF2。本发明专利技术首次用BL21（DE3）和pET32-a(+)，实现hIGF2高效可溶性融合表达；用His×6标签及肠激酶切割技术，实现在蛋白质一级结构上，与hIGF2完全相同的重组hIGF2蛋白的制备，表达产物也具有生物活性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及应用重组DNA技术生产基因工程蛋白药物技术，具体来说，涉及一种。
技术介绍
胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor, IGF)是一类多功能细胞增殖调控因子，因其化学结构与胰岛素相似而得名。人胰岛素样生长因子-2 (Human InsulinLike Growth Factor-2, hIGF2)基因由9个外显子、8个内含子组成,其转录与表达受到4个启动子调控，为一单拷贝基因，全长3kb。成熟的人IGF2蛋白由67个氨基酸残基组成，它 在胎儿发育、肿瘤细胞增殖、肌肉生长等方面具有重要的调控作用。IGF2与有促进有丝分裂 活性作用的胰岛素具有结构上的同源性，业已证明，IGF2至少在啮齿类动物中是促进有丝分裂的主要生长因子。体外细胞培养实验也已证明，IGF2是肌细胞生长过程中的自分泌信号。IGF2是一种潜在的胎儿生长激素。IGF2的表达与个体发育密切相关，IGF2的缺乏与人类身材矮小相关，它们的过度表达与肢端肥大有关，IGF2还可调节脂肪细胞的生长，从而影响个体的脂肪与肌肉比例。除此之外，IGF2还在器官的形成和分化中发挥重要作用。IGF2作本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种Trx？hIGF2融合蛋白的生产方法，其特征在于，主要包括以下步骤：（1）克隆hIGF2基因：以人肾脏细胞中提取的总mRNA为模板，先用RT？PCR扩增总cDNA，再以该cDNA为模板，用特异引物扩增出完整hIGF2基因片段，所用hIGF2特异引物中引入BamH？I酶切位点和HindIII酶切位点；回收PCR产物连接到质粒pMD20？T载体，得重组质粒hIGF2/pMD20？T，经过测序确定为读码框正确的重组载体；（2）构建原核表达载体：将表达载体pET32？a(+)和步骤（1）所得的重组质粒hIGF2/pMD20？T经Hind？III及BamH？I双酶切并纯化回收，并用T4DNA连接酶连...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴东海，李洪波，胡兴，徐爱民，李鹏，金守光，李娜，
申请(专利权)人：中国科学院广州生物医药与健康研究院，
类型：发明
国别省市：