本发明专利技术公开了一种大环内酯抗生素Macrolactin?A发酵菌及其发酵工艺，特点是该菌为ESB-2菌株，分类命名为解淀粉芽孢杆菌，保藏编号为CGMCCNo.6554，发酵工艺具体包括将解淀粉芽孢杆菌涂布于固体平板培养基上，于28.4℃，培养24h的步骤；取生长良好的平板菌种，接种于装液量为62.3%的种子培养基中，28.4℃，150r/mim培养48h的步骤；将种子液按体积分数5%的接种量接种于装液量为62.3%的发酵培养基中，于28.4℃，150r/mim培养48h的步骤；代谢产物的萃取的步骤；最后对抗生素进行分离纯化，得到产物的步骤，优点是可大幅提高大环内酯抗生素产量，提高生产效率。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物发酵
，尤其是涉及一种海洋解淀粉芽孢杆菌及其发酵生产大环内酯抗生素Macrolactin A的优化工艺。
技术介绍
大环内酯抗生素Macrolactin是一类24元环大环内酯类化合物，最早由Gustafson等从北太平洋980米深海洋分离到的一株海洋细菌中发现，目前该家族共有19个成员。其中Macrolactin A研究较多，其具有多种生物活性，可以抑制 金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、酵母菌等多种细菌，体外实验对鼠黑色素瘤细胞(B16-F10)、HeLa肿瘤细胞、HepG2肿瘤细胞具有显著细胞毒性，可有效抑制哺乳动物I型和II型单纯疱疹病毒(Herpessimplex)的复制及HIV在T淋巴细胞内的复制等。现有菌种产大环内酯抗生素Macrolactin A的效率低，产量少，已成为其进行药物开发应用的主要瓶颈。中国期刊文献，杨桥、韩文菊、张文俊等，产Macrolactin A抗生素海洋解淀粉芽孢杆菌的鉴定及发酵条件优化，药物生物技术，2009年第4期311-315页，公开了产Macrolactin A抗生素海洋解淀粉芽孢杆菌及其发酵条件优化条件，使Macrolactin A的产量达到了 18. 5 μ g/ml，产量较低，而且其发酵周期需要7天，费时较长，不利于后期的工业开发。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种可大幅提高大环内酯抗生素产量，提高生产效率的海洋解淀粉芽孢杆菌及其发酵大环内酯抗生素的优化工艺。本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为一种大环内酯抗生素Macrolactin A发酵菌，该菌为ESB-2菌株，分类命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)，保藏编号为CGMCC No. 6554，于2012年09月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。该菌株在平板培养上，菌落呈圆形，浅黄色半透明，表面光滑湿润，边缘规则，无晕环，中央凸起。一种大环内酯抗生素Macrolactin A发酵菌的发酵工艺，具体包括如下步骤(I)固体培养将低温保藏的保藏编号为CGMCC No. 6554的解淀粉芽孢杆菌涂布于固体平板培养基上，于28. 4°C，静置培养24h，其中所述的每升固体培养基的配制如下海水1L、蛋白胨12. 8mg、酵母粉lg、磷酸亚铁O. Olg、琼脂15g ；(2)种子培养取生长良好的平板菌种，接种于装液量为62. 3%的种子培养基中，于28. 4°C，150r/mim的条件下，培养48h,其中所述的每升种子培养基的配制如下海水1L、蛋白胨12. 8mg、酵母粉lg、磷酸亚铁O. Olg ；(3)发酵培养取生长良好的种子液,按体积分数5%的接种量接种于装液量为62. 3%的发酵培养基中，于28. 40C，150r/mim的条件下，培养48h，其中所述的每升发酵培养基的配制如下海水1L、蛋白胨12. 8mg、酵母粉lg、磷酸铁O. Olg ；(4)发酵液体处理代谢产物的萃取取发酵液加入等体积的乙酸乙酯充分萃取一次，收集萃取液，再取萃余液加入等体积的乙酸乙酯重复萃取一次，合并两次萃取所得萃取液，旋转蒸发至干，再次溶于lml90%的甲醇溶液中，12000r/min离心15min,取含大环内酯抗生素MacrolactinA的上清液；(5) Macrolactin A 的制备 用高效液相色谱或者逆流色谱对Macrolact in A进行分离纯化，得到大环内酯抗生素 Macrolactin A 单体。与现有技术相比，本专利技术的优点在于本专利技术一种大环内酯抗生素Macrolactin A发酵菌，该菌为ESB-2菌株，分类命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)，保藏编号为CGMCC No. 6554，于2012年09月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，该解淀粉芽孢杆菌菌种按体积分数5%的接种量接种于装液量为62. 3%的发酵培养基中，于28. 4°C, 150r/mim的条件下，培养48h,大环内酯抗生素MacrolactinA的产量达到了 20. 6 μ g/ml，此产量超过了中国期刊文献，产Macrolactin A抗生素海洋解淀粉芽孢杆菌的鉴定及发酵条件优化中报道的最高产量18. 5 μ g/ml，而且该菌的发酵时间只需两天，单日发酵产量达到了 10. 3 μ g/ml,大大提高了 Macrolactin A的发酵效率,对Macrolactin A的科学研究和后期的工业开发都具有重大意义。上述大环内酯抗生素MacrolactinA发酵菌，该菌为ESB-2菌株，分类命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，保藏编号为 CGMCC No. 6554，于 2012 年 09 月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路I号院3号。附图说明图I为解淀粉芽孢杆菌发酵产物的高效液相色谱图；图2为Macrolactin A的核磁鉴定H谱；图3为Macrolactin A的核磁鉴定C谱；图4 为 Macrolactin A 结构图。具体实施例方式以下结合附图实施例对本专利技术作进一步详细描述。具体实施例一本专利技术一种大环内酯抗生素Macrolactin A发酵菌，该菌为ESB-2菌株，该菌为ESB-2菌株，分类命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens),保藏编号为CGMCC No. 6554，于2012年09月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。该菌株在平板培养上，菌落呈圆形，浅黄色半透明，表面光滑湿润，边缘规则，无晕环，中央凸起。该解淀粉芽孢杆菌发酵生产大环内酯抗生素Macrolactin A的具体步骤如下( I)固体培养将低温保藏的保藏号为CGMCC No. 6554的解淀粉芽孢杆菌涂布于固体平板培养基上，于28. 4°C，静置培养24h，其中每升所述的固体培养基的配制如下海水1L、蛋白胨12. 8mg、酵母粉lg、磷酸亚铁O. Olg、琼脂15g ；(2)种子培养取生长良好的平板菌种，接种于装液量为62. 3%的种子培养基中，于28. 4°C，150r/mim的条件下，培养48h,其中每升所述的种子培养基的配制如下海水1L、蛋白胨12.8mg、酵母粉lg、磷酸亚铁O. Olg ；(3)发酵培养·取生长良好的种子液，按体积分数5%的接种量接种于装液量为62. 3%的发酵培养基中，于初始pH 6. 0，培养温度28. 40C，150r/mim的条件下，培养48h，其中每升所述的发酵培养基的配制如下海水1L、蛋白胨12. 8mg、酵母粉lg、磷酸亚铁O. Olg ；(4)发酵液体处理代谢产物的萃取取发酵液加入等体积的乙酸乙酯充分萃取一次，收集萃取液，再取萃余液加入等体积的乙酸乙酯重复萃取一次，合并两次萃取所得萃取液，旋转蒸发至干，再次溶于lml90%的甲醇溶液中(90%甲醇溶液中溶剂是水)，12000r/min离心15min，取含大环内酯抗生素Macrolactin A的上清液；(5) Macrolactin A 的制备用高效液相色谱或者逆流色谱对含本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种大环内酯抗生素Macrolactin?A发酵菌，其特征在于：该菌为ESB?2菌株，分类命名为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus?amyloliquefaciens），保藏编号为CGMCC?No.6554，于2012年09月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：何山，严小军，王洪强，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：
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