与ＩＬ－１８结合的抗体及其纯化方法技术

本文公开了抗ＩＬ－１８抗体，包括其抗原结合部分。呈现了用于从样品基质中分离且纯化抗ＩＬ－１８抗体的一种或多种方法。这些分离的抗ＩＬ－１８抗体可以用于临床情况以及研究和开发中。还描述了包括分离的抗ＩＬ－１８抗体的药物组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】与IL-18结合的抗体及其纯化方法与相关申请的交叉参考本申请要求于2008年10月20日提交的美国临时申请系列号61/196，751的利益，其在此整体引入作为参考。
技术介绍
人白细胞介素-18是作为无生物学活性的193氨基酸前体蛋白质合成的鉴定的细胞因子。前体蛋白质例如通过胱天蛋白酶-1或胱天蛋白酶-4的切割释放显示生物学活性的156 氨基酸成熟蛋白质，所述生物学活性包括T细胞增殖的共刺激、NK细胞细胞毒性的增强、通过T细胞和NK细胞的IFN-γ生产的诱导、和T辅助1型(Thl)分化的加强。此外，IL-18是人单核细胞促炎介质的有效诱导物，所述促炎介质包括IL-8、肿瘤坏死因子- a (TNF-α ) 和前列腺素E2 (PGE2)0IL-18通过增强在Th 1细胞上的Fas配体的功能活性在免疫调节和炎症中起潜在作用。IL-18还在肾上腺皮质中表达，并且因此可以是分泌的神经免疫调谐剂 (neuro-immunomodulator)，在应激经历后协调(orchestrating)免疫系统中起重要作用。产生促炎细胞因子例如IFN-γ、IL-2和TNF-β的Thl细胞已牵涉于介导许多自身免疫疾病，包括多发性硬化(MS)、类风湿性关节炎(RA)、1型或胰岛素依赖性糖尿病 (IDDM)、炎性肠病(IBD)和牛皮癣。因此，THl促进性细胞因子例如IL-18的拮抗作用将预期抑制疾病发展。11-18特异性mAbs可以用作拮抗剂。在体内，IL-18通过pro-IL-18的切割形成，并且它的内源活性看起来解释疮疱丙酸杆菌0°. ac/ ^)中的IFN- γ生产和LPS介导的致死率。阻断人疾病中的IL-18生物学活性是许多疾病中的治疗策略。这可以使用可溶性受体或针对细胞结合的IL-18受体的封闭抗体来实现。细胞因子结合蛋白质(可溶性细胞因子受体)对应于其各自细胞表面细胞因子受体的细胞外配体结合结构域。它们通过细胞表面受体共同的前信使RNA的可变剪接得到， 或通过细胞表面受体的蛋白酶剪切得到。此种可溶性受体已在过去得到描述，尤其包括 IL-6和IFN- γ的可溶性受体。命名为护骨蛋白(0PG，也称为破骨细胞抑制因子一0CIF)的一种细胞因子结合蛋白，TNFR/Fas家族的成员，看起来是仅作为分泌的蛋白存在的可溶性受体的首个例子。已暗示IL-18与慢性炎性疾病中致病性的进展有关，包括内毒素休克、肝炎和自身免疫性糖尿病。基于在小鼠模型中在脂多糖诱导的急性肝损伤中显示升高水平的IL-18 的实验假定IL-18在肝损伤发展中的可能作用。然而，多功能因子IL-18在肝损伤发展中的机制迄今为止仍未得到阐明。近期研究指出IL-18在关节代谢中起促炎作用。研究者显示IL-18由关节软骨细胞产生，并且诱导促炎和分解代谢应答。IL-18 mRNA由软骨细胞中的IL-I β诱导。软骨细胞产生IL-18前体，并且响应IL-I刺激，分泌成熟形式的IL-18。关于IL-18对软骨细胞作用的研究进一步显示它抑制TGF-β诱导的增殖且增强氧化氮生产。IL-18刺激几种基因在正常人关节软骨细胞中的表达，包括诱导型氧化氮合酶、诱导型环加氧酶、IL-6和溶基质蛋白酶。基因表达与相应蛋白质的合成相关。用IL-18处理正常人关节软骨增加糖胺聚糖的释放。这些发现将IL-18鉴定为调节软骨细胞应答且促成软骨降解的细胞因子。已暗示IL-18在类风湿性关节炎中起促炎作用。IL-18水平已显示在类风湿性关节炎患者的滑液中显著升高。研究者已在类风湿性关节炎滑膜组织(synovial tissue)内检测到比骨关节炎对照中显著更高水平的IL-18 mAb和蛋白质。还显示IL-12或IL-15与 IL-18的组合在体外诱导通过滑膜组织的IFN-Y生产。此外，胶原/不完全弗氏佐剂免疫接种的小鼠的IL-18施用促进侵蚀性、炎性关节炎的发展，从而暗示IL-18在体内可能是促炎的。IL-18在其他自身免疫疾病的发展中的作用已得到证实。因此，已证实IL-18表达紧接在疾病发作前在非肥胖糖尿病(NOD)小鼠的胰和脾中是显著增加的。此外，已证实 IL-18施用增加鼠实验性变应性脑脊髓炎(EAE)的临床严重性，其为多发性硬化模型的Thl 介导的自身免疫疾病。此外，已显示中和抗大鼠IL-18抗血清阻止雌性Lewis大鼠中EAE 的发展。因此，IL-18是用于开发用于自身免疫的新治疗的所需靶。IL-18是具有炎症增强和减弱功能的多效性白细胞介素。一方面，它增强促炎细胞因子如TNF-α的生产，从而促进炎症。另一方面，它诱导胱天蛋白酶-1抑制剂一一 NO的生产，从而阻断IL-I β和IL-18的成熟，并且可能减弱炎症。IL-18的这种不确定的 (ambiguous)作用提出了关于IL-18抑制剂在治疗炎性疾病中的功效的疑问。此外，由于广泛多样的不同细胞因子和趋化因子在炎症调节中的相互作用，不能预期通过阻断此种复杂情况中的仅一种参与物(player)将获得有利作用。尽管前述，但中和IL-18抗体仍被视为在减轻自身免疫疾病和相关症状中是有用的。因此，本领域需要高亲和力IL-18抗体，例如针对人白细胞介素18的中和单克隆抗体。 此外，重要的是包括针对IL-18的抗体的治疗方案具有高纯度。本专利技术解决了这个需要，而无需使用A蛋白柱或等价的基于A蛋白的纯化步骤。专利技术概述在特定实施方案中，本专利技术涉及与IL-18结合的纯化、分离的抗体和抗体片段，以及包括此种抗体和片段的药物组合物。在特定实施方案中，本专利技术涉及与人IL-18结合的分离的抗体或其抗原结合部分。本专利技术的分离的抗IL-18抗体可以用于临床情况以及研究和开发中。在特定实施方案中，本专利技术涉及包括SEQ ID NOs. 1和2中鉴定的重和轻链序列的抗IL-18抗体。本专利技术的特定实施方案涉及从样品基质中纯化抗IL-18抗体或其抗原结合部分， 以使其基本上不含宿主细胞蛋白质(“HCPs”)的方法。在特定方面，样品基质(或简单地“样品”)包括用于产生本专利技术的抗IL-18抗体的细胞系。在具体方面，样品包括用于产生人抗 IL-18抗体的细胞系。在本专利技术的特定实施方案中，对包括推定的抗IL-18抗体或其抗原结合部分的样品基质实施PH调整。在特定方面，将pH调整至约3. 5。低pH尤其促进可能污染样品的pH 敏感病毒的减少和/或灭活。在合适的时间段后，将PH调整至约5. 0，并且对样品实施离子交换层析，以产生洗脱物。在特定方面，收集离子交换洗脱物，并且进一步实施疏水作用层析，以产生洗脱物。随后可以收集疏水作用层析洗脱物用于进一步加工或使用。在特定实施方案中，本专利技术提供了纯化IL-18抗体的方法，其包括初步回收步骤，以尤其去除细胞和细胞碎片。在上述方法的特定实施方案中，初步回收步骤包括一个或多个离心或深层过滤(cbpth filtration)步骤。例如并且非限制性地，此种离心步骤可以以约7000 χ g至约11，000 χ g执行。此外，上述方法的特定实施方案将包括深层过滤步骤， 例如去脂(delipid)深层过滤步骤。在上述方法的特定实施方案中，离子交换步骤可以是阳离子或阴离子交换层析或两者的组合。这个步骤可以包括多个离子交换步骤，例如阳离子交换步骤随后为阴离子交换步本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种用于从包括抗体和至少一种宿主细胞蛋白质（ＨＣＰ）的样品混合物中产生宿主细胞蛋白质减少的ＩＬ－１８抗体制剂的方法，所述方法包括：（ａ）对所述样品基质实施ｐＨ的减少，从而形成初步回收样品，其中所述ｐＨ的减少是约３．０　–　约４．０；（ｂ）将所述初步回收样品调整至约４．５　–　约５．５的ｐＨ，随后将所述初步回收样品应用于离子交换树脂，且收集离子交换样品；（ｃ）将所述离子交换样品应用于疏水作用层析（ＨＩＣ）树脂且收集ＨＩＣ样品，其中所述ＨＩＣ样品包括所述ＨＣＰ减少的抗体制剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：RK希克曼，
申请(专利权)人：雅培制药有限公司，
类型：发明
国别省市：US