肿瘤的早期检测是患有肿瘤（包括胃肿瘤）的患者存活的主要决定因素。GTM基因家族成员在胃肿瘤组织和其它肿瘤组织中过表达，因此其可以用作胃癌和其它类型癌症的标记物。GTM蛋白质可以从癌细胞中释放出来，并在血清和/或其它体液中达到足够高的浓度从而得以检测它们。因此，用于GTM检测和定量的方法和检测试剂盒能够提供胃癌诊断的有价值的工具。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及癌症的检测。具体而言，本专利技术涉及用于癌症检测的遗传标记物和/或蛋白质标记物的用途，并且更加具体而言涉及到遗传标记物和/或蛋白质标记物用于胃 癌检测的用途。
技术介绍
癌症的早期检测和治疗能显著提高癌症患者的存活。以胃癌为例，诊断为疾病早期的患者5年存活率为90%，而诊断为疾病晚期的患者5年存活率约为10%。然而，绝大多数胃癌患者通常处于疾病晚期。因此，开发胃癌早期诊断方法能够改善患者的预后。在包括体液如血液、尿液、腹膜灌洗液和粪便提取物在内的生物标本中的特异性癌症相关标记物的鉴定能提供有价值的癌症早期诊断方法，以便早期治疗并改善预后。特异性癌症标记物还能提供用于监测疾病进展的方法，从而能跟踪外科手术、放射治疗和化学治疗的功效。然而，对于许多主要癌症，可利用的标记物缺乏足够的敏感性和特异性。例如，用于胃癌的最常用标记物cal9_9、ca72_4和癌胚抗原(CEA)仅检测到大约15-50%的任何阶段的胃肿瘤，对于疾病早期的检测则降至大约2-11%。因此，出现假阴性检测的频率非常高，这导致患者和健康护理工作者认为不存在疾病，而事实上，患者可能患有严重的需要立即注意的癌症。而且，使用这些标记物可能对高达1/3的患有良性胃疾病个体给出假阳性信号。专利技术简述因此，迫切需要更好的检测癌症存在的方法。本专利技术方面提供了能够检测早期癌症和降低假阳性和假阴性测试结果频率的方法、成分和装置。在某些实施方案中，可以使用分子分析来鉴定与非恶性胃组织相比在胃肿瘤组织中过表达的基因。此分析包括微阵列和定量聚合酶链反应(qPCR)方法。癌基因和由那些基因编码的蛋白质在本文中称作胃肿瘤标记物(GTM)。需要理解的是术语GTM并不要求标记物仅仅对于胃肿瘤是特异的。而是应当解释为GTM可以在包括恶性或非恶性肿瘤在内的其他类型肿瘤中表达增加，其中所述肿瘤除此之外包括胃癌、膀胱癌、结肠直肠癌、胰腺癌、卵巢癌、皮肤癌(例如黑素瘤)、肝癌、食道癌、子宫内膜癌和脑癌。无论如何应当这样理解，即术语GTM不包括在先技术标记物cal9-9、ca72_4和CEA。一些GTM的过表达足以高度可靠地诊断胃癌，而且在其它情况下，两种或多种GTM的过表达能提供胃癌的可靠诊断。在某些实施方案中，可以用微阵列方法来检测一种或多种癌相关基因的过表达模式。在其它实施方案中，可以用定量聚合酶链反应(qPCR)来鉴定肿瘤或其它生物样品中过表达标记物的存在。在本文公开的一些GTM检测的实施方案中，GTM在肿瘤细胞内以高度选择方式过表达而在非肿瘤细胞即使表达也是很少，从而能够只检测一种过表达的GTM来对癌症进行敏感和精确检测。在其它实施方案中，可以在样品中检测两种、三种或更多GTM的过表达并从而能提供更大的诊断确定性。所选择基因编码的蛋白质能够被细胞分泌出来或从细胞中穿透出来。这些蛋白质可以单独或彼此联合用作诊断胃癌的血清或体液标记物或者作为监测所确定疾病进展的标记物。可以使用本领域已知的方法开展蛋白质标记物的检测，并且所述方法包括单克隆抗体、多克隆抗血清等的使用。·附图简述关于其特定实施方案和图在本专利技术中进行了描述，其中图I描述了本专利技术的胃癌标记物及其寡核苷酸序列列表。图2描述了用微阵列方法进行研究获得的结果列表。图3描述了用定量PCR进行研究获得的结果列表。图4a_4d描述了用微阵列方法和qPCR方法获得的倍数的log2数值结果之间的关系，其中对于四种胃癌标记物数据集中于中间的正常值。灰色方块对应非恶性肿瘤(“正常”)样品，而黑色三角对应肿瘤样品。图4a =ASPN0图4b =SPPl0图4c :SPARC。图4d MMP12。图5a_5w描述了显示从定量PCR研究获得的多种肿瘤标志物的相对频率对变化倍数的 log2 数值的柱状图。图 5a =ASPN ;图 5b :CST1、2 和 4 ;图 5c CSPG2 ;图 5d IGFBP7 ;图5e :INHBA ;图 5f L0XL2 ;图 5g :LUM ;图 5h SFRP4 ;图 5i :SPARC ;图 5j SPP1 ;图 5k THBS2 ；图 51 TIMP1 ;图 5m adlican ;图 5n PRS11 ;图 5o ASAH1 ;图 5p SFRP2 ;图 5q :GGH ;图 5r MMP12 ;图 5s KLK10 ;图 5t =LEPREl ;图 5u :TG ;图 5v EFEMP2 和图 5w TGFBL·图6是显示表达高于中间正常表达的第95百分位数的肿瘤标记物数量的柱状图。结果以qPCR数据为基础并分别显示了每一份肿瘤样品的结果。图7a_7c描述了与肿瘤标记物CEA基因表述相比，在单个肿瘤样品和非恶性肿瘤样品中标记物的相对的log2表达图。CEA是当前最常用的用于监测胃癌进展的血清标记物。图8显示的是图3的补充列表。图8总结了用qPCR检测候选肿瘤标记物的表达水平，但是使用的是配对数据(即肿瘤(“T”)和非恶性肿瘤(“N”)样品来自同一个体)从而提供T : N比。图8还包括了图3中未包括的其它标记物，即丽 2，061 11，丁6 81，？051(5，SERPINB5, SERPINH1。为了比较，也显示了已经建立的血清标记物基因CEACAM5 (CEA)的表达水平。在29个标记物中有27个具有高于或等于CEA的T N差异中值。此外，与CEA相比，全部29个标记物在配对样品中具有较高的百分比，其中在肿瘤样品中标记物的表达超过在正常样品中的表达。CST1，2，4、ASPN和SFRP4三种标记物在配对的肿瘤样品和正常样品之间的表达显示出100%的差异。本文显示了这三种标记物的基因序列以及用来检测它们的引物和探针位置。图9a_9d描述了 29种胃癌标记物在40位患者的配对样品中的单个的及中值的T N变化倍数数据。图IOa-IOad描述了 CEA和本专利技术中其它GTM表达在肿瘤分期和变化倍数的log2数值间的关系图。图 IOa adlican ;图 IOb :ASPN ;图 IOc CSPG2 ;图 IOd :CST1，2，4 ;图 IOe EFEMP2 ;图 IOf :GGF ;图 IOg :INHBA ;图 IOh IGFBP7 ;图 IOi =KLKlO ;图 IOj =LEPREl ;图 IOk :LUM ；图 101 L0XL2 ；图 IOm =MMPl2 ；图 IOn ；TIMP1 ；图 IOo =ASAHl ；图 IOp =SPPl ;图 IOq :SFRP2 ；图 IOr SFRP4 ；图 IOs =SPARC ；图 IOt =PRSSll ；图 IOu THBS2 图 IOv TG ;图 IOw :TGFBI ;图 IOx =CGRll ;图 IOy SERPINH1 ;图 IOz MMP2 ;图 IOaa PCSK5 ;图 IOab SERPINB5 ；图 IOac : TGFBI 和图 IOad CEA (CEACAM5)。图I la-1 Iad描述了本专利技术的29种GTM和CEA表达在肿瘤类型(扩散型⑶和肠型(I))和变化倍数的log2数值间的关系图。图Ila adlican ;图lib :ASPN ;图lie CSPG2 ;图lid :CST1，2，本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于检测胃癌的方法，其包括：（a）准备生物学样品；和（b）检测上述样品中GTM家族成员的过表达。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：P·J·吉尔福德，A·J·霍利约克，
申请(专利权)人：环太平洋生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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