本发明专利技术提出了一种烟草秸秆生物有机肥发酵菌种解淀粉芽孢杆菌S4(BacillusamyloliquefaciensS4，保藏为CCTCCNo：M2010249)，它们是从烟草秸秆中在高温重烟碱条件下分离筛选出的，能够在烟碱存在的条件下生存，经培养和扩繁后，加入到废弃的烟草秸秆混合物中，在自然条件下进行固态发酵，将烟草秸秆废弃物转化为烟草秸秆生物有机肥。该烟草秸秆生物有机肥可以代替其他肥料进行烟草生产，可以增加烟叶产量、增加烟叶产值和改善烟叶评吸质量，同时也消除了烟草秸秆废弃物对环境的污染。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及的是农业生物有机肥生产技术，特别是一种固态发酵制备烟草秸杆生物有机肥的菌种制备方法。
技术介绍
烟草是一种重要的经济作物，在国民经济中具有十分重要的作用。在我国烟草种植生产过程中，长期以来以化学肥料为主，造成土壤有机质数量锐减，团聚体数量和质量下降，通气性退化，影响烟叶生产的产量和质量。另外，当烟叶采收后，在烟田中丢弃大量的废弃烟草秸杆，最长时间可达五个月，增加次年烟田病虫害，污染烟田生态环境。按照行业规定，应该集中烟草秸杆焚烧处理，但这样会增加CO2排放量，造成大气环境污染。是一种不得而为之的办法。现有技术中有借用一般农作物秸杆固体发酵技术把烟草秸杆发酵变成生物有机肥方法，但因烟草秸杆含有大量烟碱、又带有大量有害病菌和病毒，这种方法没有优选选微生物菌种，效果不好。常用的发酵细菌不适合在具有大量烟碱物质的条件下生存，不能够进行有效发酵转化，所以现有方法难于解决上述问题。如果能寻找一种耐强烟碱高温微生物，具有在大量烟碱物质的条件下生存的发酵细菌，进行固态发酵，将废弃烟草秸杆转化成一种安全的生物有机肥，部分替代化学复合肥，回填到烟田。把烟草生产中的病虫害、土壤退化、环境保护、资源利用和烟叶质量问题一并考虑，并加以利用。这样，大大地有利于改善环境。
技术实现思路
本专利技术的目的是提出一种能够在高温重烟碱条件下生存的固态发酵菌种的制备方法。将该耐温耐烟碱的固态发酵菌种经培养和扩繁后，加入到废弃的烟草秸杆混合物中，在自然条件下进行固态发酵，将烟草秸杆废弃物转化为烟草秸杆生物有机肥。具体步骤为I、菌株分离筛选从不同地区烟田的烟草秸杆中，分别取样加入到含有烟碱的葡萄糖、蛋白胨，酵母膏，无机盐的液体培养基中，在50 60°C高温下，培养48小时。将培养液稀释，涂布于含烟碱的蛋白胨，酵母膏的琼脂培养皿中，在25 35°C下，培养24 36小时。挑取单菌落，分别并同时接种到蛋白胨、酵母膏、无机盐的同一编号的液体或固体培养基中，在30°C下，培养24 30小时。提取离心上清培养液，加入链霉素、青霉素和羧甲基纤维素，在50°C下，保温18小时，测定还原糖含量，分离筛选出S4菌株。2、菌株分类鉴定及保藏根据伯捷氏手册(第七版)和16SrRNA基因顺序测定对&进行菌株的分类鉴定。&菌根据S4菌的菌落形态，细胞形态，生理生化试验和16SrRNA基因序列测定结果，S4 菌为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens S4)。该菌株于2010年9月26日保藏于中国典型培养物保藏中心，名称为解淀粉芽抱杆菌 S4 (Bacillus amy Io Ii quefaci ens S4),保藏号CCTCC NO. M 2010249),地址中国.武汉.武汉大学。该菌株的菌学特性。菌落粗糙，不透明，扩张，微带黄色，细胞直径< I μ m,杆状，着色均匀，无夹膜，运动，革氏染色呈阳性；形成芽孢，芽孢椭圆形，中生不膨大，无伴孢晶体，接触酶和氧化酶呈阳性，VP试验呈阳性，甲基红试验呈阳性，厌氧生长，可利用葡萄糖，木糖，甘露糖，L-阿拉伯糖，并产酸，水解淀粉，分解酪素；不能利用乳糖，柠檬酸盐，硝酸盐还原试验均为阳性；50°C下生长，7% NaCI下生长，PH5. 7生长，VPPH < 6阳性，VPPH > 7阴性。该菌能在烟碱存在的条件下生长。3、种子培养。以S4菌作为菌种，在种子三角瓶或发酵罐中加入培养基MD，其成分和比例如表I。表I菌株液体培养基权利要求1.一种生物有机肥发酵菌种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens )S4,其保藏编号为CCTCC No. M 2010249。2.一种生物有机肥发酵菌种的制备方法，其特征在于制备步骤为 1)、种子培养，以权利要求I、权利要求2所述的菌种短杆菌S4在种子三角瓶中进行种子培养，在种子三角瓶内加入培养基MD，种子培养条件培养基灭菌后接入斜面母种，在28 30°C下，振荡培养16 22小时，所述培养基其组成质量百分数比葡萄糖O. 7 I.0%，蛋白胨 O. 6 O. 8%,酵母膏 O. 3 O. 5%, Na Cl O. 2 O. 4%, KH2PO4 O O. 2% 其余为水，将PH调至6. 7 8. O ； 2)、扩繁培养，在发酵罐中加入培养基MD，灭菌后按照发酵罐培养基MD的3 8%体积比接入上述培养物混合后作种子，扩繁培养条件罐压为O. 4 O. 6Mpa，罐温为28 30°C，空气流量为O. 3 O. 6 (v/v/min)，搅拌器转速为200rpm，扩繁培养18 24小时，当培养液的OD值为0D600nm下降O. 02时终止发酵； 3)、产品培养,在大型发酵罐中加入培养基MD，灭菌后按照发酵罐培养基的3 8%体积比接入扩繁培养的培养物作液体种子，产品培养条件罐压为O. 4 O. 6Mpa，罐温为28 30°C，空气流量为O. 3 O. 6 (v/v/min)，搅拌器转速为140 200rpm，产品培养18 24小时；当培养液的OD值为0D600mn下降O. 02时终止发酵； 4)、将上述发酵培养物经膜滤浓缩I 8倍,检测得液态菌剂；或将上述发酵培养物经膜滤浓缩I 8倍后，加入分散剂，进一步干燥得固态菌剂产品。3.根据权利要求I或2的一种生物有机肥发酵菌种的使用方法，其特征是能够单独使用，或者与短杆菌01菌联合使用，联合使用时的比例为短杆菌D1菌解淀粉芽孢杆菌S4菌=1 4: I。全文摘要本专利技术提出了一种烟草秸秆生物有机肥发酵菌种解淀粉芽孢杆菌S4(BacillusamyloliquefaciensS4，保藏为CCTCCNoM2010249)，它们是从烟草秸秆中在高温重烟碱条件下分离筛选出的，能够在烟碱存在的条件下生存，经培养和扩繁后，加入到废弃的烟草秸秆混合物中，在自然条件下进行固态发酵，将烟草秸秆废弃物转化为烟草秸秆生物有机肥。该烟草秸秆生物有机肥可以代替其他肥料进行烟草生产，可以增加烟叶产量、增加烟叶产值和改善烟叶评吸质量，同时也消除了烟草秸秆废弃物对环境的污染。文档编号C05F11/08GK102943051SQ20121012542公开日2013年2月27日 申请日期2010年10月27日 优先权日2010年10月27日专利技术者高勇, 陈家任, 杨树, 祖秉桥, 李锡宏 申请人:中国烟草总公司湖北省公司本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种生物有机肥发酵菌种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus?amyloliquefaciens?)S4，其保藏编号为：CCTCC?No.M?2010249。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：高勇，陈家任，杨树，祖秉桥，李锡宏，
申请(专利权)人：中国烟草总公司湖北省公司，
类型：发明
国别省市：
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