本发明专利技术主要涉及可特异性识别和结合由切除修复交叉互补基因1(excision?repair?cross-complement-action?group?1，ERCC1)编码的蛋白的单克隆抗体4F9，产生所述单克隆抗体的杂交瘤，包含所述单克隆抗体的组合物，以及所述单克隆抗体的使用方法和用途。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫学领域。具体地，本专利技术主要涉及可特异性识别和结合由切除修复交叉互补基因 I (excision repair cross-complement-action group I, ERCCI)编石马的蛋白的单克隆抗体4F9,产生所述单克隆抗体的杂交瘤,包含所述单克隆抗体的组合物，以及所述单克隆抗体的使用方法和用途。
技术介绍
恶性肿瘤是严重威胁人类健康的疾病之一，钼类药物参与的化疗是其重要的治疗手段。以顺钼为代表的钼类药物是20世纪60年代开发的高效广谱的无机抗肿瘤药，其属于破坏DNA结构和功能的细胞毒药物。经过长期研究和发展，已相继成功开发了顺钼 (Cisplatin)、卡钼(Carboplatin)、奈达钼(Nedaplatin)、奥沙利钼(Oxaliplatin)、舒钼(Sunpla)和洛钼(Lobaplatin)等钼类药物,这些钼类药物常与其他抗肿瘤药物联合使用，用于卵巢癌、肺癌、胃癌、宫颈癌、头颈部癌、恶性淋巴瘤等多种癌症的临床治疗。然而，肿瘤对钼类药物的耐药性严重影响了这些药物的治疗疗效。产生耐药性的原因很多,其中DNA损伤修复能力的增强是导致对钼类药物的耐药性的主要原因。人体DNA受各种因素损伤后.其修复主要是通过核苷酸切除修复(Nueleotideexcision repair，NER)途径来完成。在该途径中起重要作用的核苷酸ERCC基因家族能对核苷酸进行切除和修复，以减少DNA的损伤。其中，切除修复交叉互补基因Uexcisionrepair cross-complement-action group 1，ERCC1)所编码的蛋白参与 DNA 链的损伤识别和切割，在NER途径中起着至关重要的作用，是ERCC基因家族和NER途径的关键基因。ERCCl蛋白是核苷酸剪切修复复合体的5'核酸内切酶，见于所有的肿瘤细胞中，其表达水平差异很大。顺钼主要是通过与作用靶点DNA形成钼-DNA聚合物对肿瘤细胞发挥作用。它在肿瘤细胞中水解为双氯双氨钼，然后与DNA形成聚合物，从而影响细胞的复制与转录，导致DNA损伤。研究显示，ERCCl过表达可使损伤的DNA迅速修复，导致对顺钼的耐药性。因此，NER过程增强是导致对顺钼的耐药性的一个重要机制。2010年NCCN指南指出，ERCCl可以作为非小细胞肺癌(NSCLC)的预后判断和疗效预测的标记物。一方面，与低水平的ERCCl相比，高水平的ERCCl预示NSCLC患者的生存效果更佳(与治疗无关)，同时高水平的ERCCl还预示钼类药物的化疗效果不佳。研究显示，在完全切除的、未接受过围手术期化疗或放疗的NSCLC患者中，ERCClmRNA的水平是生存预后指标。研究还显示，高表达ERCCl的患者生存期显著长于低表达者。另一方面，已有多项转化型研究证明，ERCCl水平可用于预测钼类药物治疗NSCLC的疗效，高水平者耐药，低水平者敏感。Olaussen等发现，在国际癌辅助化疗研究(IALT)中，仅低表达ERCCl蛋白的肿瘤患者可从含顺钼的辅助化疗中获益。Bepler等报道，在前瞻性采集自一项基于社区的III期随机临床研究的肿瘤标本中，其原位ERCCl蛋白表达水平与卡钼/吉西他滨治疗或吉西他滨单药治疗后的疾病缓解成显著负相关，即低表达ERCCl的患者缓解率更高。因此，目前临床上在进行肿瘤辅助化疗之前，通常通过免疫组织化学(IHC)病理实验确定肿瘤细胞中ERCCl的表达水平，以指导钼类化疗药物的使用。IHC实验的核心为特异性结合ERCCl的单克隆抗体，其性能的优劣直接决定着整个检测的灵敏度和特异性，决定着指导临床用药的有效性。当前，国内外广泛用于临床病理一线的ERCCl单克隆抗体为8F1，但已有研究显示，8F1在与ERCCl特异性结合的同时，还与非特异蛋白发生交叉反应，这直接影响了免疫组化结果的特异性和可靠性。因此，本领域迫切需要这样的单克隆抗体，其不仅可与ERCCl特异性结合，而且与细胞内的其他非特异蛋白不发生交叉反应，以显著提高IHC实验(例如，用于非小细胞肺癌、卵巢癌等肿瘤的病理诊断的IHC实验)的特异性和可靠性，从而更有效和更精确地对使用钼类化疗药物的辅助化疗进行疗效预测及预后判断
技术实现思路
在本专利技术中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的蛋白质和核酸化学、分子生物学、细胞和组织培养、微生物学、免疫学相关术语和实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的术语和常规步骤。同时，为了更好地理解本专利技术，下面提供相关术语的定义和解释。如本文中所使用的，术语“切除修复交叉互补基因I (ERCCl) ”是本领域内熟知的，其是ERCC基因家族和NER途径的关键基因，参与DNA链的损伤识别和切割，在NER途径中起着至关重要的作用。ERCCl蛋白是核苷酸剪切修复复合体的5'核酸内切酶，见于所有的肿瘤细胞中，其表达水平差异很大。ERCCl蛋白的示例性编码核苷酸序列如SEQID N0:1所/Jn o如本文中所使用的，术语“抗体”是指通常由两对相同的多肽链(每对具有一条“轻”(L)链和一条“重”(H)链)组成的免疫球蛋白分子。抗体轻链可分类为K和\轻链。重链可分类为U、S、Y、a或e ,并且分别将抗体的同种型定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在轻链和重链内，可变区和恒定区通过大约12或更多个氨基酸的“J”区连接，重链还包含大约3个或更多个氨基酸的“D”区。各重链由重链可变区(Vh)和重链恒定区(Ch)组成。重链恒定区由3个结构域((^、(^和^^)组成。各轻链由轻链可变区和轻链恒定区(Q)组成。轻链恒定区由一个结构域Q组成。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子，包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(Clq)的结合。Vh和'区还可被细分为具有高变性的区域(称为互补决定区(CDR))，其间散布有较保守的称为构架区(FR)的区域。各Vh和Vl由按下列顺序FRU CDRU FR2、CDR2、FR3、⑶R3、FR4从氨基末端至羧基末端排列的3个⑶R和4个FR组成。各重链/轻链对的可变区(vh和vl)分别形成抗体结合部位。氨基酸至各区域或结构域的分配遵循Kabat Sequencesof Proteins of Immuno logical Interest(National Institutes of Health,Bethesda,Md. (1987and 1991)),或 Chothia&Lesk(1987) J. Mol. Biol. 196 :901-917 ;Chothia 等人(1989)Nature 342 :878-883的定义。术语“抗体”不受任何特定的产生抗体的方法限制。例如，其包括，特别地，重组抗体、单克隆抗体和多克隆抗体。抗体可以是不同同种型的抗体，例如，IgG(例如，IgGl, IgG2，IgG3 或 IgG4 亚型)，IgAl, IgA2，IgD, IgE 或 IgM 抗体。如本文中所使用的，术语抗体的“抗原结合部分”是指全长抗体的一个或多个部分，所述部分保持结合抗体所结合的相同抗原(例如，ERCC1)的能力，与完整抗体竞争对抗原的特异本文档来自技高网...
【技术保护点】
特异性结合ERCC1蛋白的单克隆抗体4F9或其抗原结合部分，所述单克隆抗体4F9由保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，具有保藏号CGMCC5196的杂交瘤产生。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：何为无，马东辉，袁克湖，隋璐，王超，汪芳迅，袁丽，
申请(专利权)人：无锡傲锐东源生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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