本发明专利技术属于临床医学检验领域，具体涉及一种PCT/CRP检测用胶体金试纸条，包括试纸条底衬，以及试纸条底衬上顺次相互搭接粘贴的样品垫、涂覆有金标抗体的聚酯膜、包被膜及吸水纸，包被膜上设有一条包被兔抗鼠IgG抗体的控制线，包被膜上还设有与所述控制线平行的两条检测线，分别包被能与待检抗原PCT特异性结合的抗体以及与待检抗原CRP特异结合的抗体；所述金标抗体有两种，分别为胶体金标记的能与待检抗原PCT特异性结合的抗体以及与待检抗原CRP特异结合的抗体。本发明专利技术能同时检测PCT/CRP，提高了炎症反应诊断准确率，操作简便。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于临床医学检验领域，具体涉及PCT/CRP联合检测用胶体金试纸条及其制备方法。
技术介绍
降钙素原(procalcitonin，PCT)是无激素活性的降钙素前体物质，是由116个氨基酸组成，分子量为13KD的糖蛋白。PCT由神经内细胞分泌(包括甲状腺、肺和胰腺组织细胞)表达，经酶切分解为降钙素(CO、羧基端肽及氨基端肽。PCT在人体内的半衰期为25-30h,稳定性好，在正常人血清中含量极低。 在导致全身炎症反应综合征(SIRS)的许多情况下，诸如细菌性感染、胰腺炎、烧死、多发伤，血中CT前肽物质的所剪切产物异常升高，其中PCT是最主要的产物，而CT无明显变化。血PCT水平与感染及损伤的严重程度呈正相关，且已成为用于脓毒症、严重脓毒症、脓毒休克的诊断和疗效监测的有效指标。C反应蛋白(c-reactive protein,简称CRP)是ー种能和肺炎链球菌的荚膜C多糖结合，机体受到微生物入侵或组织损伤等刺激时肝细胞合成的Y球蛋白，分子量约为105KD,痕量存在于健康人血清中(约580ng/ml)。当发生炎症疾病或组织损伤6 8小时内，血清或血浆CRP量迅速升高，并在48 72小时达高峰，但随着病情改善或组织结构功能恢复其含量也恢复正常。因此血清或血浆中C反应蛋白的水平，可以作为判断有无感染、疾病是否处于活动期的指标。研究表明在诊断炎症有关疾病，単独使用一种指标CRP或PCT不能有效和准确诊断。如在自身免疫疾病的炎症性疾病(如红斑狼疮、反应性关节炎和炎症性肠病)活动期间，仅测定PCT含量，会发现其与正常人的含量没有显著差异。但是如果测定CRP吋，CRP含量明显高于正常人。因此，结合这两种指标的结果，才能最终确定病人是否有炎症反应。Hammer等对78例心脏或肺脏移植患者研究显不，急性排异期C反应蛋白和白细胞记数升尚，而PCT无变化。因此ー种指标不能确定是否炎症感染。合并全身细菌或真菌感染时PCT>lng/ml，PCT用来鉴别急性排异反应与感染。李卫军.医学新知，2010，研究血清降钙素原与C反应蛋白联合检测在下呼吸道感染性疾病中的临床价值，结果表明在鉴别细菌性与非细菌性感染中，PCT、CRP及PCT+CRP的敏感度分别为78. 6%,97. 6%和97. 6%,特异度分别为80. 0%、37· 1%和82. 9%。结论联合检测血清中PCT、CRP含量可提高下呼吸道感染性疾病诊断与分类的可靠性。但是，目前还没有一种能够同时检测PCT和CRP的方法或者手段。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有技术不足，提供ー种PCT/CRP联合检测用胶体金试纸条，可以解决现有技术存在的不能在一个试纸条中同时检测PCT/CRP的问题。本专利技术的另ー个目的是提供该试纸条的制备方法。本专利技术的目的可通过采用以下技术方案予以实现 PCT/CRP联合检测用胶体金试纸条，包括试纸条底村、以及试纸条底衬上顺次相互搭接粘贴的样品垫、涂覆金标抗体的聚酯膜、包被膜及吸水纸，包被膜上设有包被兔抗鼠IgG抗体的控制线，包被膜还设有与所述的控制线平行的两条检测线，分别包被能与待检抗原PCT特异性结合的抗体以及与待检抗原CRP特异结合的抗体；所述金标抗体有两种，分别为胶体金标记的能与待检抗原PCT特异性结合的抗体以及与待检抗原CRP特异结合的抗体。所述样品垫为两层样品垫。所述的与待检抗原PCTiAPCT,所述待检抗原CRP是人CRP。所述的与待检抗原特异结合的抗体为能够与待检抗原特异结合的单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段或嵌合抗体。所述的两条检测线中一条包被PCT单克隆抗体，另一条包被CRP单克隆抗体。所述的金标抗体为胶体金标记的PCT单克隆抗体和胶体金标记的CRP单克隆抗体。PCT/CRP检测用胶体金试纸条的制备方法，包括如下步骤 1)制备包被膜用包被缓冲液分别稀释能与待检抗原之一特异结合的抗体以及兔抗鼠IgG抗体，并将稀释后的三种抗体分别平行地喷于硝酸纤维素膜的中部，三种抗体渗入硝酸纤维素膜后分别形成两条检测线和兔抗鼠IgG抗体包被的控制线； 2)制备涂覆金标抗体的聚酯膜分别制备两种胶体金标记的能与待检抗原之一特异结合的抗体，利用这两种抗体混合物涂覆聚酯膜； 3)组装试纸条在试纸条底衬上顺次相互搭接粘贴样品垫、涂覆有金标抗体的聚酯膜、包被膜及吸水纸。步骤I)所述的制备包被膜用包被缓冲液稀释PCT单克隆抗体①或PCT多克隆抗体、CRP单克隆抗体①或CRP多克隆抗体以及兔抗鼠IgG抗体，并将稀释后的三种抗体分别平行地喷于硝酸纤维素膜的中部上，三种抗体渗入硝酸纤维素膜后分别形成包被PCT单克隆抗体①或多克隆抗体的检测线、包被CRP单克隆抗体①或多克隆抗体的检测线和兔抗鼠IgG抗体的控制线。步骤2)所述的制备涂覆金标抗体的聚酯膜的方法是将胶体金调节为碱性条件下，加入链亲和素溶液，封闭反应后，加入接有生物素的抗体反应，离心去上清，沉淀以金标抗体保存液恢复体积。所述的接有生物素的抗体连接有PCT单克隆抗体②或接有生物素的CRP的单克隆抗体②。本专利技术所述的PCT/CRP联合检测胶体金试纸条在同时检测人PCT和人CRP中的应用。本试纸条可以用来检测PCT和CRP液体样品，操作时，将全血或血浆，血清按一定的量滴加在本试纸条的样品垫上，当出现的结果是在试纸条的PCT检测线、CRP检测线和控制线位置上各出现一条紫红色带时，表现为两者都是阳性。PCT检测线和控制线各出现一条红色帯，说明PCT为阳性；CRP检测线和控制线各出现一条红色帯，说明CRP为阳性；仅试纸条的控制线8位置出现一条紫红色带时，为阴性结果；在试纸条的控制线8位置上未出现紫红色条带时，为无效結果。有益效果本专利技术采用了现代POCT检测中最流行的胶体金技术，通过试纸条上同时设置包被有PCT单克隆抗体或PCT多克隆抗体检测线、包被有CRP单克隆抗体或CRP多克隆抗体的检测线和兔抗鼠IgG抗体的控制线，能够同步检测连个指标(待测抗原或蛋白)，并且两种抗原不会相互干扰，结果准确，快速，操作简便，可以广泛用于炎症反应等疾病的检测。附图说明图I本专利技术的胶体金试纸条的横断面结构示意 其中1、底衬；2、第一层样品垫；3、第二层样品垫；4、聚酯膜；5、包被膜；6、吸水纸；7、包被PCT抗体的检测线；8、包被CRP抗体的检测线；9、包被兔抗鼠IgG抗体的控制线。具体实施例方式 下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作进ー步详细的说明。 实施例I 如图I所示，PCT/CRP联合检测用胶体金试纸条，包括试纸条底衬1，以及试纸条底衬上顺次相互搭接粘贴的第一层样品垫2和第二层样品垫3、涂覆金标抗体的聚酯膜4、包被膜5和吸水纸6，包被膜5中部有一条包被鼠抗PCT的单克隆抗体16B5检测线7、一条包被鼠抗CRP单克隆抗体DF92的检测线8和一条包被兔抗鼠IgG抗体的控制线9。以上抗体购自Fitzgerald 公 ロJ。上述检测线7还可以是包被双抗PCT的多克隆抗体，检测线8还可以是鼠抗CRP的多克隆抗体。所述多克隆抗体是采用本领域熟练技术人员熟知的常规方法免疫鼠获得抗血清制备而得。涂覆金标抗体的聚酯膜中有由胶体金颗粒标记的PCT单克隆抗体2E1和由胶体金颗粒标记的CRP单克隆抗体CC8。以上抗体购自南京强欣生本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.PCT/CRP联合检测用胶体金试纸条，包括试纸条底衬，以及试纸条底衬上顺次相互搭接粘贴的样品垫、涂覆有金标抗体的聚酯膜、包被膜及吸水纸，包被膜上设有一条包被兔抗鼠IgG抗体的控制线，其特征在于包被膜上还设有与所述控制线平行的两条检测线，分别包被能与待检抗原PCT特异性结合的抗体以及与待检抗原CRP特异结合的抗体；所述金标抗体有两种，分别为胶体金标记的能与待检抗原PCT特异性结合的抗体以及与待检抗原CRP特异结合的抗体。2.根据权利要求I所述的PCT/CRP联合检测胶体金试纸条，其特征在于所述的样品垫为两层样品垫。3.根据权利要求I所述的PCT/CRP联合检测胶体金试纸条，其特征在于所述的与待检抗原PCT是人PCT，所述待检抗原CRP是人CRP。4.根据权利要求I所述的PCT/CRP联合检测胶体金试纸条，其特征在于所述的与待检抗原特异结合抗体是与待检抗原特异结合的单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段或嵌合抗体。5.根据权利要求I所述的PCT/CRP联合检测胶体金试纸条，其特征在于所述两条检测线中一条包被PCT单克隆抗体①，另一条包被CRP单克隆抗体①。6.根据权利要求I所述的PCT/CRP联合检测胶体金试纸条，其特征在于所述金标抗体为胶体金标记的PCT单克隆抗体②和CRP单克隆抗体②。7.根据权利要求I所述的PCT/CRP联合检测用胶体金试纸条的制备方法，其特征在于包括如下步骤 1)制备包被膜用包被缓冲液分别稀释能与待检抗原PCT特异...
【专利技术属性】
技术研发人员：苏恩本，颜彬，王勇，黄力，陈伟，孔婷婷，
申请(专利权)人：南京基蛋生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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