一种用于制备99mTc-GSA的冻干粉药盒及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种制备99mTc-GSA的冻干粉药盒，它是由以下方法制备得到的：1）制备2-亚氨基-2-甲氧基乙基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷；2）制备GSA；3）制备GSA的冻干粉。本发明专利技术所述的用于制备99mTc-GSA的冻干粉药盒能够方便地应用于临床的肝功能检测。本发明专利技术还提供所述药盒的制备方法和在制备用于检测肝脏GSA摄取指数的药物中的应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及ー种医用药盒，具体涉及ー种用于制备99mTc-GSA的冻干粉药盒，及其制备方法和应用。
技术介绍
哺乳动物肝细胞膜上存在血浆去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)是介导肝脏清除血流中去唾液酸糖蛋白(ASGP)的专一位点。ASGPR可以在一定程度上反映出有效肝细胞功能，在肝炎、肝硬化或肝癌等肝损伤性疾病发生吋，其数量和活性均受到损害，因此对ASGPR进行定量分析有助于在肝脏切除手术前更好地判断剰余肝的功能。在众多评价肝功能的手段中，肝脏显像方法发展迅速，特别是核医学科应用单光子发射型计算机断层扫描仪(SPECT)进行肝细胞的摄取、代谢、排泄等功能过程的动态观察，可获得肝细胞代谢的放射性-时间曲线，并对肝细胞功能进行定量分析，这种方法被认为是最有发展前途的肝功能评价方法之一 O肝受体显像剂的发展是进行SPECT显像的基础，1984年Vera等通过化学的方法将半乳糖结构与人血清白蛋白相连得到新乳糖白蛋白(NGA)，并通过99mTc标记进行肝的显像研究。1986年Kubota等研制了ー种99mTc标记的ニ亚こ基三胺五こ酸半乳糖酰人血清白蛋白(99mTc-GSA),通过增加双功能连接剂DTPA结构，增强了标记的稳定性，減少了非特异性结合。其不但能够评价肝脏的形态和功能，有助于肝病的早期诊断，而且对研究体内物质代谢、肝脏的生理学和病理生理学也有重要价值。目前日本已有GSA药盒应用于临床，但欧美和中国尚未开展此项技术。国内已经有了 GSA合成并实验性应用于核医学科显像的GSA显像剂，但是其应用的缓冲液导致合成过程复杂且不稳定，因此国内缺乏可供临床使用、合成稳定、易于推广的GSA冻干配套药盒。用放射性核素标记ASGPR的特异性配体GSA后注射入机体，采用SPECT技术可以反映ASGPR的功能状态及其在肝脏的三维分布。根据99mTc-GSA的SPECT扫描图像，可以得到评价肝脏功能储备的參数[毛一雷；2008 ;杜顺达，2008]。关于參数的计算，目前主要包括两大类(1)简单參数应用不同时间心、肝放射性比值获得清除指数HH15，受体指数LHL15和校正的受体指数LH ；(2)建立药代动力学模型[Miki，2001]，得到ASGPR受体浓度、受体总数、最大清除率等參数。文献显示，上述两大类參数虽然部分反映了肝脏功能，但却有着明显的缺陷，无法为临床提供准确的判断依据。所述的简单參数HH15、LHL15和LH的测算过程是在机体注射99mTc-GSA之后，开始动态显像，通过常规的显像软件定义心脏和肝脏的感兴趣区，用15分钟时心脏感兴趣区的放射性活度(H15)值除以3分钟时的值(H3)，计算出清除指数(HH15)，即HH15=H15/H3，反映了肝脏转运去唾液酸糖蛋白的能力；用注射后15分钟时肝脏感兴趣区的放射性活度(L15)除以H15与L15之和，计算出受体指数(LHL15)，即LHL15=L15/ (L15+H15)，反映了肝脏摄取GSA的速率。为消除心脏放射性对于肝脏放射性影响所造成的偏差，用HH15校正LHL15，获得校正的受体指数(LH)，即LH=LHL15/HH15。简单參数的缺陷主要包括I)简单參数只利用了 3分钟和15分钟时的数据，而大多数动态采集的信息都未加以利用，并且肝脏对于99mTc-GSA的摄取峰值通常在30分钟以后才出现。2)严格意义上讲，简单參数都无法评价各肝脏局部的功能，因为如果以肝区局部放射性计数L15'来计算LHL15，将有可能出现两种情况LHL15’=L15，/(L15+H15)LHL15’=L15’ /(L15’+H15)由于L15远大于H15，因而由第一种方法得到的LHL15实际上代表的是感兴趣区域 占全肝的放射性计数比值，而不是其肝功能绝对值；如果按照第二种方法来计算，我们将发现被切除部分和剰余部分的肝脏LHL15'之和将大于全肝的LHL15。3)尽管HH15、LHL15以及LH与传统的肝功能评价方法成正相关，但如果要精确计算剩余肝占全肝的功能比，该參数必须与肝功能之间保持严格线性关系，然而，HH15、LHL15以及LH尚无法满足这样的条件。药代动力学模型是以生理学和药物代谢特点为依据建立的模型，能够获得具有生理学意义的肝功能參数。目前已有的方法包括根据Vera的三室模型计算出的受体密度[R]。和受体数量R。。根据Ha-Kawa的五室模型计算出的最大清除率GSA-Rmax,以及根据Miki的五室模型计算出的去唾液酸糖蛋白受体总数Rtotal等。所获得的參数均与传统肝功能检查结果有良好的相关性，部分结果甚至可以进行三维应用。但建立药代动力学模型方法的主要缺陷在于涉及到的參数太多，试图通过一次非线性拟合而获得多个參数的解常常会产生初值依赖的问题，对于我们最关心的參数不一定能够得到最优解；同时由于核医学数据的图像质量相对较差，勾画感兴趣区所获得的原始数据存在较大的随机性，用迭代算法做非线性拟合时常会产生无法收敛(即无解)的情況。因而此类方法尽管层出不穷，但到目前为止大多只停留在科研阶段，未得到广泛应用。总之，现有技术中，GSA制备方法的多个环节存在着明显的缺陷，导致合成方法不够稳定，得不到标记率高的GSA药盒；而且对于肝脏功能的计算方法要么过于简单，不符合药物代谢的生理过程；要么过于复杂，造成了计算的不稳定。鉴于此，本专利技术提出ー种mTc-GSA冻干粉合成方法，能够得到更加方便应用于临床的肝功能检测试剂。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供ー种用于制备99mTc-GSA的冻干粉药盒，能够方便地应用于临床的肝功能检测。本专利技术另ー个目的在干提供所述冻干粉药盒的制备方法，该方法具有标记简単、标记率高和成本低的特点，能够制备出符合临床要求的能稳定合成的GSA药盒，并且能使制备的配合物同样具有良好的生物性能。本专利技术的再ー个目的在于提供所述冻干粉药盒在制备用于检测肝脏GSA摄取指数的药物中的应用。本专利技术的上述目的通过以下技术方案实现提供ー种用于制备99mTc-GSA的冻干粉药盒，它是由以下方法制备得到的I) 2-亚氨基-2-甲氧基こ基-1-硫代_β-D-半乳吡喃糖苷的制备本步骤的合成路线如下OhJ^I0OAcl^0 よニ f- =NHHBr οαΓ^Ι r ohJ^o |-°^=νη^QH、> |/0AC ) _、I(4)AC \| 2 _く。Acd. く。H、OCH3 OHOAoOAcOAcOH 其中，a代表 Ac2O, HClO4, 30^40°C /Br2, P ；b代表硫脲,丙酮；c 代表氯こ腈，K2CO3, NaHSO3 ；d 代表CH3ONa, CH3OH ；I. I) I-溴代-2，3，4，6_四_0_こ酰基-a -D-半乳糖的制备250mL四ロ烧瓶中，加入32mLこ酸酐和O. 16mL高氯酸。室温搅拌下，分批加入8g半乳糖，保持温度在3(T40°C。半乳糖逐渐溶解，溶液颜色变深。待全部溶解后，加热控温3(T40°C反应半个小时。停止加热,加入2. 4g红磷。在水浴下,用滴液漏斗向烧瓶中滴加4. 64mL溴和2. 88mL水。反应放热，控制温度在20°C以内。滴加完毕后，控温18 20°C继续反应2h。反应结束后，加入24mL氯仿，然后冲入装有64mL冰水的烧杯中，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. 一种用于制备99mTc-GSA的冻干粉药盒，它是由以下方法制备得到的 . 1)2-亚氨基-2-甲氧基乙基-I-硫代-P -D-半乳吡喃糖苷的制备 .1.D I-溴代_2，3，4，6-四-O-乙酰基-a -D-半乳糖的制备 .250mL四口烧瓶中，加入32mL乙酸酐和0. 16mL高氯酸，室温搅拌下，分批加入8g半乳糖，保持温度在3(T40°C，半乳糖全部溶解后，加热控温3(T40°C反应半个小时，停止加热后加入2. 4g红磷，在水浴下，向烧瓶中滴加4. 64mL溴和2. 88mL水，反应放热，控制温度在20°C以内，滴加完毕后，控温18 20°C继续反应2h，反应结束后，加入24mL氯仿，然后冲入装有64mL冰水的烧杯中，搅拌后过滤，所得滤液分离出有机相，水相20mLX3的氯仿萃取，合并有机相，有机相用IOmLX 3冰水和IOmLX 3饱和碳酸氢钠溶液洗至近中性，用无水硫酸钠干燥过夜后，旋干溶剂，得到浅黄色粘稠物，加入等体积的乙醚使之全部溶解，再加入两倍体积的石油醚，于冰箱内静置析晶，得到蜡状白色固体，过滤后真空干燥，得到I-溴代-2，3，4，6-四-0-乙酰基-a -D-半乳糖14. 6g ；.1.2) 2-S-(2, 3, 4, 6-四-0-乙酸基-0 -D-半乳卩比喃糖基)~2~异硫服氧漠酸盐的制备 将步骤I. I)所得I-溴代_2，3,4, 6-四-0-乙酰基-a-D-半乳糖14. 6g溶于14mL丙酮中，加入2. 7g硫脲，加热回流15min，得到白色固体，过滤洗涤后，真空干燥得到产物.2-S- (2，3，4，6-四-0-乙酰基-P -D-半乳吡喃糖基)_2_异硫脲氢溴酸盐15. 4g ； .1.3)氰甲基-2，3，4，6-四-0-乙酰基-I-硫代-P -D-半乳吡喃糖苷的制备 将步骤I. 2)所得2_S_(2, 3, 4, 6-四-0-乙酸基-D-半乳卩比喃糖基)-2_异硫服氧溴酸盐3. 8g加入20mL由丙酮和水以1:1的摩尔比构成的混合溶液，同时加入2mL氯乙腈，搅拌溶解，加入I. 6g碳酸钾和2g亚硫酸氢钠,室温搅拌30min,然后倒入80mL冰水,室温搅拌2h后过滤，得到浅粉色固体2. 6g，用无水甲醇重结晶，得到氰甲基-2，3，4，6-四-0-乙酰基-I-硫代-P -D-半乳吡喃糖苷白色针状晶体I. 6g ； .1.4)2-亚氨基-2-甲氧基乙基-I-硫代-P -D-半乳吡喃糖苷的制备 在步骤I. 3)所得氰甲基-2，3, 4, 6-四-0-乙酸基-I-硫代-P -D-半乳卩比喃糖苷I. Olg中，加入0. lmol/L甲醇钠/甲醇溶液12. 5mL，水浴控温20°C左右，反应48h，停止反应后，旋干溶剂，得到2-亚氨基-2-甲氧基乙基-I-硫代-P -D-半乳吡喃糖苷的浅黄色固体； . 2)GSA的制备 . 2.1)用0. lmol/L pH7.0的HEPES缓冲液溶解0.6g人血白蛋白，全部溶解后，加入40mgDTPA环酐，室温搅拌反应15min，得到DTPA-HSA溶液； .2.2)取6mL步骤2. I)所得DTPA-HSA溶液，加入0. lmol/L pH8. 5的硼酸缓冲液稀释至20mL，调pH值至8. 5，将稀释好的DTPA-HSA溶液加入步骤I)制备得到的2-亚氨基-2-甲氧基乙基-I-硫代-P -D-半乳吡喃糖苷，待固体全部溶解后，37°C搅拌反应3h后，用二次蒸馏水透析平衡72h，得到GSA ；. 3)GSA冻干粉的制备 .3.I)将步骤2)得到的GSA溶于0. 2mol/L pH3. 5醋酸-醋酸钠缓冲液中；然后在其中加入含有还原剂的盐酸溶液，混合均匀，使溶液中还原剂比配体的重量为1:10^800,并控制溶液pH在2. 5^4. 0之间；所述的还原剂为SnCl2 2H20 ； .3. 2)按照酒石酸钾钠比配体为1:广160的重量比，在步骤3. I)得到的溶液中加入酒石酸钾钠，然后用充氮二次水定容；其中，充氮二次水中充氮量要足以保证还原剂不被氧化； 3.3)将步骤3. 2)制备的溶液无菌过滤后，分装于容器中，经冷冻干燥后，加塞密封，即得到所述的用于制备99mTc-GSA的冻干粉药盒。2.权利要求I所述的用于制备99mTc-GSA的冻干粉药盒的制备方法，包括以下步骤 1)2-亚氨基-2-甲氧基乙基-I-硫代-P -D-半乳吡喃糖苷的制备 I. D I-溴代_2，3，4，6-四-O-乙酰基-a -D-半乳糖的制备 250mL四口烧瓶中，加入32mL乙酸酐和0. 16mL高氯酸，室温搅拌下，分批加入8g半乳糖，保持温度在3(T40°C，半乳糖全部溶解后，加热控温3(T40°C反应半个小时，停止加热后加入2. 4g红磷，在水浴下，向烧瓶中滴加4. 64mL溴和2. 88mL水，反应放热，控制温度在20°C以内，滴加完毕后，控温18 20°C继续反应2h，反应结束后，加入24mL氯仿，然后冲入装有64mL冰水的烧杯中，搅拌后过滤，所得滤液分离出有机相，水相20mLX3的氯仿萃取，合并有机相，有机相用IOmLX 3冰水和IOmLX 3饱和碳酸氢钠溶液洗至近中性，用无水硫酸钠干燥过夜后，旋干溶剂，得到浅黄色粘稠物，加入等体积的乙醚使之全部溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：毛一雷，杜顺达，
申请(专利权)人：毛一雷，杜顺达，
类型：发明
国别省市：