【技术实现步骤摘要】
：本专利技术属水产养殖生物，更具体地说，涉及基因单核苷酸多态性(snp)的检测，特别涉及一种凡纳滨对虾羧肽酶b(lv-cpb)基因与该基因上3个引起饲料利用率差异的snp分子标记，及其扩增引物和检测方法，和该分子标记与检测方法在高饲料利用率亲虾个体鉴定、群体选育和品系维持方面的应用。
技术介绍
1、凡纳滨对虾(litopenaeus vannamei)俗称南美白对虾，是世界第一养殖对虾品种。在我国，凡纳滨对虾年产量已达到210万吨，占全国养殖对虾总产量90％。饲料成本是凡纳滨对虾养殖最主要的组成部分，占养殖总成本60％左右。如何降低养殖凡纳滨对虾的饲料系数、提高饲料利用率，将决定凡纳滨对虾养殖成本的高低，以及养殖的经济效益。因此，培育饲料系数低、饲料利用率高的凡纳滨对虾品系，对凡纳滨对虾种业发展具有重要意义。
2、羧肽酶(carboxypeptidase，cp)是一种专一性地从肽链的c端逐个降解、释放游离氨基酸的一类肽链外切酶，其中羧肽酶b(cpb)水解碱性氨基酸形成的羧基末端，主要帮助消化食物。在凡纳滨对虾中，cpb对饲料中蛋白质成分的有效消化和蛋白质利用起到非常重要的作用，胃肠道cpb的活性与饲料利用率高低关系密切。
3、随着现代生物技术和遗传学技术在水产领域的快速转化，以性状相关功能基因为基础的分子标记技术成为水产遗传育种的关键技术之一。snp作为一种遗传标记，具有发生频率高、能稳定遗传、易进行自动化检测等优点，并且在不同物种、不同品种间snp分布都存在差异。而在水产动物种苗繁育和遗传育种中，snp
技术实现思路
1、本专利技术的第一个目的是提供一种凡纳滨对虾lv-cpb基因及其上3个可以区分凡纳滨对虾饲料利用率高低的snp分子标记。
2、本专利技术发现凡纳滨对虾个体lv-cpb基因(其核苷酸序列如seq id no.1所示)在335位点存在多态性，该位点从c到t的突变，会引起编码蛋白第112位氨基酸发生从丙氨酸(a)到缬氨酸(v)的错义突变；在640位点存在多态性，该位点从g到a的突变，会引起编码蛋白第241位氨基酸发生从缬氨酸(v)到异亮氨酸(i)的错义突变；在1253位点存在多态性，该位点从g到c的突变，会引起编码蛋白第418位氨基酸发生从精氨酸(r)到脯氨酸(p)的错义突变。
3、当335位点为t/t纯合时，对虾饲料利用率最高，c/t杂合时次之，c/c纯合时最低；当640位点为a/a纯合时，对虾饲料利用率最高，g/a杂合时次之，g/g纯合时最低；当1253位点为c/c纯合时，对虾饲料利用率最高，g/c杂合时次之，g/g纯合时最低。
4、因此，本专利技术提供了区分凡纳滨对虾饲料利用率高低的snp分子标记，其位于凡纳滨对虾lv-cpb基因的335位点、640位点和1253位点处，335位点突变类型为c/c、c/t、t/t，640位点突变类型为a/a、g/a、g/g，1253位点突变类型为c/c、g/c、g/g。
5、本专利技术的第二个目的是提供上述lv-cpb基因上3个snp分子标记在制备区分凡纳滨对虾饲料利用率中的应用。
6、优选是应用在凡纳滨对虾高效利用饲料亲虾个体鉴定、群体选育和品系维持方面。
7、本专利技术的第三个目的是提供一对用于扩增凡纳滨对虾lv-cpb基因的引物，其特征在于，所述引物lv-cp-f、lv-cp-r序列为：
8、lv-cp-f：atgaggttcctggtcgttct
9、lv-cp-r：ctaaggcgtgcggtagttgt。
10、本专利技术的第四个目的是提供一种上述饲料利用率性状相关snp位点的检测方法，包括以下步骤：a、提取待测凡纳滨对虾rna并反转录为cdna；b、利用上述引物lv-cp-f和lv-cp-r，对待测凡纳滨对虾的cdna进行pcr扩增；c、对扩增产物进行测序，通过测序序列分析确定3个snp位点的基因型。
11、本专利技术的第五个目的是提供一种凡纳滨对虾羧肽酶b基因，其核苷酸序列如seqid no.1所示。
12、本专利技术提供了凡纳滨对虾lv-cpb基因及其上3个可以区分饲料利用率高低的snp位点。通过对凡纳滨对虾lv-cpb基因进行测序，可以简单、快速、低成本、精准的检测这些位点的多态性形式，有利于快速筛选高饲料利用率凡纳滨对虾亲虾个体、选育群体和品系。
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1.一种区分凡纳滨对虾饲料利用率高低的SNP分子标记，其特征在于，位于凡纳滨对虾lv-CPB基因的335位点、640位点和1253位点处，335位点突变类型为C/C、C/T、T/T，640位点突变类型为A/A、G/A、G/G，1253位点突变类型为C/C、G/C、G/G，所述的凡纳滨对虾lv-CPB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.权利要求1所述的SNP分子标记在区分凡纳滨对虾饲料利用率中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，是应用在凡纳滨对虾高效利用饲料亲虾个体鉴定、群体选育和品系维持方面。
4.一对用于扩增凡纳滨对虾lv-CPB基因的引物，其特征在于，所述引物lv-CP-F、lv-CP-R序列为：
5.一种权利要求1所述的区分凡纳滨对虾饲料利用率高低的SNP分子标记的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：a、提取待测凡纳滨对虾RNA并反转录为cDNA；b、利用上述引物lv-CP-F和lv-CP-R，对待测凡纳滨对虾的cDNA进行PCR扩增；c、对扩增产物进行测序，通过测序序列分析确定3个SNP位点的
6.一种凡纳滨对虾羧肽酶B基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
...【技术特征摘要】
1.一种区分凡纳滨对虾饲料利用率高低的snp分子标记，其特征在于，位于凡纳滨对虾lv-cpb基因的335位点、640位点和1253位点处，335位点突变类型为c/c、c/t、t/t，640位点突变类型为a/a、g/a、g/g，1253位点突变类型为c/c、g/c、g/g，所述的凡纳滨对虾lv-cpb基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。
2.权利要求1所述的snp分子标记在区分凡纳滨对虾饲料利用率中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，是应用在凡纳滨对虾高效利用饲料亲虾个体鉴定、群体选育和品系维持方面...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈廷，任春华，江晓，胡超群，张吕平，程开敏，张鑫，罗鹏，王艳红，吴玉刚，刘丽燕，
申请(专利权)人：中国科学院南海海洋研究所，
类型：发明
国别省市：
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