一种硫酸鱼精蛋白的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种硫酸鱼精蛋白的制备方法。《中国药典》2010年版提高了硫酸鱼精蛋白的质量标准，增加了比旋度（-65°至-85°）指标的要求。在鱼的精子中，鱼精蛋白通常以核酸-蛋白质的形态存在。采用传统的生产工艺，成品硫酸鱼精蛋白中因含核酸杂质，其比旋度仅能达到-30°，已不能满足新药典对硫酸鱼精蛋白的质量要求。本发明专利技术采用3%硫酸提取、50-79℃温水提取、乙醇沉淀、以及低温处理四种生化技术，以鲑鱼的鱼精为原料，制得硫酸鱼精蛋白，其比旋度达到-72.0°。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医药领域，具体地说涉及以适宜的鱼类新鲜成熟精子为原料，提取硫酸鱼精蛋白的工艺方法。
技术介绍
I.硫酸鱼精蛋白的作用I)硫酸鱼精蛋白体外循环心脏手术中不可或缺的、无法替代的对抗肝素的药物，在心脏手术结束时，患者需要使用硫酸鱼精蛋白，以解除抗凝，防止大出血，是必备的“救命药”、“救心药”。2)硫酸鱼精蛋白与胰岛素结合，延迟胰岛素释放，从而延长胰岛素的降血糖作用，用来制造长效胰岛素。 3)强壮和辅助治疗男性不育。国内外研究结果表明，硫酸鱼精蛋白中的DNA能促进细胞活化、强化生殖能力；精氨酸刺激垂体释放性腺激素的作用。此外，硫酸鱼精蛋白中含有较高的锌，锌盐可使血浆睾酮水平与精子数目成倍增加。因此硫酸鱼精蛋白DNA、精氨酸、锌协同作用，治疗因精子分泌不足和精子缺乏引起的男性不育症。4)此外，硫酸鱼精蛋白是一种广谱、高效、安全的新型天然食品防腐剂。2、硫酸鱼精蛋白传统生产工艺硫Ife鱼精蛋白的传统生广工艺，在鱼的精子中，鱼精蛋白通常以核Ife _蛋白质的形态存在。即核蛋白结合键宽松不固，甚至易分开，所以可用硫酸使其分离，制成鱼精蛋白硫酸盐，反应式如下核酸-蛋白质+H2SO4 —鱼精蛋白SO3+核酸+H2O利用硫酸鱼精蛋白溶于水、不溶于乙醇，以及耐高温的特性，而核酸微溶于水，不耐高温的特性，联合采用3体积％的硫酸提取、80-85°C温水提取、(TC低温处理以及有机溶剂乙醇沉淀生化技术，从而实现从鱼精子中将鱼精蛋白与核酸分离，纯化得到硫酸鱼精蛋白，硫酸鱼精蛋白成品效价能够达到135 iu/mg。《中国药典》2010年版提高硫酸鱼精蛋白的质量标准，增加了比旋度(-65°至-85° )指标要求。采用传统的生产工艺，其比旋度仅能达到-30°，已不能满足新药典对硫酸鱼精蛋白的质量要求。
技术实现思路
本专利技术的目是提供了。具体地，本专利技术的目的是提供了一种能够提高硫酸鱼精蛋白比旋度的方法。本专利技术采用以下工艺方案予以实现上述目的鲑鱼的鱼精，粉碎，加水提取，过滤，滤液加乙醇沉淀，得到硫酸鱼精蛋白粗品，粗品再经下述操作(I)硫酸提取工序硫酸鱼精蛋白粗品中，按I :2-1 7的比例加入3%硫酸溶液，搅拌2-3小时，过滤，取滤液；滤液按体积I :3-1 6的比例加乙醇，沉淀12小时后，过滤，固体称重；(2)升温提取工序按重量的I :2-1 8的比例加入水搅拌溶解，溶液加热至50 79°C，保温20 30分钟，过滤取滤清液，量取滤液体积。按I :3-1 6的比例加乙醇沉淀，下层沉淀物称重；按重量I :2-1 8的比例加水溶解，用氢氧化钠溶液调节pH :7. 0-13.0，然后溶液加热50 79°C，保温20 30分钟，过滤，取滤液；(4)低温析出工序滤液2_15°C低温处理，12小时后，倾去上层清液，析出油状物，称其重量； (5)干燥工序按重量I :2-1 8的比例加水溶解，溶解后，用硫酸调节pH :1. 0-6. 0，按I :3_1 6的比例加乙醇沉淀。12小时后，弃去上层乙醇，沉淀物用无水乙醇洗涤，2-3次，用五氧化二磷作吸水剂，真空干燥，干燥后即得精制品；与现有技术相比，本专利技术的优点和积极效果本专利技术在传统生产工艺的基础上，采用2体积％ -10体积％硫酸提取、50-79°C温水提取、乙醇沉淀、以及2-15°C处理四种生化技术，从鲑鱼中提纯得到硫酸鱼精蛋白。与传统工艺相比，新生产技术的创新之处在于，工艺简单，成本低，过程温和，制得的硫酸鱼精蛋白的比旋度能够达到-72. 0°，满足《中国药典》2010年版的标准要求，同时，效价升高至约155iu/mg。具体实施例方式实施例I :鲑鱼的鱼精，粉碎，加水提取，过滤，滤液加乙醇沉淀，得到硫酸鱼精蛋白粗品，粗品再经下述操作(I)硫酸提取工序硫Ife鱼精蛋白粗品300. 5g中，加入3体积硫酸溶液601ml，揽祥2小时，过滤，取滤液；滤液用95%乙醇1800ml沉淀，12小时后，弃去上层乙醇，下层沉淀物过滤，弃去滤液，固体称重60g ；(2)升温提取工序固体加240ml水搅拌溶解，溶液继续加热至65 °C，保温30分钟，过滤取滤清液，弃去滤渣，滤液量取体积240ml ；加入95%乙醇720ml沉淀，在次日弃去上层乙醇，下层沉淀物称重55g ；沉淀物中加纯化水220ml溶解，用5mol/L的氢氧化钠溶液调节pH 11. 2，然后把溶液加热65°C，保温30分钟，过滤，取滤液弃去滤渣；(4)低温析出工序低温10°C，静置12小时后，倾去上层清液，析出油状物，称其重量50. 55g ；(5)干燥工序油状物中加纯化水202. 2ml溶解，溶解后，用2. 5mol/L硫酸调节pH :3. 0，加95%乙醇610ml沉淀。再次日，弃去上层乙醇，沉淀物用无水乙醇洗涤2次，用五氧化二磷作吸水剂，真空干燥，干燥后即得精制品26. 52g。实施例2:将实施例I中的步骤(I)中的3体积％硫酸溶液变为6体积％硫酸溶液；将步骤(2)的溶液加热温度改为加热至70°C ;将步骤(3)中的低温处理温度改为3°C，其他工艺条件与实施例I相同，最终得到精制品26. 78g。实施例3 将实施例I中的步骤(I)中的3体积％硫酸溶液变为9体积％硫酸溶液；将步骤(2)的溶液加热温度改为加热至75°C ;将步骤(3)中的低温处理温度改为14°C，其他工艺条件与实施例I相同，最终得到精制品27. 06g。传统生产工艺青岛康原药业有限公司硫Ife鱼精蛋白成品检验报告单 权利要求1.，其特征在于包括以下步骤 (1)硫酸提取工序 硫酸鱼精蛋白粗品中加入硫酸溶液提取，过滤，提取液中加乙醇，沉淀，过滤取固体； (2)升温提取工序 固体加水溶解，溶液加热至50 79V，保温，过滤，滤液用乙醇沉淀，过滤取固体,固体再加水溶解，调节PH，保温50 79°C，过滤，取滤液； (3)低温析出工序 滤液经低温处理，析出油状物； (4)干燥工序 油状物再加水溶解，调节PH，加乙醇沉淀，过滤，所得固体用无水乙醇洗涤，真空干燥即得硫Ife鱼精蛋白。2.根据权利要求书I所述的方法，其特征在于，步骤(I)中，所述硫酸溶液的体积浓度为2%至10% ;粗品与硫酸溶液的重量比为1:2至1:7 ;提取时间为1-4小时；提取液与乙醇的体积比为1:2至1:6。3.根据权利要求书2所述的方法，其特征在于，步骤(I)中，所述硫酸溶液的体积浓度为4%至8% ;粗品与硫酸溶液的重量比为1:3至1:6 ;提取时间为2-3小时；提取液与乙醇的体积比为1:3至1:5。4.根据权利要求书I所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，固体与水的重量比均为1:2至1:8 ;滤液与乙醇的体积比为1:2至1:6 ;pH调节为7. 0-13.0。5.根据权利要求书3所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，固体与水的重量比均为1:4至1:6 ;滤液与乙醇的体积比为1:3至1:5 ;pH调节为8. 0-10. O。6.根据权利要求书I所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述低温处理的温度为2-15。。。7.根据权利要求书I所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，油状物与水的重量比为1:2至1:8 ;pH调节至I. 0-6. 0 ;油状物加水溶解后的体积与乙醇的体积比为1:2至1:6。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种硫酸鱼精蛋白的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）硫酸提取工序硫酸鱼精蛋白粗品中加入硫酸溶液提取，过滤，提取液中加乙醇，沉淀，过滤取固体；（2）升温提取工序固体加水溶解，溶液加热至50～79℃，保温，过滤，滤液用乙醇沉淀，过滤取固体，固体再加水溶解，调节pH，保温50～79℃，过滤，取滤液；？（3）？低温析出工序滤液经低温处理，析出油状物；（4）干燥工序油状物再加水溶解，调节pH，加乙醇沉淀，过滤，所得固体用无水乙醇洗涤，真空干燥即得硫酸鱼精蛋白。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘乃山，葛翠凤，刘振海，刘翠珍，
申请(专利权)人：青岛康原药业有限公司，
类型：发明
国别省市：