【技术实现步骤摘要】
本申请涉及免疫检测，具体涉及抗人nut兔单克隆抗体及其应用。
技术介绍
1、睾丸核蛋白（nuclear protein in testis，nut），是由nutm1基因（位于15q14）编码表达，在生理条件下，在睾丸减数分裂后的生精细胞中表达。当nutm1基因与参与转录调控的基因融合时，可成为致癌驱动因素形成肿瘤，即nut癌，通常发生于胸部、头部和颈部的中线部位，又被称为中线癌。现在多种非中线器官中被诊断出来，例如肺（1/2）、头颈部（1/3）、胸腺、膀胱、肝/胰、脑等组织也有报道。中线癌多为为原始形态，在大多数情况下没有特定的结构，由均匀的肿瘤细胞组成，肿瘤细胞形态单一，未分化，具有高级细胞核和活跃的有丝分裂。
2、全基因组测序发现nut癌可能是由单一的nutm1融合基因驱动的，很少有其他致癌基因突变，nut基因与其它基因发生交互易位，形成nut-variant融合基因，所表达的融合蛋白能够显著抑制鳞状细胞分化并驱动癌症发生，约70-80%的病例发现nut基因与19p13.1的brd4基因发生易位，形成brd4-nutm1融合基因，brd3-nutm1融合（约15-20%）和nsd3-nutm1融合（约6%），体细胞遗传学改变是中线癌的发病基础。目前带有nutm1断点15q14探针的fish被认为是诊断的金标准，然而不能达到100%杂交，会有些nut断点通过该探针无法检测出来，判读专业性强且只能检测有无nut基因重排，无法确定具体的伴侣基因，且检测费用较贵。
3、几乎100%中线癌病例表达nut核蛋白（
技术实现思路
1、为了克服上述技术问题，本申请提供了灵敏度高、特异性强、亲和力高的抗人nut兔单克隆抗体，及其在免疫组织化学检测试剂盒中的应用，为与人nut相关的中线癌的诊断提供帮助。
2、第一方面，本申请提供了一种抗人nut蛋白的兔单克隆抗体，所述兔单克隆抗体包括轻链可变区（vl），所述轻链可变区包括lcdr1-3，所述lcdr1包含如seq id no.4所示的氨基酸序列，所述lcdr2包含如seq id no.5所示的氨基酸序列，所述lcdr3包含如seq idno.6所示的氨基酸序列。
3、进一步地，所述兔单克隆抗体还包括重链可变区（vh），所述重链可变区包括hcdr1-3，所述hcdr1包含如seq id no.8所示的氨基酸序列，所述hcdr2包含如seq id no.9所示的氨基酸序列，所述hcdr3包含如seq id no.10所示的氨基酸序列。
4、进一步地，所述轻链可变区（vl）包含如seq id no.3所示的氨基酸序列，或包含seq id no.3所示的氨基酸序列中任一个或多个氨基酸经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸和/或末端修饰得到的具有90％以上同源性的氨基酸序列，优选地，具有90%、92%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同源性的氨基酸序列。
5、进一步地，所述轻链可变区（vl）全长为 106个氨基酸，其fr的4个结构域氨基酸数分别为26、17、36和10，cdr的3个结构域氨基酸数分别为6、3和8，lcdr1、lcdr2和lcdr3的区域分别为27-32aa、50-52aa、89-96aa，其氨基酸序列分别：qsissr（seq id no.4）；qas（seqid no.5）；qsyyytas（seq id no.6）。
6、进一步地，所述重链可变区包含如seq id no.7所示的氨基酸序列，或包含seq idno.7所示的氨基酸序列中任一个或多个氨基酸经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸和/或末端修饰得到的具有90％以上同源性的氨基酸序列，优选地，具有90%、92%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同源性的氨基酸序列。
7、进一步地，所述重链可变区（vh）含110个氨基酸，其fr的4个结构域氨基酸数分别为24、17、36和11；cdr的3个结构域氨基酸数分别为8、7和7，hcdr1、hcdr2和hcdr3对应的氨基酸区域分别为25-32aa、50-56aa、93-99aa，序列为gftinsyh（seq id no.8）；isdgaty（seqid no.9）；astdyyn（seq id no.10）。
8、采用上述技术方案，本申请提供的抗人nut蛋白的单克隆抗体，可与nut蛋白特异性结合，显著提高了nut蛋白免疫检测的特异性、准确性和可靠性。
9、第二方面，本申请还提供了一种分离的多核苷酸，编码第一方面所述的兔单克隆抗体。
10、第三方面，本申请还提供了一种重组表达载体，其含有本申请第二方面所述的多核苷酸。
11、采用上述技术方案，通过分离的多核苷酸以及重组表达载体，可以在体外高效制备所述的抗人nut蛋白的兔单克隆抗体，利用分子重组的方法制备该抗体可达到制备周期短、利用效率高的技术效果，同时还可以实现对抗体下游的编辑功能。
12、第四方面，本申请还提供了第一方面所述的兔单克隆抗体在制备标记正常组织和病变组织中人nut蛋白的免疫组化检测试剂盒中的应用。
13、进一步地，所述正常组织包含睾丸、扁桃体、甲状腺、胰腺，所述病变组织包括肿瘤组织，所述肿瘤组织包括中线癌肿瘤细胞和甲状腺乳头状癌肿瘤细胞。
14、采用上述技术方案，可以将本申请的抗人nut蛋白的兔单克隆抗体作为一抗，用于正常组合和肿瘤组织中nut蛋白的标记，显著提高了nut蛋白免疫检测的特异性和可靠性。
15、第五方面，本申请还提供了一种人nut蛋白的免疫组织化学检测试剂盒，所述免疫组织化学检测试剂盒包括一抗试剂，所述一抗试剂含有第一方面所述的单克隆抗体。
16、进一步地，所述试剂盒还包括抗原修复液、内源性过氧化物酶阻断剂、超敏二抗试剂、dab底物缓冲液、dab浓缩显色液、苏木素染色液。
17、采用上述技术方案，可以更方便的实现正常组织和肿瘤等病变组织中nut蛋白的ihc检测。
18、相对于现有技术而言，本申请提供的抗人nut蛋白的单克隆抗体，可与nut蛋白特异性结合，显著提高了nut蛋白免疫检测的特异性、准确性和可靠性。同时，本申请提供的免疫组织化学检测试剂盒，采用抗人nut蛋白的单克隆抗体作为一抗试剂，可以实现正常组织和肿瘤等病变组织中人nut蛋白的标记，能够满足病理医生对抗nut单克隆抗体的需求，可以为病理医生的精准诊断提供保障。
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1.一种抗人NUT蛋白的兔单克隆抗体，其特征在于，所述兔单克隆抗体包括轻链可变区（VL），所述轻链可变区包括LCDR1-3，所述LCDR1包含如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的兔单克隆抗体，其特征在于，所述兔单克隆抗体还包括重链可变区（VH），所述重链可变区包括HCDR1-3，所述HCDR1包含如SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含如SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含如SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的兔单克隆抗体，其特征在于，所述轻链可变区（VL）包含如SEQID NO.3所示的氨基酸序列，或包含SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列中任一个或多个氨基酸经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸和/或末端修饰得到的具有90％以上同源性的氨基酸序列。
4.根据权利要求2所述的兔单克隆抗体，其特征在于，所述重链可变区包含
5.一种分离的多核苷酸，其特征在于，编码权利要求1-4中任一所述的兔单克隆抗体。
6.一种重组表达载体，其特征在于，其含有权利要求5所述的多核苷酸。
7.权利要求1-4任一所述的兔单克隆抗体在制备标记正常组织和病变组织中人NUT蛋白的免疫组化检测试剂盒中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述正常组织包含睾丸、扁桃体、甲状腺、胰腺，所述病变组织包括肿瘤组织，所述肿瘤组织包括中线癌肿瘤细胞和甲状腺乳头状癌肿瘤细胞。
9.一种人NUT蛋白的免疫组织化学检测试剂盒，其特征在于，所述免疫组化检测试剂盒包括一抗试剂，所述一抗试剂含有权利要求1-4任一所述的单克隆抗体。
10.根据权利要求9所述的免疫组织化学检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括抗原修复液、内源性过氧化物酶阻断剂、超敏二抗试剂、DAB底物缓冲液、DAB浓缩显色液、苏木素染色液。
...【技术特征摘要】
1.一种抗人nut蛋白的兔单克隆抗体，其特征在于，所述兔单克隆抗体包括轻链可变区（vl），所述轻链可变区包括lcdr1-3，所述lcdr1包含如seq id no.4所示的氨基酸序列，所述lcdr2包含如seq id no.5所示的氨基酸序列，所述lcdr3包含如seq id no.6所示的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的兔单克隆抗体，其特征在于，所述兔单克隆抗体还包括重链可变区（vh），所述重链可变区包括hcdr1-3，所述hcdr1包含如seq id no.8所示的氨基酸序列，所述hcdr2包含如seq id no.9所示的氨基酸序列，所述hcdr3包含如seq id no.10所示的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的兔单克隆抗体，其特征在于，所述轻链可变区（vl）包含如seqid no.3所示的氨基酸序列，或包含seq id no.3所示的氨基酸序列中任一个或多个氨基酸经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸和/或末端修饰得到的具有90％以上同源性的氨基酸序列。
4.根据权利要求2所述的兔单克隆抗体，其特征在于，所述重链可变区包含如seq idno...
【专利技术属性】
技术研发人员：张冉冉，王晶晶，扈晓敏，叶露，任琪，柳孟姣，W·付，张杨，
申请(专利权)人：无锡傲锐东源生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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