【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于海洋生物，具体涉及一种无损伤获取凡纳滨对虾微量组织样品并快速提取基因组dna方法。
技术介绍
1、凡纳滨对虾(litopenaeus vannamei)，又称南美白对虾，隶属于节肢动物门，甲壳纲，十足目，对虾科，滨对虾属。凡纳滨对虾是优质的水产蛋白源食品，是世界和我国养殖面积最大、产量最高的对虾种类，因此凡纳滨对虾的养殖在水产养殖中占据重要地位。种业是农业的“芯片”，凡纳滨对虾种业居于整个产业链的最前端，对于整个对虾产业的发展具有引领的作用，培育具有优良性状的对虾新品种是对虾种业的核心环节。传统的水产育种主要采用基于表型性状筛选的群体选育和家系选育方法，分子生物学和基因组学的发展和普及，推动了对虾育种进入分子遗传育种时代。
2、在对虾分子遗传育种等工作中，通常需要精准地通过分子标记从大量育种群体中筛选出具有某种标记的个体用作育种亲本材料，或者通过对育种材料遗传聚类决定对虾亲本的配组，这些都需要在无损伤的情况下获取凡纳滨对虾组织样品，并提取足够量的dna用于上述分析，目前均缺乏无损伤获取凡纳滨对虾组织样品并快速提取基因组dna的研究报道。在水生动物中，已经建立较完善的无损或者低损伤提取鱼类组织dna的方法，如：刮取体表粘液，抽血，剪鳍条等。对虾隶属于无脊椎动物、甲壳纲，体型小，且具有完全不同于鱼类的身体结构特征，上述适用于鱼类的无损或者低损伤提取鱼类组织dna的方法均不适用于对虾。因此，需要开发出适用于对虾的无损伤获取组织样品并提取基因组dna方法。
技术实现思路>
1、本专利技术的目的是提供一种无损伤获取凡纳滨对虾微量组织样品并快速提取基因组dna方法，为凡纳滨对虾分子遗传育种奠定技术基础。
2、为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、一种无损伤获取凡纳滨对虾微量组织样品并快速提取基因组dna方法，包括以下步骤：
4、(1)以干净海水湿润的毛巾包裹对虾，仅留尾部露出；
5、(2)以纳米棉签从对虾肛门处深入2～4mm，顺时钟转动纳米棉签2～4圈；
6、(3)取出纳米棉签，将纳米棉签头没入装有ddh2o的灭菌离心管中，棉签头压触管壁，正时针、逆时针分别旋转3～5圈，再次压触管壁，挤干水份；
7、(4)轻轻挤压对虾腹部2～4次，以使肛门处再次充盈肛肠内容物及粘液；
8、(5)重复步骤(2)～(4)1～3次，以灭菌剪刀剪断纳米棉签头，并将棉签头留置于离心管中；
9、(6)将装有微量组织样品的离心管置于旋涡振荡器上，涡旋振荡20～30sec；
10、(7)于离心机中离心，取出样品离心管，放置于低温预冷的金属离心管盒，速冻20～30min；
11、(8)取出速冻样品，置于金属恒温仪中保温，裂解8～12min，取出离心管，再次涡旋振荡20～30sec；
12、(9)于离心机中离心，吸取上清液于灭菌离心管中，即为提取的对虾组织基因组dna。
13、优选的，步骤(7)中，所述离心的条件为5000～8000rpm离心1min。
14、优选的，步骤(7)中，所述低温预冷的温度为-20℃。
15、优选的，步骤(8)中，所述离心的条件为8000～12000rpm离心1min。
16、优选的，步骤(8)中，所述保温的温度为80℃。
17、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
18、(1)以往在不杀死对虾的情况下，采集对虾样品，常用对虾的触须或附肢末端，剪取触须或附肢尾端均对对虾产生不同程度的损伤。本专利技术从对虾肛门处取肛肠内容物及粘液样品，对对虾不产生任何损伤，肛肠内容物及粘液中已经包含了足够的对虾脱落的组织细胞样品，而以往的研究中均未发现这一特征，忽略了这一潜在的取样部位。
19、(2)触须或附肢末端角质化严重，难以破碎，且提取的dna不容易成功，肛肠内容物及粘液包含了对虾脱落的组织细胞样品，相对于触须或附肢更容易提取出基因组dna。
20、(3)对虾基因组dna提取中不添加任何化学试剂，不采用任何基因组dna提取试剂盒，因此极大地减少了试剂成本。
21、(4)无需使用对虾基因组dna提取试剂盒，操作简单、快速，因此极大地减少了基因组dna提取时间。
22、(5)从肛门处获取的肛肠内容物及粘液样品不仅可以用于提取对虾基因组dna，也可以提取出感染肝胰腺或者肠道的病原的dna，因此可用于对虾病害的分子检测以及对虾抗病性状的检测。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种无损伤获取凡纳滨对虾微量组织样品并快速提取基因组DNA方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的无损伤获取凡纳滨对虾微量组织样品并快速提取基因组DNA方法，其特征在于，步骤(7)中，所述离心的条件为5000～8000rpm离心1min。
3.根据权利要求1所述的无损伤获取凡纳滨对虾微量组织样品并快速提取基因组DNA方法，其特征在于，步骤(7)中，所述低温预冷的温度为-20℃。
4.根据权利要求1所述的无损伤获取凡纳滨对虾微量组织样品并快速提取基因组DNA方法，其特征在于，步骤(8)中，所述离心的条件为8000～12000rpm离心1min。
5.根据权利要求1所述的无损伤获取凡纳滨对虾微量组织样品并快速提取基因组DNA方法，其特征在于，步骤(8)中，所述保温的温度为80℃。
【技术特征摘要】
1.一种无损伤获取凡纳滨对虾微量组织样品并快速提取基因组dna方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的无损伤获取凡纳滨对虾微量组织样品并快速提取基因组dna方法，其特征在于，步骤(7)中，所述离心的条件为5000～8000rpm离心1min。
3.根据权利要求1所述的无损伤获取凡纳滨对虾微量组织样品并快速提取基因组dna方法，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：罗鹏，尹佳悦，李活，王艳红，张吕平，胡超群，张鑫，陈廷，江晓，任春华，
申请(专利权)人：中国科学院南海海洋研究所，
类型：发明
国别省市：
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