生物酶手性合成立普妥中间体ATS-4制造技术

本发明专利技术公开了一种酶法合成(S)-4-氯-3-羟基-丁酸乙酯(ATS-4，立普妥中间体)及其衍生物的制备方法，其制备过程用以下反应式表示：上式中，R为甲基，乙基(ATS-4)，丙基，丁基，或苄基，以及其它C1-C8任意取代烷基。其主要原理是在缓冲溶液中，利用基因重组的氧化还原酶和相关辅酶还原化合物I中的羰基，得到手性化合物II(ATS-4，R为乙基)。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及手性(S)-4-氯-3-羟基-丁酸こ酯(ATS-4，立普妥中间体)及其衍生物的酶法制备，属于酶在手性合成中的应用领域，本方法也属于绿色化学及基因工程领域。
技术介绍
(S)-4-氯-3-羟基-丁酸こ酯(ATS-4)是生产立普妥的关键手性中间体之一，中国大多用化学法在生产。成本高，纯度低，污染尤其严重，对环境的影响非常大。用生物转化来生产这些中间体，有明显的优势。目前，Ciba, Diverva, DSM, Codixis等公司在ATS-4合成中采用酶法エ艺。在已有エ艺和知识的基础上，我们筛选得到关键酶，包括酮还原酶，葡萄糖脱氢酶，在已知蛋白结构的基础上通过半随几饱和突变和定向突变等方法増加酶活性，手性反应选择性(光学纯度e. e值上升)，热稳定性和对有机溶剂耐受能力。因此，生物催化活性得以大大提高，反应的手性选择性也得到了加強，这就使得ATS-4的生产成本大大降低。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是将提供ー种反应步骤短、成本较低、产品光学纯度高的(S)-4-氯-3-羟基-丁酸こ酯(ATS-4)及其衍生物的制备方法。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是所述的手性(S)-4-氯-3-羟基-丁酸こ酯(ATS-4)及其衍生物的制备方法，其制备过程用以下反应式表示

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.手性酶法合成(S)-4-氯-3-羟基-丁酸乙酯(ATS-4，立普妥中间体)及其衍生物的制备方法，其制备过程用以下反应式表示2.Candida magnoliae酮还原酶的变体基因和蛋白序列。变体的序列和野生型序列有1-10个氨基酸改变。这些变体可更高效催化还原。3.根据权利要求I所示的手性酶法合成(S)-4-氯-3-羟基-丁酸酯衍生物，其特征在于利用大肠杆菌高效表达酮还原酶。4.根据权利要求I所示的手性酶法合成(S)-4-氯-3-羟基-丁酸酯衍生物，其特征在于利用这个大肠杆菌工程菌直接催化。5.根据权利要求I所示的手性酶法合成(S)-4-氯-3-羟基-丁酸酯衍生物，其特征在于利用一种噬热菌的葡萄糖脱氢酶变体高效还原NADP辅酶。变体和野生型相比有三个氨基酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩国霞，姚亦明，徐霆，
申请(专利权)人：苏州国镝医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：