一种具有抑制血管生成活性的多肽制造技术

本发明专利技术涉及一种具有抑制血管生成活性的多肽。具体地，本发明专利技术涉及源自肝细胞生长因子(HGF)的具有抑制新生血管作用的多肽。本发明专利技术还涉及所述多肽的制法和应用以及含所述多肽的药物组合物。本发明专利技术多肽具有多种优点，例如分子量小，可透过各种眼组织屏障；水溶性好，能在中性泪液、房水和玻璃体液中保持较高的浓度等。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医药领域，更具体地，涉及新的具有抑制新生血管作用的多肽 (H-KI系列多肽)。该多肽可抑制体外血管内皮细胞增殖、迁移、管腔形成和可抑制体内鸡胚尿囊膜和小鼠视网膜新生血管。本专利技术还涉及所述多肽的制法和应用以及含所述多肽的药物组合物。
技术介绍
血管新生是指在原有毛细血管网的基础上，通过血管内皮细胞增殖、迁移进而形成新生血管的过程。血管新生在体内胚胎发育、损伤修复等生理过程中发挥重要作用，同时也是众多新生血管性疾病，如肿瘤生长与转移、增殖性糖尿病视网膜病变、早产儿视网膜病变、类风湿关节炎等疾病的主要病理变化。因此新生血管抑制剂的研究与应用对于一些难治性新生血管相关疾病具有重要意义。眼部新生血管与多种眼病都有密切的关系，它常常导致严重的视力损害并最终致盲，例如糖尿病视网膜病变(DR)，年龄相关性黄斑变性(AMD)，角膜新生血管，新生血管性青光眼等。目前临床上的治疗手段主要包括手术、激光和药物。手术需要一定的指征，患者痛苦大，且风险和并发症相对较高；激光治疗亦存在一定的痛苦，可造成局部视野缺损、诱发新生血管，中长期疗效也不甚理想。因此，一种无痛苦、便捷、有效、患者依从性高的药物治疗眼部新生血管的方法成为了近十余年来国内外研究的热点。血管内皮生长因子(VEGF)是相当重要的血管生长刺激因子，目前临床中已经得到应用或者仍在实验研究中的药物主要是一些针对VEGF或者其受体(VEGFR)的抗新生血管制剂。包括抑制VEGF表达的VEGF反义寡核苷酸；抑制VEGF受体表达的VEGF受体反义寡核苷酸；中和血循环中VEGF的抗VEGF抗体、可溶性VEGF受体、VEGF !"rap、抗VEGFR抗体、酪氨酸激酶抑制剂等，这些制剂在肿瘤治疗中应用广泛。在开发有效的血管新生抑制剂时，应充分考虑到眼科用药的特殊性。第一，眼部存在多个解剖性和功能性的屏障。全身给药常常由于血-房水屏障和血-视网膜屏障而无法在眼组织局部达到足够的药物浓度；局部给药，如玻璃体腔注射，大于76. 5kDa的大分子在理论上很难穿透视网膜作用于视网膜和脉络膜新生血管。对于眼表给药，药物必须要先后穿透亲脂性的角膜上皮细胞紧密连接和亲水性的角膜基质，因此只有具备适当脂溶性、低分子量或能与眼表组织内的转运体(如氨基酸转运体、寡肽转运体等)结合的药物才能到达前房发挥作用。第二，药物在亲水的泪液、房水、玻璃体液中溶解的程度与其有效性呈正相关。第三，基于上述主要原因，眼科用药的生物利用度很低；要使之提高，可加大给药的浓度。用于治疗肿瘤新生血管的化合物毒副作用较为明显，全身和局部均无法高剂量给药。第四，目前虽然已经有一系列相对安全的内源性血管新生抑制剂被先后证实，如血管抑素(angiostatin)可明显抑制血管依赖性肿瘤的生长，但由于其分子量较大且空间构象复杂，故在制备过程中存在重组表达纯化工艺繁琐和内毒素残留等不足。正是由于上述种种条件的限制，目前用于治疗眼部新生血管的药物十分有限，比如重组抗人VEGF单克隆抗体Bevacizumab (Avastin,最初用以治疗转移性结肠直肠肿瘤)、 重组抗人VEGF单克隆抗体片段Ranibizumab (Lucentis，)等。虽然这几种药物抑制眼部新生血管的作用已经得到肯定，但它们价格高昂，已报道有多种眼部或全身不良反应，且穿透血眼屏障能力低，给药方式受到限制。多肽类新生血管抑制剂与目前研究广泛的蛋白类新生血管抑制剂相比具有合成方法简单、容易进行化学修饰、免疫原性低、溶解性好、生物利用率高、组织穿透性强、给药途径多样、价格低廉等突出优势。然而，目前尚没有来自肝细胞生长因子(HGF)的、效果令人满意的小分子多肽。因此，本领域迫切需要开发一种适于眼球组织的有效安全的小分子新生血管抑制剂。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一类适于眼球组织的有效安全的可抑制血管新生的小分子多肽以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一目的是提供含所述多肽的制法和应用。在本专利技术的第一方面，提供了一种下式I表示的多肽，或其药学上可接受的盐-------------------[Xaal9]-- (I)式中，XaaO是无，或1-3个氨基酸构成肽段；Xaal是选自下组的氨基酸lie, Leu, Val, Met 或 Ala ；Xaa2是选自下组的氨基酸lie, Leu, Val, Met 或 Ala ；Xaa3是选自下组的氨基酸Gly 或 Ala ；Xaa4是选自下组的氨基酸Lys 或 Arg ；Xaa5是选自下组的氨基酸Gly 或 Ala ；Xaa6是选自下组的氨基酸Arg, Lys 或 Gly ；Xaa7是选自下组的氨基酸Ser 或 Thr ；XaaS是选自下组的氨基酸Tyr 或 Phe ；Xaa9是选自下组的氨基酸Lys 或 Arg ；XaalO是选自下组的氨基酸:Gly 或 Ala ；Xaall是选自下组的氨基酸:Thr 或 Ser ；Xaal2是选自下组的氨基酸:Val, Leu, lie, Met 或 AlaXaal3是选自下组的氨基酸:Ser 或 Thr ；Xaal4是选自下组的氨基酸:Ile, Leu, Val, Met 或 AlaXaal5是选自下组的氨基酸:Thr 或 Ser ；Xaal6是选自下组的氨基酸:Lys 或 Arg ；Xaa 17是选自下组的氨基酸Ser或Thr ；XaalS是选自下组的氨基酸Gly或Ala;Xaal9 是选自下组的氨基酸Ile，Leu，Val，Met 或 Ala ；Xaa20是选自下组的氨基酸Lys或Arg ；Xaa21是无，或1-3个氨基酸构成肽段；并且所述的多肽具有抑制血管新生的活性，且所述多肽的长度为2046个氨基酸。在另一优选例中，所述多肽的长度为20-23个氨基酸。在另一优选例中，XaaO和/或Xaa21是1_3个氨基酸构成的肽段。更佳地，XaaO 为 C、NC、或 RNC ；禾口 / 或 Xaa21 为 C、CQ 或 CQP。在另一优选例中，Xaal是选自下组的氨基酸Ile或Leu ；)(aa2是选自下组的氨基酸Ile或Leu ；Xaa3是选自下组的氨基酸Gly或Ala ；Xaa4是选自下组的氨基酸Lys或Arg ；Xaa5是选自下组的氨基酸Gly或Ala ；Xaa6是选自下组的氨基酸Arg或Lys ；Xaa7是选自下组的氨基酸Ser或Thr ；Xaa8是选自下组的氨基酸Tyr或Phe ；Xaa9是选自下组的氨基酸Lys或Arg ；XaalO是选自下组的氨基酸Gly或Ala;Xaall是选自下组的氨基酸Thr或kr ；Xaa 12是选自下组的氨基酸Val或Leu ；Xaa 13是选自下组的氨基酸Ser或Thr ；Xaal4是选自下组的氨基酸Ile或Leu ；Xaa 15是选自下组的氨基酸Thr或kr ；Xaa 16是选自下组的氨基酸Lys或Arg ；Xaa 17是选自下组的氨基酸Ser或Thr ；Xaal8是选自下组的氨基酸Gly或Ala;Xaal9是选自下组的氨基酸Ile或Leu ；和/或Xaa20是选自下组的氨基酸Lys或Arg。在另一优选例中，Xaa6为Gly。在另一优选例中，所述多肽选自下组(a)具有SEQ ID NO 1所示氨基酸序列的多肽；(b)将SEQID NO 本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种下式Ｉ表示的多肽，或其药学上可接受的盐［Ｘａａ０］－［Ｘａａ１］－［Ｘａａ２］－［Ｘａａ３］－［Ｘａａ４］－［Ｘａａ５］－［Ｘａａ６］－［Ｘａａ７］－［Ｘａａ８］－［Ｘａａ９］－［Ｘａａ１０］－［Ｘａａ１１］－［Ｘａａ１２］－［Ｘａａ１３］－［Ｘａａ１４］－［Ｘａａ１５］－［Ｘａａ１６］－［Ｘａａ１７］－［Ｘａａ１８］－［Ｘａａ１９］－［Ｘａａ２０］－［Ｘａａ２１］　　　　（Ｉ）式中，Ｘａａ０是无，或１－３个氨基酸构成肽段；Ｘａａ１是选自下组的氨基酸：Ｉｌｅ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，Ｍｅｔ或Ａｌａ；Ｘａａ２是选自下组的氨基酸：Ｉｌ　ｅ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，Ｍｅｔ或Ａｌａ；Ｘａａ３是选自下组的氨基酸：Ｇｌｙ或Ａｌａ；Ｘａａ４是选自下组的氨基酸：Ｌｙｓ或Ａｒｇ；Ｘａａ５是选自下组的氨基酸：Ｇｌｙ或Ａｌａ；Ｘａａ６是选自下组的氨基酸：Ａｒｇ，Ｌｙｓ或Ｇｌｙ；Ｘａａ７是选自下组的氨基酸：Ｓｅｒ或Ｔｈｒ；Ｘａａ８是选自下组的氨基酸：Ｔｙｒ或Ｐｈｅ；Ｘａａ９是选自下组的氨基酸：Ｌｙｓ或Ａｒｇ；Ｘａａ１０是选自下组的氨基酸：Ｇｌｙ或Ａｌａ；Ｘａａ１１是选自下组的氨基酸：Ｔｈｒ或Ｓｅｒ；Ｘａａ１２是选自下组的氨基酸：Ｖａｌ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｍｅｔ或Ａｌａ；Ｘａａ１３是选自下组的氨基酸：Ｓｅｒ或Ｔｈｒ；Ｘａａ１４是选自下组的氨基酸：Ｉｌｅ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，Ｍｅｔ或Ａｌａ；Ｘａａ１５是选自下组的氨基酸：Ｔｈｒ或Ｓｅｒ；Ｘａａ１６是选自下组的氨基酸：Ｌｙｓ或Ａｒｇ；Ｘａａ１７是选自下组的氨基酸：Ｓｅｒ或Ｔｈｒ；Ｘａａ１８是选自下组的氨基酸：Ｇｌｙ或Ａｌａ；Ｘａａ１９是选自下组的氨基酸：Ｉｌｅ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，Ｍｅｔ或Ａｌａ；Ｘａａ２０是选自下组的氨基酸：Ｌｙｓ或Ａｒｇ；Ｘａａ２１是无，或１－３个氨基酸构成肽段；并且所述的多肽具有抑制血管新生的活性，且所述多肽的长度为２０－２６个氨基酸。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：许迅，徐艺，赵卉，
申请(专利权)人：上海市第一人民医院，
类型：发明
国别省市：31