提供了一种III型纤连蛋白(10Fn3)结合结构域，其具有与降低免疫原性相关的新设计。本申请描述了可选择的10Fn3结合结构域，其中某些免疫原区在产生结合子(binder)时不被修饰，以便保持被宿主生物体识别为自身抗原。本申请还描述了10Fn3结合结构域，其中HLA锚定区被破坏，从而降低了相邻区域的免疫原性贡献。还提供了具有被修饰区域的新型组合的10Fn3结构域，其能够以高亲和力结合期望的靶标。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】提供了一种III型纤连蛋白(10Fn3)结合结构域，其具有与降低免疫原性相关的新设计。本申请描述了可选择的10Fn3结合结构域，其中某些免疫原区在产生结合子(binder)时不被修饰，以便保持被宿主生物体识别为自身抗原。本申请还描述了10Fn3结合结构域，其中HLA锚定区被破坏，从而降低了相邻区域的免疫原性贡献。还提供了具有被修饰区域的新型组合的10Fn3结构域，其能够以高亲和力结合期望的靶标。【专利说明】具有降低的免疫原性的纤连蛋白结合域序列表本申请包含一个序列表，其已经通过EFS-Web以ASCII格式提交，本文援引并入其全部内容。所述ASCII拷贝于2012年10月31日生成，命名为MXI523PC.txt，大小为48，779字节。引言纤连蛋白是一个大蛋白，在细胞外基质的形成和细胞-细胞相互作用中发挥至关重要的作用；它由多个重复的三种类型(1、II和III型)的小结构域构成。III型纤连蛋白结构域(Fn3)是一个大的亚家族，其成员经常作为细胞粘附分子、细胞表面激素和细胞因子受体、分子伴侣和碳水化合物结合结构域的一部分被发现。综述可见 Bork&Doolittle、Proc Natl Acad Sci USA89(19):8990-4(1992) ；Bork et al.、J MolB1l.242(4):309-20(1994) ;Campbell&Spitzfaden、Structure〗(5):333-7(1994)；Harpez&Chothia、J Mol B1l.238 (4):528-39(1994))。基于纤连蛋白的支架(Fibronectin based scaffold)是一个具有免疫球蛋白样折叠的蛋白的家族。这些蛋白一般使用衍生自III型纤连蛋白(Fn3)或Fn3样结构域的支架，以天然或工程化抗体(即多克隆、单克隆或单链抗体)的特征方式发挥作用，并且具有结构上的优势。具体地讲，这些抗体模拟物的结构经常被优化以获得最佳的折叠、稳定性和溶解性，即使是在通常会导致抗体结构和功能丧失的条件下。基于纤连蛋白的支架蛋白的一个实例是Adnectins?(Adnexus、Bristol-Myers Squibb的一个全资子公司)。已经显不，基于纤连蛋白的支架的CDR样环区能够被修饰，从而进化成能够结合任何兴趣化合物的蛋白。例如美国专利N0.7，115，396描述了 Fn3结构域蛋白，其中对BC、DE和FG环的改变产生了高亲和力的TNFa结合子。美国专利N0.7，858，739描述了 Fn3结构域蛋白，其中对BC、DE和FG环的改变产生了高亲和力的VEGFR2结合子。蛋白药物在患者体内经常伴随一定水平的免疫原性。这些免疫原性问题可能导致蛋白药物效力降低，以及在患者体内产生潜在的有害免疫应答。因此，获得免疫原性降低的、并可同时用于治疗和诊断目的的改良纤连蛋白结构域支架蛋白，将是有利的。概要本申请的一个方面提供基于纤连蛋白的支架多肽，其包含经过修饰的环和支架区，例如与改进的靶结合关联的β_链，的新组合。本申请的另一个方面提供了具有降低的免疫原性的新型基于纤连蛋白的支架多肽。 在一些实施方案中，本文中提供的多肽包含人3型纤连蛋白第十C°Fn3)结构域，其中该1QFn3结构域包含⑴相对于野生型人1QFn3结构域(SEQ ID NO:1或6)的相应环，在从BC、DE和FG环中选出的至少一个北极环(north pole loop)的氨基酸序列中含有修饰，和(?)相对于野生型人uiFr^结构域(SEQ ID NO:1或6)的相应环，在从AB、CD和EF环中选出的至少一个南极环(south pole loop)的氨基酸序列中含有修饰,其中该至少一个修饰的北极环和至少一个修饰的南极环贡献于对相同靶标的结合。在一些实施方案中，多肽的至少一个北极环或至少一个南极环具有野生型人uiFr^结构域(SEQ ID NO:1或6)的相应环的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文中提供的多肽包含人3型纤连蛋白第十C°Fn3)结构域，其中uiFr^结构域包含(i)AB、BC、⑶、DE、EF、或FG环中的至少一个的氨基酸序列中相对于野生型人uiFr^结构域(SEQ ID NO:1或6)的相应环的修饰，和(ii)至少一个链的氨基酸序列中相对于野生型人’113结构域(SEQ ID NO:1或6)的相应β -链的修饰，其中该至少一个修饰的环和至少一个修饰的链贡献于对相同靶标的结合。在一些实施方案中，多肽可在至少一个链和至少两个环中包含修饰的氨基酸序列。在一些实施方案中，多肽的至少一个修饰的环是从BC、DE和FG环中选出的北极环，且至少一个修饰的环是从AB、CD和EF环中选出的南极环，并且两个环均贡献于对靶标的结合。在一些实施方案中，至少一个环不是修饰的，即至少一个环具有对应于野生型人kiFM结构域(SEQ ID NO:1或6)的相应环的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文中提供的多肽包含人3型纤连蛋白第十C°Fn3)结构域，其中所述wFnS结构域相对于野生型人uiFr^结构域(SEQ ID NO:1或6)的相应环的序列在CD和FG环的氨基酸序列中含有修饰，并且其中CD和FG环贡献于对相同靶标的结合。在一些实施方案中，相对于野生型人kiFM结构域(SEQ ID NO:1或6)的⑶环的序列，⑶环的至少3、4、5、6、7、8、9、10或11个氨基酸被修饰。在一些实施方案中，⑶环中对应于野生型人10Fn3结构域(SEQ ID NO:1或6)氨基酸残基46或47的一个或多个氨基酸残基与那些位置处的野生型氨基酸相同。在一些实施方案中，相对于野生型人uiFr^结构域(SEQ ID NO:1或6)的FG环的序列，FG环的至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13个氨基酸被修饰。在一些实施方案中，FG环中对应于野生型人1QFn3结构域(SEQ ID NO:1或6)的氨基酸残基75或87的一个或多个氨基酸残基与那些位置处的野生型氨基酸相同。在一些实施方案中，相对于野生型人wFM结构域(SEQ ID NO:1或6)的相应环的氨基酸序列，CD环和/或FG环的氨基酸序列的长度延长或长度缩短。还构想了它们的组合。例如，相对于野生型人kiFM结构域(SEQ ID NO:1或6)的相应环的氨基酸序列，CD和FG环中的至少一个的氨基酸序列的长度可以延长，且相对于野生型人kiFM结构域(SEQ ID NO:1或6)的相应环的氨基酸序列，CD和FG环中的至少一个的氨基酸序列的长度缩短。在一些实施方案中，相对于野生型人10Fn3结构域(SEQ ID NO:1或6)的相应β -链的序列，包含修饰的CD和FG环的wFM结构域的多肽可以进一步在β -链C、β -链D、β -链F和/或β -链G的一个或多个中含有氨基酸序列修饰。在一些实施方案中，具有修饰的CD和FG环的多肽可以进一步在BC环的至少一部分中含有氨基酸序列修饰，例如BC环中对应于野生型人uiFr^结构域(SEQ ID NO:1或6)的氨基酸残基30和31的一个或多个氨基酸残基的修饰。在一些实施方案中，一个或多个修饰的链与经过修饰的环一起贡献于对相同靶标的结合。在一些实本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种包含人3型纤连蛋白第十(10Fn3)结构域的多肽，其中所述10Fn3结构域包含(i)相对于野生型人10Fn3结构域(SEQ ID NO:1)的相应环，在从BC、DE和FG环中选出的至少一个北极环的氨基酸序列中的修饰，和(ii)相对于野生型人10Fn3结构域(SEQ ID NO:1或6)的相应环，在从AB、CD和EF环中选出的至少一个南极环的氨基酸序列中的修饰，其中该至少一个被修饰的北极环和至少一个被修饰的南极环贡献于对相同靶标的结合。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：J戴维斯，D利波夫塞克，R坎福森，
申请(专利权)人：百时美施贵宝公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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