免疫球蛋白G Fc区结合多肽制造技术

本发明专利技术提供了一种免疫球蛋白GFc区结合多肽，所述多肽由选自i)的氨基酸序列和与其具有至少95%同一性的氨基酸序列组成。还提供了用于生产所述多肽、包含所述多肽的组合物、编码所述多肽的多核苷酸以及所述多肽的多聚体的方法，以及使用所述多肽的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及结合免疫球蛋白G Fe (IgG Fe)的多肽及其生产方法。所述多肽在例如抗体和/或Fe融合蛋白生产中的分离和/或纯化中，例如在色谱法中具有工业应用。背景 在单克隆抗体和Fe融合蛋白的工业生产中，经常使用色谱法进行纯化。由于蛋白A对IgG的Fe部分的天然亲和力，来自金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的蛋白A早已在所述应用中被用作亲和配体。其后，蛋白A以其整体，及其五个单独的Fe-结合结构域被用作用于合理设计具有改进性能的经工程改造亲和配体的起始点。例如，蛋白A的B结构域被用作用于产生经工程改造的、IgG Fe-结合的、单个结构域蛋白 Z 的起始点(Nilsson B 等，Protein Eng I (2) : 107-13,1987)。为了改进该蛋白在碱性条件下，例如在工业色谱过程期间用于原位清洗程序的条件下的稳定性，Linhult等(Proteins 55 (2) :407-16，2004)提出包含突变的天冬酰胺残基的蛋白Z变体。GE Healthcare、Uppsala、Sweden 将该突变体进一步开发为市售产品 MAbSelect SuRe。W02009/146755公开了另外的具有IgG Fe亲和力的Z变体。W02009/080811描述了基于蛋白Z的突变的结合蛋白，其中天然的IgG Fe结合被修饰。已表明具有五个单独的IgG Fe-结合结构域的天然蛋白A只结合2分子的IgG或3分子的重组Fe片段，但事实上五个结构域中的每一个都具有结合一个IgG的能力(BirgerJansson, PhD 论文，Stockholm, Sweden, 1996, ISBN 91-7170-656-9)。尽管目前使用的IgG Fe亲和配体比较成功，但仍需要改进，特别是关于改进化学计量(stoichiometry)并同时保持且理想地改进对于酸性和碱性条件的稳定性的联合需求。不断提供具有对于IgG Fe的亲和力的试剂仍是一个极为关注的问题。专利技术概述 根据其第一方面，本专利技术提供免疫球蛋白G Fe (IgG Fe)结合多肽，所述多肽包含选自以下的氨基酸序列权利要求1.一种免疫球蛋白G Fe区结合多肽，所述多肽包含选自以下的氨基酸序列 I)X -( Ifim-H iJ-KFDKEQQN AFYEiLXirLPX^ LTEEQRNAFi Qklkdx36PSQS Aellaeakql Xs,EAQA-[觸叔 2\ π-Ccterm-iXcterm 其中，彼此独立地， X1为P或无； I间隔基a为由1-3个氨基酸残基组成的氨基酸序列； X17为任何氨基酸残基； X20为任何氨基酸残基； X36为除D外的任何氨基酸残基； X51为任何氨基酸残基； I间隔基21为由0-20个氨基酸残基组成的氨基酸序列； Xcteem 为D或无； 以及η 为 1-4 ; 和 ii)与i)中限定的序列具有至少95%同一性的氨基酸序列。2.权利要求I的IgGFe-结合多肽，其中[间隔基1Λ选自A、AE和AEA。3.权利要求2的IgGFe-结合多肽，其中U司隔基八为Α。4.前述权利要求中任一项的IgGFe-结合多肽，其中X17为H。5.前述权利要求中任一项的IgGFe-结合多肽，其中X2tl为除N外的任何氨基酸残基，例如Τ。6.权利要求1-4中任一项的IgGFe-结合多肽，其中X2tl为N。7.前述权利要求中任一项的IgGFe-结合多肽，其中X36选自E和Α，例如Ε。8.前述权利要求中任一项的IgGFe-结合多肽，其中X51为除N外的任何氨基酸残基，例如D。9.权利要求1-7中任一项的IgGFe-结合多肽，其中X51为N。10.前述权利要求中任一项的IgGFe-结合多肽，其中I间隔基2~]的所有氨基酸残基独立地选自A、E、F、G、I、K、L、P、Q、R、S、T和V，特别地选自A、E、G、K、P、Q、R、S和T，例如选自G、Q和S。11.前述权利要求中任一项的IgGFe-结合多肽，其中V间隔基2~\为G。12.前述权利要求中任一项的IgGFe-结合多肽，其中η为I。13.权利要求1-11中任一项的IgGFe-结合多肽，其中η为2。14.权利要求1-11中任一项的IgGFe-结合多肽，其中η为4。15.前述权利要求中任一项的IgGFe-结合多肽，所述多肽与IgG Fe结合，使得该相互作用的Kd值为至多I X 10_6 M016.权利要求15的IgGFe-结合多肽，所述多肽与IgG Fe结合，使得该相互作用的Kd值为至多1Χ10—7 M017.权利要求16的IgGFe-结合多肽，所述多肽与IgG Fe结合，使得该相互作用的Kd值为至多5X10_8 M018.前述权利要求中任一项的IgGFe-结合多肽，所述多肽能够与人IgG分子的Fe部分结合。19.权利要求18的IgGFe-结合多肽，所述多肽能够与1、2和4类人IgG结合。20.前述权利要求中任一项的IgGFe-结合多肽，所述多肽能够结合到IgG Fe的CH2和CH3结构域之间的界面。21.前述权利要求中任一项的IgGFe-结合多肽，其中所述氨基酸序列i)选自SEQ IDNO:5-6。22.权利要求1-20中任一项的IgGFe-结合多肽，其中X1为P且Xcteem为D。23.权利要求22的IgGFe-结合多肽，其中所述氨基酸序列i)选自SEQ ID N0:l_4。24.—种多核苷酸,所述多核苷酸包含编码权利要求1-23中任一项的多肽的核苷酸序列。25.—种多聚体多肽,所述多聚体多肽包含 至少两个亚单位，各亚单位为权利要求22-23中任一项的多肽；和 N-末端前导肽，所述前导肽包含作为其末端残基的D残基。26.—种多核苷酸,所述多核苷酸包含编码权利要求25的多聚体多肽的核苷酸序列。27.生产权利要求25的多聚体多肽的方法，所述方法包括 提供含有表达载体的宿主细胞，所述表达载体包含权利要求26的多核苷酸， 在使得能够将所述多核苷酸表达为多聚体多肽的条件下培养所述宿主细胞，和 分离所得的多聚体多肽。28.生产权利要求22-23中任一项的多肽的方法，所述方法包括 使用权利要求27的方法生产权利要求25的多聚体多肽， 使用酸催化的水解在包含序列DP的位点切割所述多聚体多肽，得到权利要求22-23中任一项的多肽和N-末端前导肽，和 分离权利要求22-23中任一项的所述多肽。29.—种IgG Fe-结合组合物，所述组合物包含至少一种权利要求1-23中任一项的多肽，其通过半胱氨酸残基Cctemh与非肽、非核酸的接头聚合物共价偶联。30.权利要求29的IgGFe-结合组合物，所述组合物包含I至4种权利要求1_23中任一项的多肽，各多肽通过其半胱氨酸残基Cctemh与所述接头聚合物共价偶联。31.权利要求29-30中任一项的IgGFe-结合组合物，其中所述接头聚合物为聚(乙二醇)。32.生产权利要求29-31中任一项的组合物的方法，所述方法包括 提供至少一种权利要求1-23中任一项的多肽，和 通过所述多肽中存在的半胱氨酸残基Cctemh将所述多肽与非肽、非核酸的接头聚合物偶联。33.权利要求32的方法，其中所述本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：L阿布拉姆森，
申请(专利权)人：通用电气健康护理生物科学股份公司，
类型：发明
国别省市：