一种具有抗氧化活性的车前草多酚的制备方法，属于中药、食品技术领域其制备方法是：a、将车前草粉碎成粗粉，用乙醇溶液回流提取，回流提取时间为0.5-2h，提取后回收乙醇，加水制成提取溶液，弃去沉淀，得到车前草多酚提取溶液；b、车前草多酚提取溶液上到D101大孔树脂柱上，吸附时间1-3h，洗脱溶剂10-90%乙醇溶液，洗脱速度2-6BV/h；乙醇洗脱得到车前草多酚洗脱液，回收乙醇，冻干，得到车前草多酚。有益效果是：大孔吸附树脂具有物理化学稳定性高、吸附容量大、选择性好、吸附速度快、再生处理方便、使用期长、节省费用等，适合于工业生产。制备得到车前草多酚具有清除自由基、抗氧化的功能。在食品、医药、化妆品及功能食品方面具有很大开发潜力。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于中药、食品
技术介绍
植物多酚是广泛分布于植物之中的一类复杂化合物，现代研究表明，很多疾病如组织器官老化等都与体内过剩的自由基有关，多酚通过清除自由基能对自由基诱发的生物大分子损伤起保护作用，因此，多酚类化合物在抗衰老、抗肿瘤、抗辐射、抑制高血压、降血脂等很多方面具有良好的生理活性。车前草是车前科植物车前(Plantago asiatica L.)的干燥全草,是一味传统中药，也是卫生部规定可以用于保健食品的植物之一，具有清热利尿、渗湿通淋、明目、祛痰之功效，还具有保肝、降压、抑菌、降低血清胆固醇等多种药理作用。具有很好的医疗保健价值。 近年来，国内外对多酚的应用研究在逐渐增多，枇杷多酚(申请号/专利号201010538005)、苹果多酚(申请号/专利号201010171146)、茶多酚(申请号/专利号200810181108)等已申请专利。而对车前草多酚的研究较少。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种，它是从车前草植物中提取、纯化车前草多酚的方法。本专利技术的制备方法是 I、车前草多酚的提取，将车前草粉碎成20目-40目的粗粉，用乙醇溶液回流提取，车前草回流提取所用的乙醇溶液量按重量比为6-10倍，乙醇溶液浓度60-80%，回流提取时间为O. 5-2h，提取后回收乙醇，加水制成O. 5g车前草/mL的提取溶液，5000rpm/min离心30min，弃去沉淀，得到车前草多酚提取溶液。2、车前草多酚的纯化，车前草多酚提取溶液上到DlOl大孔树脂柱(上样量20-30mL/g树脂)上，上样速度2-4BV/h，吸附时间l_3h，洗脱溶剂10-90%乙醇溶液，洗脱速度2-6BV/h。经吸附，乙醇洗脱得到车前草多酚洗脱液，回收乙醇，冻干，得到车前草多酚。车前草多酚的提取过程中，车前草回流提取所用的乙醇溶液量按重量比优选为8倍；乙醇溶液浓度优选为70% ;回流提取时间为lh。车前草多酚的纯化过程中，车前草多酚提取液上样速度优选为3BV/h ;吸附时间优选为2 h ;洗脱溶剂乙醇溶液，优选为30% ;洗脱速度优选为4BV/h。本专利技术的有益效果是利用车前草为原料经乙醇溶液提取，采用大孔吸附树脂进行富集纯化，制备得到车前草多酚。大孔吸附树脂具有物理化学稳定性高、吸附容量大、选择性好、吸附速度快、再生处理方便、使用期长、节省费用等诸多优点。适合于工业生产。制备得到车前草多酚具有清除自由基、抗氧化的功能。在食品、医药、化妆品及功能食品方面具有很大开发潜力。附图说明图I是本专利技术车前草多酚对D-半乳糖诱导氧化损伤小鼠肝组织MDA水平的影响； 图2是本专利技术车前草多酚对D-半乳糖诱导氧化损伤小鼠肝组织GSH-Px活力的影响； 图3是本专利技术车前草多酚对D-半乳糖诱导氧化损伤小鼠肝组织T-AOC活性的影响； 图4是本专利技术车前草多酚对D-半乳糖诱导氧化损伤小鼠肝组织SOD活性的影响； 图5是本专利技术车前草多酚对D-半乳糖诱导氧化损伤小鼠脑组织MAO活力的影响。具体实施例方式实施例I (I)车前草多酚的提取 车前草粗粉100g，加入800mL的70%乙醇溶液回流提取3次，每次I小时，过滤，合并滤 液，回收乙醇，加水制成200mL的提取液，5000rpm/min离心30min,弃去沉淀,得到车前草多酚提取溶液。(2)车前草多酚的纯化 车前草多酚提取液以3BV/h的速度上到DlOl大孔树脂柱上(上样量20-30mL/g树脂)，吸附2小时后，先用蒸馏水洗脱至流出液无色，再用30%乙醇作为洗脱溶剂，以4BV/h速度洗脱至无色，收集洗脱液，回收乙醇、冻干，即得到车前草多酚3. Sg。实施例2 (I)车前草多酚提取 车前草粗粉200g，加入1600 mL的70%乙醇溶液回流提取3次，每次I小时，过滤，合并滤液，回收乙醇，加水制成400mL的提取液，5000rpm/min离心30min,弃去沉淀,得到车前草多酚提取溶液。(2)车前草多酚的纯化 车前草多酚提取液以3BV/h的速度上到DlOl大孔树脂柱上(上样量20-30mL/g树脂)，吸附2小时后，先用蒸馏水洗脱至流出液无色，再用30%乙醇作为洗脱溶剂，以4BV/h速度洗脱至无色，收集洗脱液，回收乙醇、冻干，即得到车前草总多酚Sg。实施例3 (I)车前草多酚提取 车前草粗粉300g，加入2400 mL的70%乙醇溶液回流提取3次，每次I小时，过滤，合并滤液，回收乙醇，加水制成600mL的提取液，5000rpm/min离心30min,弃去沉淀,得到车前草多酚提取溶液。(2)车前草多酚的纯化 车前草多酚提取液以3BV/h的速度上到DlOl大孔树脂柱上(上样量20-30mL/g树脂)，吸附2小时后，先用蒸馏水洗脱至流出液无色，再用30%乙醇作为洗脱溶剂，以4BV/h速度洗脱至无色，收集洗脱液，回收乙醇、冻干，即得到车前草多酚10g。实施例4 (I)车前草多酚提取 车前草粗粉500g，加入4000 mL的80%乙醇溶液回流提取3次，每次I小时，过滤，合并滤液，回收乙醇，加水制成IOOOmL的提取液，5000r/min离心30min,弃去沉淀,得到车前草多酚提取溶液。(2)车前草多酚的纯化 车前草多酚提取液以3BV/h的速度上到DlOl大孔树脂柱上(上样量20-30mL/g树脂)，吸附2小时后，先用蒸馏水洗脱至流出液无色，再用30%乙醇作为洗脱溶剂，以4BV/h速度洗脱至无色，收集洗脱液，回收乙醇、冻干，即得到车前草多酚17. 2g。试验例I车前草多酚的体外抗氧化试验 (I)清除DPPH自由基能力的测定(DPPH法) 方法在试管中加入I. 95mL质量浓度为24mg/L的DPPH乙醇溶液和O. 05mL 95%的乙醇溶液,混匀后,用Icm比色皿在517nm波长处测吸光值(A)，记为A0。另取试管分别 加入I. 95mL质量浓度为24mg/L的DPPH乙醇溶液和O. 05mL不同浓度的提取物溶液，混匀后，记录加入提取物溶液后不同时间的吸光度值直到吸光度稳定。用稳定后的吸光值At计算提取物对DPPH自由基的清除能力SR%，绘制清除率曲线，计算IC5Q。 SR%= X 100% 式中Atl — DPPH乙醇溶液的吸光值。At—加入提取物溶液后的DPPH乙醇溶液的最终吸光度值。IC50=O. 2848 mg/mL。此结果可以看出车前草多酚对DPPH自由基有一定的清除作用。(2) OH ·自由基能力的测定 方法-M 7支具塞试管，分别加入O. 75mmoL · L-1邻二氮菲溶液lmL、PH=7. 4的PBS缓冲溶液3. 8mL，充分混匀后再加入O. 75 mmoL · T1FeSO4溶液I. 5mL，立即混匀。然后向其中5支试管分别加入一定量的车前草多酚溶液(每管加的体积不同)，混再分别加入O. 01%的H2O2溶液lmL，混匀，另取2支分别为损伤和未损伤管，不加车前草多酚溶液，在损伤管中加入O. 01% H2O2溶液ImL,未损伤管不加H2O2,最后用蒸懼水补至相同体积IOmL, 7支试管于37°保温Ih，测A536，计算OH ·清除率，绘制清除率曲线。OH ·清除率=(A2-A1) / (A0-A1) 式中=Atl—未损伤管的吸光度；A1—损伤管的本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种具有抗氧化活性的车前草多酚的制备方法，其制备方法是：a、车前草多酚的提取，将车前草粉碎成20目？40目的粗粉，用乙醇溶液回流提取，车前草回流提取所用的乙醇溶液量按重量比为6？10倍，乙醇溶液浓度60？80%，回流提取时间为0.5？2h，提取后回收乙醇，加水制成0.5g车前草/mL的提取溶液，？5000rpm/min离心30min，弃去沉淀，得到车前草多酚提取溶液；b、车前草多酚的纯化，车前草多酚提取溶液上到D101大孔树脂柱上，上样速度2？4BV/h，吸附时间1？3h，洗脱溶剂10？90%乙醇溶液，洗脱速度2？6BV/h；经吸附，乙醇洗脱得到车前草多酚洗脱液，回收乙醇，冻干，得到车前草多酚。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘春明，王强，王晶，马冰，
申请(专利权)人：长春师范学院，
类型：发明
国别省市：
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