本发明专利技术公开了一种施罗氏弧菌多重毒力因子GeXP快速检测试剂盒和检测方法。它是先提取施罗氏弧菌的基因组DNA，以其作为模板，用13对多基因PCR引物和一对通用引物进行多重PCR扩增得到多重PCR反应产物，利用GenomeLab?GeXP遗传分析系统对其进行检测分析。本发明专利技术针对已知13个施罗氏弧菌毒力基因设计特异性引物，通过单管反应，一次性快速高效的检测13种基因而得知检测出样品中是否含有携带毒力基因、具有潜在致病能力的施罗氏弧菌，其检测覆盖面广，可大大提高施罗氏弧菌检测的准确性。对珊瑚白化现象的防治提供一定的理论基础，对进一步保护我国珊瑚岛屿，防止其进一步退化具有重要的现实意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种专用于可导致珊瑚发生白化现象的病原弧菌一施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)的快速检测试剂盒和检测方法。
技术介绍
施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)是一种海洋弧菌,能够侵染珊瑚，引起珊瑚的细菌性白化。目前，施罗氏弧菌的检测方法主要是传统的微生物分类鉴定方法及依赖于PCR技术的检测方法。传统的微生物分类和鉴定方法主要是以微生物的形态学和生理生化等特 性作为判断依据，虽然结果可信度高，但是繁琐且费时。现阶段采用最多的还是分子生物学的方法，其主要依赖于PCR技术对某些特异性的基因进行扩增。可是这些方法都存在一定的缺陷(I)检测耗时，过程繁琐；(2)检测灵敏度低，检测出病原菌时往往是发病晚期；检测的目标基因过于单一，容易漏检由于环境差异导致的同种不同菌株，不能全面反应该种病原菌的潜在致病性。因此，在做病原细菌的检测时，只有同时检测尽可能多的特异基因，才能使检测结果更加具有可靠性，对病原细菌的鉴定更加准确。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是提供一种更为快速准确地评价施罗氏弧菌(Vibrioshilonii)致病性的施罗氏弧菌多重毒力因子GeXP快速检测试剂盒。本专利技术的施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)多重毒力因子GeXP快速检测试剂盒，包括PCR反应试剂，多基因PCR引物和GeXP多重扩增反应试剂，其特征在于，所述的多基因PCR引物包括13对多基因PCR引物和一对通用引物，具体如下含有荧光标记的通用引物对序列，可按常规技术将荧光标记加到下述通用引物序列上，所述的荧光标记优选为CY5荧光标记TY-F: 5，-AGGTGACACTATAGAATA-3，TY-B: 5，-GTACGACTCACTATAGGGA-3，为毒力基因sod(NCBI Reference Sequence:NZ_ABCH01000140. I)设计的引物，扩增片段大小约为IlObp sod-F AGGTGACACTATAGAATA CCGTTCATGTAGTCTGGACGsod-R GTACGACTCACTATAGGGA GCAGCGACTCCACTAACAGA为毒力基因fldA(NCBI Reference Sequence:NZ_ABCH0100015l. I)设计的引物，扩增片段大小约为117bp fIdA-F AGGTGACACTATAGAATA ACGTGACATCGTTGAAGCAAfldA-R GTACGACTCACTATAGGGA AGGCCAACGAATTGTGACTC为毒力基因ompUL(GenBank:EU727214. I)设计的引物，扩增片段大小约为124bp ompUL-F AGGTGACACTATAGAATA TTGGTGCGGGTTATCAGCTAompUL-R GTACGACTCACTATAGGGA CGAATACGGTCTGTTAGGTCG为毒力基因toxS(GenBank:EU727211. I)设计的引物，扩增片段大小约为131bp toxS-F AGGTGACACTATAGAATA CGCGGATATATTCACCACCTtoxS-R GTACGACTCACTATAGGGA CAATGAATGGCAATCCAACA为毒力基因Bcp(NCBIReference Sequence:NZ_ABCH01000011. I)设计的引物，扩增片段大小约为138bp Bcp-F AGGTGACACTATAGAATA AACGTTGTGAGCGTCAAGCBcp-R GTACGACTCACTATAGGGA GGCAACACCGTCACACTACA 为毒力基因dnaj (GenBank:ΑΒ263067· I)设计的引物，扩增的片段大小约为145bp dnaJ-F AGGTGACACTATAGAATA ATTCGGTGATATCTTTGGCGdnaJ-R GTACGACTCACTATAGGGA CTCAACGAGCGTTGGAACTT为毒力基因mshA (GenBank:NZ_ABCH01000011. I)设计的引物，扩增片段大小约为152bp mshA-F AGGTGACACTATAGAATA CTGAGCGACGGTTATCAACAmshA-R GTACGACTCACTATAGGGA ATGGTCACGTTAGTTTGCCC为毒力基因z2z3 (GenBank:AF009900. I)设计的引物，扩增片段大小约为159bp z2z3-F AGGTGACACTATAGAATA CTCTCATTGGTTAGCCCTCGz2z3-R GTACGACTCACTATAGGGA ATCATCGGAAGATCAGCGTC为毒力基因fimA(NCBI Reference Sequence:NZ_ABCH01000010. I)设计的引物，扩增片段大小约为166bp fimA-F AGGTGACACTATAGAATA AGCTGTGGTTGATTGGCTCTfimA-R GTACGACTCACTATAGGGA TACCGTTACTGGTGGTGCAA为毒力基因pyrH(GenBank:JN039147. I)设计的引物，扩增片段大小约为173bp pyrH-F AGGTGACACTATAGAATA GACCGTATGGCACAAGAGGTpyrH-R GTACGACTCACTATAGGGA CGCATAGCTAGGCCATTCAT为毒力基因toxRL(GenBank:EU727208. I)设计的引物，扩增片段大小约为180bp toxRL-F AGGTGACACTATAGAATA ACTACGACCATTGCCCAAACtoxRL-R GTACGACTCACTATAGGGA TAGTGTTGAGCGCTCTGTGC为毒力基因rpoA(GenBank:AJ842695. I)设计的引物，扩增片段大小约为187bp rpoA-F AGGTGACACTATAGAATA ACGTGTTGAGCAGCGTACTGrpoA-R GTACGACTCACTATAGGGA AATAGGATCGAACTCCGGCT为毒力基因recA(GenBank:AJ580887. I)设计的引物，扩增片段大小约为195bp recA-F AGGTGACACTATAGAATA ACCATGGACGTTGAAACCATrecA-R GTACGACTCACTATAGGGA GGCATGTTCTGCATCGATAA。本专利技术的第二个目的是提供施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)多重毒力因子GeXP快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤提取施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)的基因组DNA，以其作为模板，用上述13对多基因PCR引物和I对通用引物进行多重PCR扩增得到多重PCR反应产物，利用GenomeLabGeXP遗传分析系统对多重PCR反应产物进行检测分析。如果能扩增到相应的PCR产物，则证明该施罗氏弧菌具有相应的毒力基因。本专利技术的施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)多重毒力因子GeXP快速检测方法是用于非诊断目的的。所述的以施罗氏弧菌(Vibrio shilon本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种施罗氏弧菌(Vibrio？shilonii)多重毒力因子GeXP快速检测试剂盒，包括PCR反应试剂，多基因PCR引物和GeXP多重扩增反应试剂，其特征在于，所述的多基因PCR引物包括13对多基因PCR引物和一对通用引物，具体为：为毒力基因sod设计的引物sod？F：AGGTGACACTATAGAATA？CCGTTCATGTAGTCTGGACGsod？R：GTACGACTCACTATAGGGA？GCAGCGACTCCACTAACAGA为毒力基因fldA设计的引物fldA？F：AGGTGACACTATAGAATA？ACGTGACATCGTTGAAGCAAfldA？R：GTACGACTCACTATAGGGA？AGGCCAACGAATTGTGACTC为毒力基因ompUL设计的引物ompUL？F：AGGTGACACTATAGAATA？TTGGTGCGGGTTATCAGCTAompUL？R：GTACGACTCACTATAGGGA？CGAATACGGTCTGTTAGGTCG为毒力基因toxS设计的引物toxS？F：AGGTGACACTATAGAATA？CGCGGATATATTCACCACCTtoxS？R：GTACGACTCACTATAGGGA？CAATGAATGGCAATCCAACA为毒力基因Bcp设计的引物Bcp？F：AGGTGACACTATAGAATA？AACGTTGTGAGCGTCAAGCBcp？R：GTACGACTCACTATAGGGA？GGCAACACCGTCACACTACA为毒力基因dnaJ设计的引物dnaJ？F：AGGTGACACTATAGAATA？ATTCGGTGATATCTTTGGCGdnaJ？R：GTACGACTCACTATAGGGA？CTCAACGAGCGTTGGAACTT为毒力基因mshA设计的引物mshA？F：AGGTGACACTATAGAATA？CTGAGCGACGGTTATCAACAmshA？R：GTACGACTCACTATAGGGA？ATGGTCACGTTAGTTTGCCC为毒力基因z2z3设计的引物z2z3？F：AGGTGACACTATAGAATA？CTCTCATTGGTTAGCCCTCGz2z3？R：GTACGACTCACTATAGGGA？ATCATCGGAAGATCAGCGTC为毒力基因fimA设计的引物fimA？F：AGGTGACACTATAGAATA？AGCTGTGGTTGATTGGCTCTfimA？R：GTACGACTCACTATAGGGA？TACCGTTACTGGTGGTGCAA为毒力基因pyrH设计的引物pyrH？F：AGGTGACACTATAGAATA？GACCGTATGGCACAAGAGGTpyrH？R：GTACGACTCACTATAGGGA？CGCATAGCTAGGCCATTCAT为毒力基因toxRL设计的引物toxRL？F：AGGTGACACTATAGAATA？ACTACGACCATTGCCCAAACtoxRL？R：GTACGACTCACTATAGGGA？TAGTGTTGAGCGCTCTGTGC为毒力基因rpoA设计的引物rpoA？F：AGGTGACACTATAGAATA？ACGTGTTGAGCAGCGTACTGrpoA？R：GTACGACTCACTATAGGGA？AATAGGATCGAACTCCGGCT为毒力基因recA设计的引物recA？F：AGGTGACACTATAGAATA？ACCATGGACGTTGAAACCATrecA？R：GTACGACTCACTATAGGGA？GGCATGTTCTGCATCGATAA含有荧光标记的通用引物对序列，可按常规技术将荧光标记加到通用引物序列上：TY？F:5’？AGGTGACACTATAGAATA？3’TY？B:5’？GTACGACTCACTATAGGGA？3’。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈偿，高磊，任春华，胡超群，
申请(专利权)人：中国科学院南海海洋研究所，
类型：发明
国别省市：
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