具有改善的特性的β-葡萄糖苷酶I变体制造技术

本发明专利技术总体涉及酶，具体地讲为β-葡萄糖苷酶变体。本发明专利技术还描述了编码β-葡萄糖苷酶变体的核酸、包含β-葡萄糖苷酶变体的组合物、使用β-葡萄糖苷酶变体的方法和鉴定另外有用的β-葡萄糖苷酶变体的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
·本专利技术总体涉及酶，具体地讲为葡萄糖苷酶变体。还描述了编码葡萄糖苷酶变体的核酸、包含葡萄糖苷酶变体的组合物、使用葡萄糖苷酶变体的方法和鉴定另外有用的β_葡萄糖苷酶变体的方法。
技术介绍
纤维素和半纤维素是通过光合作用产生的最丰富的植物材料。它们能被许多会产生能够将高分子底物水解成単体糖的胞外酶的微生物(例如，细菌、酵母和真菌)降解并且用作能源(Aro等人，J. Biol. Chem.，276 :24309-24314, 2001)。因为非可再生资源方法的局限性，纤维素成为主要可再生能源的潜能是巨大的(Krishna等人，Bioresource Tech.,77 :193-196, 2001)。通过生物过程对纤维素的有效利用是克服食品、饲料和燃料短缺的ー种途径(Ohmiya 等人，Biotechnol. Gen. Engineer Rev.，14 :365-414,1997)。纤维素酶是水解纤维素(β-1，4_葡聚糖或PD-糖苷键)导致形成葡萄糖、纤维ニ糖、纤维低聚糖等的酶。传统上将纤维素酶分成三个主要类型内切葡聚糖酶(EC3.2. I. 4) ( “EG”)、外切葡聚糖酶或纤维ニ糖水解酶(EC 3. 2. I. 91) ( “CBH”)和β -葡萄糖苷酶([3]_D-葡萄糖苷酶；EC3. 2. I. 21) (“BG”) (Knowles 等人，TIBTECH 5 :255-261，1987 ；和Schulein, Methods Enzymol.，160 :234-243,1988)。内切葡聚糖酶主要作用在纤维素纤维的非晶部分，而纤维ニ糖水解酶还能够降解结晶纤维素(Nevalainen和Penttila,Mycota, 303-319,1995)。因此，纤维ニ糖水解酶在纤维素酶体系中的存在是结晶纤维素有效溶解所必需的(Suurnakki等人,Cellulose, 7 :189-209, 2000)。β -葡萄糖苷酶起到从纤维ニ糖、纤维低聚糖和其他葡萄糖苷释放D-葡萄糖単位的作用(Freer，J. Biol. Chem.,268 :9337-9342,1993)。已知纤维素酶由大量细菌、酵母和真菌产生。某些真菌会产生能够降解结晶形式的纤维素的整个纤维素酶体系，使得纤维素酶容易通过发酵大量产生。丝状真菌发挥特别的作用，因为许多酵母例如酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)缺乏水解纤维素的能力(參见，例如，Wood 等人，Methods in Enzymology，160 :87-116,1988)。CBH、EG和BG的真菌纤维素酶分类可进ー步扩展以包括每个分类内的多个组分。例如，已从包括里氏木霉(Trichoderma reesei)(也称为红褐肉座菌(Hypocreajecorina))的多个真菌来源分离了多种CBH、EG和BG，里氏木霉含有两种CBH的已知基因，BP,CBH I(“CBH1”)和 CBHII ( “CBH2”)、至少 8 种 EG 的已知基因，即，EG I,EG II,EG III、EGIV、EGV、EGVI、EGVII 和 EGVIII 以及至少 5 种 BG 的已知基因，即，BG1、BG2、BG3、BG4、BG5和 BG7 (Foreman 等人(2003),J. Biol. Chem. 278(34) :31988-31997)。EGIV、EGVI和 EGVIII也具有木葡聚糖酶活性。为了将结晶纤维素有效地转化成葡萄糖，需要包含来自CBH、EG和BG每个分类的组分的整个纤维素酶体系，而分离的组分在水解结晶纤维素方面不太有效(Filho等人，Can. J. Microbiol. ,42 1-5,1996) 0内切-1，4-β -葡聚糖酶(EG)和外切纤维ニ糖水解酶(CBH)催化纤维素水解为纤维低聚糖(纤维ニ糖作为主要产物)，而β_葡萄糖苷酶(BGL)将低聚糖转化为葡萄糖。已观察到来自不同分类的纤维素酶组分之间的协同关系。具体地讲，EG型纤维素酶和CBH型纤维素酶协同地相互作用以有效地降解纤维素。虽然先前已经描述了 β-葡萄糖苷酶组合物，但仍然需要新型的改善的β-葡萄糖苷酶组合物。改进的β-葡萄糖苷酶组合物例如在糖化生物质方面有用。尤其值得关注的是在表达、活性和稳定性之一者或多者中表现出所需的水平的β-葡萄糖苷酶。
技术实现思路
本专利技术提供具有葡萄糖苷酶活性的多肽。本专利技术部分基于葡萄糖苷酶变体。还描述了编码葡萄糖苷酶变体的核酸、包含葡萄糖苷酶变体的组合物、使用β_葡萄糖苷酶变体的方法和鉴定另外有用的β_葡萄糖苷酶变体的方法。在本专利技术的一个方面，β -葡萄糖苷酶变体是红褐肉座菌(Hypocrea jecorina) β -葡萄糖苷酶I (BGLl)变体。因此，在ー个方面，本专利技术提供具有至少两种相比野生型BGLl改善的活性的β -葡萄糖苷酶I (BGLl)变体，所述至少两种改善的活性选自与野生型BGLl相比，(a)预处理玉米秸杆(PCS)水解活性、(b)纤维ニ糖酶活性、(c)蛋白质表达(HPLC)、(d)通过在氨预处理玉米芯(CC)存在下纤维ニ糖酶活性或通过CC水解活性量度的β_葡萄糖苷酶活性、(e)热稳定性、(f)磷酸溶胀纤维素(PASC)水解活性和(g)在葡萄糖存在下増加的水解活性，其中BGLl变体是如表4-8、3-2、4-2和4_3所示的任何变体。在其他方面，本专利技术提供BGLl变体，如以上和本说明书通篇所述，所述BGLl变体具有相比野生型BGLl改善的(b)和(d)活性，其中所述BGLl变体是L266A，I567E，S283F，S283P, T258E, T258I, T258K, T258Q, P536T, P536W, I532Y, Y530T, P607D, Q406M, Q406S,V602T, G300M, A630S, A630T, T180H, T180M, A450M, I444E, I444F, I444N, I444W, I444Y,V500Q, A633I, S482P, A667V, A485L, A485W, Y678R, V603G, L266C, I567F, S624P, P607L,G606I, G606K, G606L, G606M, G606Q, G606V, G605E, I444V, A633V, A655W, Y678H, V522Y,G554F, L266N, F556L, S550I, S550T, S550V, T258L, P536I, P536V, F392R, S624G, S624N,S624Q, S624T, A601M, A630V, N463S, A450F, A450T, A450V, A450W, I486V, S482I, Y678I,G427F, D564T, Q684C, Q684G, Y530S, Q684N, A565G, A270C, T258S, T258V, P536D, P536E, S624F, S624I, S624V, A601C, A601Y, S308H, A630C, A630D, N463K, N463R, A450E, S482A,A667F,本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.11.20 US 61/263,2401.ー种具有至少两种相比野生型BGLl改善的活性的β-葡萄糖苷酶I (BGLl)变体，所述至少两种相比野生型BGLl改善的活性选自 (a)预处理玉米秸杆(PCS)水解活性， (b)纤维ニ糖酶活性， (c)蛋白质表达， (d)通过在氨预处理玉米芯(CC)存在下的纤维ニ糖酶活性或通过CC水解活性量度的β-葡萄糖苷酶活性， (e)热稳定性， (f)磷酸溶胀纤维素(PASC)水解活性，和 (g)在葡萄糖存在下的水解活性， 其中所述BGLl变体是如表4-8、3-2、4-2和4_3所示的任何变体。2.根据权利要求I所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的(b)和(d)活性，其中所述 BGLl 变体是 L266A, I567E, S283F, S283P, T258E, T258I，T258K，T258Q, P536T,P536W, I532Y, Y530T, P607D, Q406M, Q406S, V602T, G300M, A630S, A630T, T180H, T180M,A450M, I444E, I444F, I444N, I444W, I444Y, V500Q, A633I, S482P, A667V, A485L, A485W,Y678R, V603G, L266C, I567F, S624P, P607L, G606I, G606K, G606L, G606M, G606Q, G606V,G605E, I444V, A633V, A655W, Y678H, V522Y, G554F, L266N, F556L, S550I, S550T, S550V,T258L, P536I, P536V, F392R, S624G, S624N, S624Q, S624T, A601M, A630V, N463S, A450F,A450T, A450V, A450W, I486V, S482I, Y678I, G427F, D564T, Q684C, Q684G, Y530S, Q684N,A565G, A270C, T258S, T258V, P536D, P536E, S624F, S624I, S624V, A601C, A601Y, S308H,A630C, A630D, N463K, N463R, A450E, S482A, A667F, A667L, A667R, A667Y, A485T, V466S,Y678A, Y678C, Y678Q, A468C, Q226W, Q226Y, N263C, N263S, N278F, S312Y, Q316T, K345E,G427C, P661F, P661L, P661Q, T666C, S683W, F260D, F260G, F260Q, P607G, N400S, F260W,Y530F, Q406D, G605C, N263T, P607I, A450P, T242H, A630Y, P536C, A630Q, D215S, G372A,G547A, F611A, G662C, G662F, F260L, L293F, A633C, S312C,或 N455D。3.根据权利要求I或2所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的(b)和(e)活性，其中所述 BGLl 变体是 P607H, T011E, T011Y, N146E, I567V, N566G, A630K, Y639K, Q245N,K320Y, A347Y, P536Q, N369E, N369W, N369Y, N146A, N146Q, P607K, N369T, A655N, I671K,F260T, P607S, F260D, F260G, F260Q, P607G, N400S, P607F, P607I, A450P, T242H, T568E,A630Y, A655D, F260E, T568K, P536C, A630Q, D215S, G372A, G547A, F611A, G662C, G662F,F260L，或 L293F。4.根据权利要求I至3中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的(b)和(f)活性，其中所述 BGLl 变体是 N261C, T258C, F392Q, S624E, P607C, P604M, A377Q,N461A, N461F, N461P, T436A, T436C, T436F, T436I, T436M, T436Q, T436Y, Q220C, A655L,T646H, Y678F, A468I, D177M, P661E, L266N, F556L, S550I, S550T, S550V, T258L, P536I,P536V, F392R, S624G, S624N, S624Q, S624T, A601M, A630V, N463S, A450F, A450T, A450V,A450W, I486V, S482I, Y678I, G427F, D564T, Q684C, Q684G, N566H, F556V, P604Y, L293V,A630G, N461C, N463T, D457C, Q220M, T221A, T221G, T221I, A655R, A468F, A468S, Q216I,D564V, P536Q, N369E, N369W, N369Y, T436E, A565G, A270C, T258S, T258V, P536D, P536E,S624F, S624I, S624V, A601C, A601Y, S308H, A630C, A630D, N463K, N463R, A450E, S482A,A667F, A667L, A667R, A667Y, A485T, V466S, Y678A, Y678C, Y678Q, A468C, Q226W, Q226Y,N263C, N263S, N278F, S312Y, Q316T, K345E, G427C, P661F, P661L, P661Q, T666C, S683W,F260W, Y530F, N461V, I671C, K206A, A450P, T242H, E170F, S507G, F260E, T568K, P536C,A630Q, D215S, G372A, G547A, F611A, G662C, G662F, L293F, A633C, S312C 或 N455D。5.根据权利要求I至4中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的(a)和(b)活性，其中所述BGLl 变体是 I567Q，A565F, A565K, A565Q, A565V, F556E，F260I，P607E,G605R, G300C, A377C, A377D, S308C, N146H, N146S, A655C, A655G, P176L, T209I, L266C,I567F, S624P, P607L, G606I, G606K, G606L, G606M, G606Q, G606V, G605E, I444V, A633V,A655W, Y678H, V522Y, G554F, N566H, F556V, P604Y, L293V, A630G, N461C, N463T, D457C,Q220M, T221A, T221G, T221I, A655R, A468F, A468S, Q216I, D564V, A565C, A655N, I671K,F260T, P607S, Y639V, A565G, A270C, T258S, T258V, P536D, P536E, S624F, S624I, S624V,A601C, A601Y, S308H, A630C, A630D, N463K, N463R, A450E, S482A, A667F, A667L, A667R,A667Y, A485T, V466S, Y678A, Y678C, Y678Q, A468C, Q226W, Q226Y, N263C, N263S, N278F,S312Y, Q316T, K345E, G427C, P661F, P661L, P661Q, T666C, S683W, F260D, F260G, F260Q,P607G, N400S, P607F, Q406D, G605C, N263T, N461V I671C, K206A, T568E, E170F, F260E,T568K, P536C, A630Q, D215S, G372A, G547A, F611A, G662C, G662F, F260L, A633C, S312C，或N455D。6.根据权利要求I至5中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的(b)和(c)活性，其中所述 BGLl 变体是 I567K, I567R, A565E, A565S, A565Y, F392Y, Q406H,Q406T, P604C, N038F, T568A, N461G, Y639L, Y639M, T243A, T243C, Q245H, Q245M, Q245T,T646A, T646C, I671F, I671L, I567V, N566G, A630K, Y639K, Q245N, K320Y, A347Y, A565C,Y639G, Y530F, N461V, I671C, K206A, T568E, A630Y, A655D, S507G, F260E, T568K,或 F260L。7.根据权利要求I至6中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的(a)和(d)活性，其中所述 BGLl 变体是 I567S, G606E, G606H, G606N, G606S, L293A, S308R,I444C, M201D, R542N, L266C, I567F, S624P, P607L, G606I, G606K, G606L, G606M, G606Q,G606V, G605E, I444V, A633V, A655W, Y678H, V522Y, G554F, N566F, L293M, Q220P, S692L,A565G, A270C, T258S, T258V, P536D, P536E, S624F, S624I, S624V, A601C, A601Y, S308H,A630C, A630D, N463K, N463R, A450E, S482A, A667F, A667L, A667R, A667Y, A485T, V466S,Y678A, Y678C, Y678Q, A468C, Q226W, Q226Y, N263C, N263S, N278F, S312Y, Q316T, K345E,G427C, P661F, P661L, P661Q, T666C, S683W, F260D, F260G, F260Q, P607G, N400S, Q406D,G605C, N263T, S308E, A338D, P536C, A630Q, D215S, G372A, G547A, F611A, G662C, G662F,F260L, A633C, S312C,或 N455D。8.根据权利要求I至7中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的(e)和(g)活性，其中所述 BGLl 变体是 L266F, I567Y, A270R, S384C, A630W, E128R, N146M,N146V, N146W, L181F, V043C, Y639P, S507F, Q245P, G662C, A630H, V466T, N146A, N146Q,P607K, N369T, S384E, L181M, V043A, V043G, V043N, Q060D, A655Y, T242S, S474D, P607F,A630Y, S308E, A655D,或 L293F。9.根据权利要求I至8中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的(c)和(e)活性，其中所述 BGLl 变体选自N261E, N261K, N400A, V602K, L293I, N461S, D457A,V043Q, Q303N, K320S, G662D, F260A, S474R, I567V, N566G, A630K, Y639K, Q245N, K320Y,A347Y, A601D, S384E, L 181M, V043A, V043G, V043N, Q060D, A655Y, T242S, S474D, D564T,T568E, A655D, A338D, F260E, T568K,或 F260L。10.根据权利要求I至9中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的(a)和(f)活性，其中所述 BGLl 变体是 N566L, N566P, N566W, A270K, A270N, F556H, F556K,P604N, N461D, N463E, K206G, A468Q, A468Y, N566F, N566H, F556V, P604Y, L293V, A630G,N461C, N463T, D457C, Q220M, T221A, T221G, T221I, A655R, A468F, A468S, Q216I, D564V,A468T, A565G, A270C, T258S, T258V, P536D, P536E, S624F, S624I, S624V, A601C, A601Y,S308H, A630C, A630D, N463K, N463R, A450E, S482A, A667F, A667L, A667R, A667Y, A485T,V466S, Y678A, Y678C, Y678Q, A468C, Q226W, Q226Y, N263C, N263S, N278F, S312Y, Q316T,K345E, G427C, P661F, P661L, P661Q, T666C, S683W, N461V I671C, K206A, E170F, F260E,T568K, P536C, A630Q, D215S, G372A, G547A, F611A, G662C, G662F, A633C, S312C,或 N455D。11.根据权利要求I至10中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的(a)和(c)活性，其中所述 BGLl 变体是 S283D, A270D, N146Y, F260A, S474R, A565C, K206S,D564T, N461V I671C, K206A, T568E, A338D, F260E, T568K,或 F260L。12.根据权利要求I至11中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的(a)和(e)活性，其中所述 BGLl 变体是 F556G, F260S, P604E, P604V, N146D, Y639T, T221C,N473S, N583R, R645G, G662Y, F260A, S474R, A655N, I671K, F260T, P607S, S692L, D564T,F260D, F260G, F260Q, P607G, N400S, P607F, T568E, S308E, A338D, F260E, T568K, P536C,A630Q, D215S, G372A, G547A, F611A, G662C, G662F,或 F260L。13.根据权利要求I至12中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的(c)和(d)活性，其中所述BGLl 变体是 D259S，T243V，Y530F，A338D，_F260L。14.根据权利要求I至13中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的(d)和(e)活性，其中所述BGLl 变体是 S550Q, P607R, N400Q, V602F, A601G, A601L, L293K,Y575C, Y575R, A450Q, I486C, I486Y, A655S, Q245F, D329A, P536G, P607Q, A655Q, Y575A,Y575K, A630H, V466T, S692L, F260D, F260G, F260Q, P607G, N400S, P607I, A450P, T242H,S308E, A630Y, A338D, P536C, A630Q, D215S, G372A, G547A, F611A, G662C, G662F, F260L，或L293F。15.根据权利要求I至14中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的(d)和(f)活性，其中所述 BGLl 变体是 P536F, F392C, S624L, S624R, S624W, I486F, I486W,A667G, A667S, L266N, F556L, S550I, S550T, S550V, T258L, P536I, P536V, F392R, S624G,S624N, S624Q, S624T, A601M, A630V, N463S, A450F, A450T, A450V, A450W, I486V, S482I,Y678I, G427F, D564T, Q684C, Q684G, N566F, Y575A, Y575K, A565G, A270C, T258S, T258V,P536D, P536E, S624F, S624I, S624V, A601C, A601Y, S308H, A630C, A630D, N463K, N463R,A450E, S482A, A667F, A667L, A667R, A667Y, A485T, V466S, Y678A, Y678C, Y678Q, A468C,Q226W, Q226Y, N263C, N263S, N278F, S312Y, Q316T, K345E, G427C, P661F, P661L, P661Q,T666C, S683W, F260W, P607I, A450P, T242H, P536C, A630Q, D215S, G372A, G547A, F611A,G662C, G662F, L293F, A633C, S312C,或 N455D。16.根据权利要求I至15中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的(c)和(g)活性，其中所述BGLl 变体是 S384G, S384W, N038E, N038M, N038P, V043H, V043W,Y068E, Y068G, Y068M, L110C, L110G, L110Q, LIIOW，A655H, N264L, S384E, L181M, V043A,V043G, V043N, Q060D, A655Y, T242S, S474D, Y639G, K206S, A655D，或 S507G。17.根据权利要求I至16中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的(d)和(g)活性，其中所述BGLl 变体是 G606D, Y068V, L293M, Q220P, A630H, V466T, Y530S,Q684N, F260W, Q406D, G605C, N263T, S308E, A630Y, L293F, A633C, S312C,或 N455D。18.根据权利要求I至17中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的(b)和(g)活性，其中所述BGLl 变体是 A377I，N461Y, N146A, N146Q, P607K, N369T, T436E,Y639G, Y530S, Q684N, Y639V, F260W, P607F, Q406D, G605C, N263T, A630Y, A655D, E170F,S507G, L293F, A633C, S312C,或 N455D。19.根据权利要求I至18中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的(c)和(f)活性，其中所述BGLl 变体是 K206D, A601D, Y530F, N461V I671C, K206A, S507G,F260E，或 T568K。20.根据权利要求I至19中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的(e)和(f)活性，其中所述BGLl 变体是 A468G, P536Q, N369E, N369W, N369Y, A601D, Y575A,Y575K, P607I, A450P, T242H, F260E, T568K, P536C, A630Q, D215S, G372A, G547A, F611A,G662C, G662F，或 L293F。21.根据权利要求I至20中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的(a)和(g)活性，其中所述 BGLl 变体是 R179V, L293M, Q220P, K206S, A468T, Y639V, P607F,Q406D, G605C, N263T, S308E, E170F, A633C, S312C,或 N455D。22.根据权利要求I至21中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(a)、(b)和(d)中的任何两种或所有三种的活性，其中所述BGLl变体是L266C，I567F，S624P, P607L, G606I, G606K, G606L G606M, G606Q, G606V, G605E, I444V, A633V, A655W,Y678H, V522Y, G554F, A565G, A270C, T258S, T258V, P536D, P536E, S624F, S624I, S624V,A601C, A601Y, S308H, A630C, A630D, N463K, N463R, A450E, S482A, A667F, A667L, A667R,A667Y, A485T, V466S, Y678A, Y678C, Y678Q, A468C, Q226W, Q226Y, N263C, N263S, N278F,S312Y, Q316T, K345E, G427C, P661F, P661L, P661Q, T666C, S683W, F260D, F260G, F260Q,P607G, N400S, Q406D, G605C, N263T, P536C, A630Q, D215S, G372A, G547A, F611A, G662C,G662F, F260L, A633C, S312C,或 N455D。23.根据权利要求I至22中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(b)、(d)和(f)中的任何两种或所有三种的活性，其中所述BGLl变体是L266N，F556L，S550I, S550T, S550V, T258L, P536I, P536V, F392R, S624G, S624N, S624Q, S624T, A601M,A630V, N463S, A450F, A450T, A450V, A450W, I486V, S482I, Y678I, G427F, D564T, Q684C,Q684G, A565G, A270C, T258S, T258V, P536D, P536E, S624F, S624I, S624V, A601C, A601Y,S308H, A630C, A630D, N463K, N463R, A450E, S482A, A667F, A667L, A667R, A667Y, A485T,V466S, Y678A, Y678C, Y678Q, A468C, Q226W, Q226Y, N263C, N263S, N278F, S312Y, Q316T,K345E, G427C, P661F, P661L, P661Q, T666C, S683W, F260W, Y530F, P607I, A450P, T242H,P536C, A630Q, D215S, G372A, G547A, F611A, G662C, G662F, A633C, S312C, N455D,或 L293F。24.根据权利要求I至23中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(a)、(c)和(e)中的任何两种或所有三种的活性，其中所述BGLl变体是F260A，S474R，D564T, T568E, A338D, F260E, T568K,或 F260L。25.根据权利要求I至24中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(b)、(c)和(e)中的任何两种或所有三种的活性，其中所述BGLl变体是I567V，N566G，A630K, Y639K, Q245N, K320Y, A347Y, T568E, A655D, F260E, T568K,或 F260L。26.根据权利要求I至25中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(a)、(d)和(f)中的任何两种或所有三种的活性，其中所述BGLl变体是N566F，A565G，A270C, T258S, T258V, P536D, P536E, S624F, S624I, S624V, A601C, A601Y, S308H, A630C,A630D, N463K, N463R, A450E, S482A, A667F, A667L, A667R, A667Y, A485T, V466S, Y678A,Y678C, Y678Q, A468C, Q226W, Q226Y, N263C, N263S, N278F, S312Y, Q316T, K345E, G427C,P661F, P661L, P661Q, T666C, S683W, P536C, A630Q, D215S, G372A, G547A, F611A, G662C,G662F, A633C, S312C,或 N455D。27.根据权利要求I至26中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(a)、(b)和(f)中的任何两种或所有三种的活性，其中所述BGLl变体是N566H，F556V，P604Y, L293V, A630G, N461C, N463T, D457C, Q220M, T221A, T221G, T221I, A655R, A468F,A468S, Q216I, D564V, A565G, A270C, T258S, T258V, P536D, P536E, S624F, S624I, S624V,A601C, A601Y, S308H, A630C, A630D, N463K, N463R, A450E, S482A, A667F, A667L, A667R,A667Y, A485T, V466S, Y678A, Y678C, Y678Q, A468C, Q226W, Q226Y, N263C, N263S, N278F,S312Y, Q316T, K345E, G427C, P661F, P661L, P661Q, T666C, S683W, N461V, I671C, K206A,E170F, F260E, T568K, P536C, A630Q, D215S, G372A, G547A, F611A, G662C, G662F, A633C,S312C，或 N455D。28.根据权利要求I至27中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(a)、(b)和(c)中的任何两种或所有三种的活性，其中所述BGLl变体是A565C，N461V，I671C, K206A, T568E, F260E, T568K,或 F260L。29.根据权利要求I至28中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(b)、(d)和(e)中的任何两种或所有三种的活性，其中所述BGLl变体是P536G，P607Q，A655Q, F260D, F260G, F260Q, P607G, N400S, P607I, A450P, T242H, A630Y, P536C, A630Q,D215S, G372A, G547A, F611A, G662C, G662F, F260L,或 L293F。30.根据权利要求I至29中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(b)、(e)和(f)中的任何两种或所有三种的活性，其中所述BGLl变体是P536Q，N369E，N369W, N369Y, P607I, A450P, T242H, F260E, T568K, P536C, A630Q, D215S, G372A, G547A,F611A, G662C, G662F，或 L293F。31.根据权利要求I至30中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(c)、(e)和(f)中的任何两种或所有三种的活性，其中所述BGLl变体是A601D，F260E或 T568K。32.根据权利要求I至31中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(a)、(d)和(g)中的任何两种或所有三种的活性，其中所述BGLl变体是L293M，Q220P，Q406D, G605C, N263T, S308E, A633C, S312C,或 N455D。33.根据权利要求I至32中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(d)、(e)和(f)中的任何两种或所有三种的活性，其中所述BGLl变体是Y575A，Y575K，P607I, A450P, T242H, P536C, A630Q, D215S, G372A, G547A, F611A, G662C, G662F,或 L293F。34.根据权利要求I至33中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(d)、(e)和(g)中的任何两种或所有三种的活性，其中所述BGLl变体是A630H，V466T，S308E，A630Y，或 L293F。35.根据权利要求I至34中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(b)、(e)和(g)中的任何两种或所有三种的活性，其中所述BGLl变体是N146A，N146Q，P607K, N369T, P607F, A630Y, A655D,或 L293F。36.根据权利要求I至35中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(c)、(e)和(g)中的任何两种或所有三种的活性，其中所述BGLl变体是S384E，L181M，V043A, V043G, V043N, Q060D, A655Y, T242S, S474D,或 A655D。37.根据权利要求I至36中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(b)、(f)和(g)中的任何两种或所有三种的活性，其中所述BGLl变体是T436E，F260W，E170F, S507G, L293F, A633C, S312C,或 N455D。38.根据权利要求I至37中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(b)、(c)和(g)中的任何两种或所有三种的活性，其中所述BGLl变体是Y639G，P607F，A655D，或 S507G。39.根据权利要求I至38中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(a)、(b)和(e)中的任何两种或所有三种的活性，其中所述BGLl变体是A655N，I671K，F260T, P607S, F260D, F260G, F260Q, P607G, N400S, P607F, T568E, F260E, T568K, P536C,A630Q, D215S, G372A, G547A, F611A, G662C, G662F,或 F260L。40.根据权利要求I至39中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(a)、(c)和(g)中的任何两种或所有三种的活性，其中所述BGLl变体是K206S或P607F。41.根据权利要求I至40中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(b)、(d)和(g)中的任何两种或所有三种的活性，其中所述BGLl变体是Y530S，Q684N，F260W, Q406D, G605C, N263T, A630Y, L293F, A633C, S312C,或 N455D。42.根据权利要求I至41中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(a)、(f)和(g)中的任何两种或所有三种的活性，其中所述BGLl变体是A468T，E170F，A633C, S312C，或 N455D。43.根据权利要求I至42中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(a)、(d)和(e)中的任何两种或所有三种的活性，其中所述BGLl变体是S692L，F260D，F260G, F260Q, P607G, N400S, S308E, A338D, P536C, A630Q, D215S, G372A, G547A, F611A,G662C, G662F，或 F260L。44.根据权利要求I至43中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(a)、(b)和(g)中的任何两种或所有三种的活性，其中所述BGLl变体是Y639V。45.根据权利要求I至44中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(a)、(b)、(d)和(f)中的任何两种、任何三种或所有四种的活性，其中所述BGLl变体是 A565G，A270C, T258S, T258V, P536D, P536E, S624F, S624I, S624V, A601C, A601Y, S308H,A630C, A630D, N463K, N463R, A450E, S482A, A667F, A667L, A667R, A667Y, A485T, V466S,Y678A, Y678C, Y678Q, A468C, Q226W, Q226Y, N263C, N263S, N278F, S312Y, Q316T, K345E,G427C, P661F, P661L, P661Q, T666C,或 S683W。46.根据权利要求I至45中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(a)、(b)、(d)和(e)中的任何两种、任何三种或所有四种的活性，其中所述BGLl变体是 F260D, F260G, F260Q, P607G,或 N400S。47.根据权利要求I至46中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(b)、(d)、(f)和(g)中的任何两种、任何三种或所有四种的活性，其中所述BGLl变体是 F260W, L293F, A633C, S312C,或 N455D。48.根据权利要求I至47中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(b)、(c)、(d)和(f)中的任何两种、任何三种或所有四种的活性，其中所述BGLl变体是 Y530F。49.根据权利要求I至48中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(a)、(b)、(e)和(g)中的任何两种、任何三种或所有四种的活性，其中所述BGLl变体是P607F。50.根据权利要求I至49中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(a)、(b)、(d)和(g)中的任何两种、任何三种或所有四种的活性，其中所述BGLl变体是 Q406D, G605C, N263T, A633C, S312C,或 N455D。51.根据权利要求I至50中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(a)、(b)、(c)和(f)中的任何两种、任何三种或所有四种的活性，其中所述BGLl变体是 N461V, I671C, K206A, F260E 或 T568K。52.根据权利要求I至51中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(b)、(d)、(e)和(f)中的任何两种、任何三种或所有四种的活性，其中所述BGLl变体是 P607I，A450P,T242H,P536C,A630Q,D215S,G372A,G547A,F611A,G662C, G662F,或 L293F。53.根据权利要求I至52中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(a)、(b)、(C)和(e)中的任何两种、任何三种或所有四种的活性，其中所述BGLl变体是 T568E, F260E, T568K,或 F260L。54.根据权利要求I至53中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(a)、(d)、(e)和(g)中的任何两种、任何三种或所有四种的活性，其中所述BGLl变体是 S308E。55.根据权利要求I至54中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(b)、(d)、(e)和(g)中的任何两种、任何三种或所有四种的活性，其中所述BGLl变体是A630Y 或 L293F。56.根据权利要求I至55中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(b)、(c)、(e)和(g)中的任何两种、任何三种或所有四种的活性，其中所述BGLl变体是 A65 。57.根据权利要求I至56中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(a)、(b)、(f)和(g)中的任何两种、任何三种或所有四种的活性，其中所述BGLl变体是 E170F, A633C, S312C,或 N455D。58.根据权利要求I至57中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(a)、(C)、(d)和(e)中的任何两种、任何三种或所有四种的活性，其中所述BGLl变体是A338D 或 F260L。59.根据权利要求I至58中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(b)、(c)、(f)和(g)中的任何两种、任何三种或所有四种的活性，其中所述BGLl变体是 S507G。60.根据权利要求I至59中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(a)、(b)、(c)、(e)和(f)中的任何两种、任何三种、任何四种或所有五种的活性，其中所述BGLl变体是F260E或T568K。61.根据权利要求I至60中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(a)、(b)、(d)、(e)和(f)中的任何两种、任何三种、任何四种或所有五种的活性，其中所述 BGLl 变体是 P536C, A630Q, D215S, G372A, G547A, F611A, G662C，或 G662F。62.根据权利要求I至61中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(a)、(b)、(c)、(d)和(e)中的任何两种、任何三种、任何四种或所有五种的活性，其中所述BGLl变体是F260L。63.根据权利要求I至62中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(b)、(d)、(e)、(f)和(g)中的任何两种、任何三种、任何四种或所有五种的活性，其中所述BGLl变体是L293F。64.根据权利要求I至63中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的选自(a)、(b)、(d)、(f)和(g)中的任何两种、任何三种、任何四种或所有五种的活性，其中所述 BGLl 变体是 A633C，S312C,或 N455D。65.ー种具有至少两种相比野生型BGLl改善的活性的β -葡萄糖苷酶I (BGLl)变体，所述至少两种相比野生型BGLl改善的活性选自 (a)预处理玉米秸杆(PCS)水解活性， (b)纤维ニ糖酶活性， (c)蛋白质表达， (d)通过氨预处理玉米芯(CC)水解活性量度的β_葡萄糖苷酶活性， (e)热稳定性， (f)磷酸溶胀纤维素(PASC)水解活性，和 (g)在葡萄糖存在下的水解活性， 其中所述BGLl变体包含两个或更多个在表5-1中列出的置換。66.根据权利要求65所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的(a)和(c)活性，其中所述BGLl变体包含如下置换L167W|D225Q，T242SIS312Y, D178K|A338K|S474D|G662L, K345E|N369T|G372A|K428N|P661L IS683W, D177M|D225Q|D564V|Q684G,和 D178N|N264K|A338D|S474R|G662K,D177MID564T I Q6 26F I Q684A，K428N| S683W, K 345E | K 428 N| S68 3W，Q226YIG372A|V603G|T666C, L167W D177M|Q626F, L167W|D177M|D225Q|D564V|Q684G,D177MID225QID564TIQ684N，D I 77M|Q626F|Q684R，N238W|R265P|K656R，N264M |R265P(任选地也包含 G662F)， N264L|A338I|S474R|G662D，L167ff|D225Q|D564V|Q626F|Q684N, D177M| D 2 2 5 Q| D564T | Q684A,D177MID225Q|D564V|Q626F|Q684N, K345E|N369E|G372A|P661E, N369T|P661L|S683W,R265MIK560S, N369T|G372A|P661L|S683W, P176L|Q226W|K320Y|R363E,K345E I N369T|G372A|P661E|S683W, K320S|R363E, E170F|Q226Y|T242S | S312YG372A|V603G|P661F|T666C, T242S|T666C, Q226Y|T666C, Q216E|S312K|S692K,P176LIG662F, P176L|Q226W|Q316T|K320Y|R363E, P176L|Q226W|K320S|R363E|G662F,P176L|Q22 6ff|Q316T|K320Y|V522Y,P176L|Q226ff|K320Y|R3 63E|V522Y,Q226WIK320Y|R363E, Q316T|K320Y|R363E|G662F, Q226W|Q316T|R363E|V522Y|G662F,P176LIK320SIR363EIG662C， R363E|G547A|G662C, Q226W|K320S|G662C, P176LQ226WIQ316T|K320Y|R363E|G662F, P176L|Q226W|Q316T|K320S|G662F, P176LQ316T I K320S|R363E|V522Y|G662C, K320Y|R363E|G662C, K345E|N369E|P661L,E170FIV603G, K345E|N369E|G372A|S683W, N369E|S683W, G372A|P661E|S683W,P176L|Q3 16T|K320S|R363E|G662F, K345E | N369E | P66 IE | S68 3W,K345E I P66IE | S683W, N2 6 3C |K345E | N369E, N26 3 C| N369T |P66IE ,K345EIN369E|S683W, N263C|K345E|N369T|K428N, N263C|N369E|K428N|P661E,N263C|N369T|S683ff, N263C|N369T, N369T|G372A|K428N|S683W, N263C|G372A,N263CIK345E | N369E | G372A | P661E,或 P176L | Q226W | G547A | G662C。67.根据权利要求65或66所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的(b)和⑴活性，其中所述BGLl变体包含如下置換L167W|D177M|D225Q|Q626F|Q684G, L167W|D177M|D564V|Q684G, D215S|S312Y,E170F|S312Y|N369Y, L167W|D225Q|Q626F|Q684R, L167W|D564T|Q626F, P176L|Q226WIQ316TIK320S|V522Y|G662C, R363E|V522Y|G662F, Q316T|K320S|V522Y|G662F,Q226W|K320Y|V522Y, Q316T|K320S|V522Y,和 Q226W|K320S|R363E|V522Y|G662F,L167W|D177M|D225Q|D564V， D177M|D225Q|D564T|Q684A，D177M|D225Q|D564V|Q626F|Q684N, L167W|D177M|Q626F|Q684G, L167ff|D177M|D564V|Q626F|Q684A, P176L| K3 2 0 S | V5 2 2Y | G66 2C,K345EIN369T|G372A|P661E|S683W, K320S|R363E, E170F|Q226Y|T242S|S312YG372AIV603GIP661FIT666C， T242S|T666C, Q226Y|T666C, Q216E|S312K|S692K,P176LIG662F, P176L|Q226W|Q316T|K320Y|R363E, P176L|Q226W|K320S|R363E|G662F,P176L|Q22 6ff|Q316T|K320Y|V522Y,P176L|Q22 6ff|K320Y|R363E|V522Y,Q226WIK320Y|R363E, Q316T|K320Y|R363E|G662F, Q226W|Q316T|R363E|V522Y|G662F,P176L|K320S|R363E|G662C, R363E|G547A|G662C, Q226W|K320S|G662C, P176L|Q226W IQ316TIK320Y R363E|G662F, P176L|Q226W|Q316T|K320S|G662F, P176L|Q316T|K320SIR363E|V522Y|G662C, K320Y|R363E|G662C, E170F|Q226Y|N369Y|G372A|P661F,和 L167W I D177M|D564T|Q626F|Q684G, K345E|N369E|G372A|S683W, N369E|S683W,K345EIN369EIP661EIS683W， K345E|P661E|S683W, N263C|K345E|N369E,N263CIN369TIP661E，K345E|N369E|S683W, N26 3C|K34 5E|N369T|K428N,N26 3 CI N369E I K428NI P66 1E，N 26 3 C| N 369T | S683W，N2 6 3C |N369T,N369TIG372A|K428N|S683W, N263C|G372A, N263C|K345E|N369E|G372A|P661E,或P176L|Q226ff|G547A|G662Co68.根据权利要求65至67中任一项所述的BGLl变体，其具有相比野生型BGLl改善的(e)和(g)活性，其中所述BGLl变体包含如下置換L167W|D225Q|Q626F|Q684D, L167W|D225Q|Q684N, L167W|D225Q|D564T|, Q626F|Q684C,Q626F|Q684D, N264M|R265P|N369I|D370W, R179V|N238F|D370W, R179V|N238F|K656R,R179VIN264M|D370W, R179V|N238F|R265M, R179V|R265P|D370W|K656R,R179V|N238ff|N264M|R265M|N369I, Rl 79V| N369 I D 3 7 0W| K6 56R,R179VIN264M|R265P|K656R, R179V|R265M|N369I, R179V|N264M|R265M|D370W|K656R,R179V|N264M|R265M|N369I, Rl79V|N238W|N264M, N238W|N264M|R265M|D370W,R179V|N238ff|R265P|D370ff, Rl79V|N238W|N264M...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·R·博特，T·卡佩尔，B·凯莱门，F·格德盖布，R·W·霍姆斯，S·克拉利，P·克勒伊托夫，I·尼古拉耶夫，P·范德克利，J·范利斯豪特，S·范斯蒂格特坦斯，G·沃格特恩坦茨，M·桑德格伦，
申请(专利权)人：丹尼斯科美国公司，
类型：
国别省市：