本发明专利技术公开了一种抗人PlGF蛋白的单克隆抗体，该单克隆抗体可特异结合人胎盘生长因子(placental?growth?factor，PlGF)并阻断PlGF与其受体的结合。本发明专利技术还公开了该单克隆抗体的制备方法。本发明专利技术另公开了该单克隆抗体在定性及定量检测人PlGF蛋白中的应用。本发明专利技术还公开了该单克隆抗体在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物技术-单克隆抗体领域。本专利技术涉及一种抗人PlGF蛋白的单克隆抗体；此外，本专利技术还涉及该单克隆抗体的制备方法及其用途
技术介绍
血管新生或增生(angiogenesis)在生物学上是指体内的已存在的血管(如毛细血管和小静脉)通过出芽或分裂的方式而产生新的血管的过程。血管新生在维持机体的许多正常的生理过程如组织胚胎发育、外伤伤口的癒合与修复等是有益的和必需的。但过度的血管新生或增生也与许多病理变化(如肿瘤的增生扩散，炎症)息息相关。体内血管能够新生或增生的关键是在于其内衬的血管内皮细胞具有分裂增生及定向迁移置入已有的血管管壁的能力。在各类刺激血管内皮细胞增生的因子中，以血管内皮细胞生长因子(vascular endothelialgrowth factor, VEGF)尤为重要。事实上，VEGF 是目前已知的最强烈的刺激血管内皮细胞分裂增生的因子。VEGF在刺激血管增生中的重要性也已在VEGF基因剔除小鼠的研究中被证实如只要当VEGF基因中的一份被敲除后，胚胎中的血管即无法正常形成进而导致胚胎在发育至11至12天时即死亡(Carmeliet P等 Nature 1996,380435 ；Ferrara N φ Nature 1996,380:439)。VEGF 一般常由血管内皮细胞、巨噬细胞和肿瘤细胞所合成，并通过自分泌/旁分泌方式特异地作用于血管内皮细胞上的受体，而发挥促进血管内皮细胞生长、增殖、迁移、形成等作用。研究表明，在多数恶性肿瘤患者的癌组织中也能够检测到VEGF，且VEGF 的表达水平增高与肿瘤恶性程度和疾病进展有关(Dvorak HF等J Exp Med 1991 ；174 1275-8 ;BrownLF 等 Cancer Res 1993 ；53 4727-35 ；Weidner N, Semple JP, Welch WR 及 Folkman J =N Engl J Med 1991 ；324 1-8. 4-5)；此外，VEGF在炎症病理的血管中起着重要的作用，如在关节炎病人的关节滑液及组织中(rheumatoid synovial fluids and tissue) 以及牛皮藓(psoriasis)病人组织中VEGF水平增高。阻断体内VEGF，从而阻止由VEGF及其受体介导的促血管增生，可达到抑制肿瘤生长与转移，或抗炎症的效果。在抑制VEGF及其受体介导的血管增生药物研发领域，目前主要存在两大手段即1)寻找可直接抑制VEGF受体中内在的酪氨酸蛋白激酶活性的物质，该类研发的药物主要是各种小分子物抑制剂如PTK787/ZK 222584 (WoodJM等Cancer Res 2000,60 2178)；2)通过抑制VEGF与其受体的结合，从而达到阻止VEGF及其受体在介导促血管内皮细胞分裂增生的作用和抑制血管增生的作用，该类研发的药物包括各种抗VEGF或抗 VEGF受体的抗体，反义寡核苷酸及小分子抑制剂等(Kim KJ等Nature 1993,362:841; Presta LG等Cancer Res, 1997, 57 4593 ；Posey J A等Clinical Cancer Research, 2003, 9 1323)。其中由美国Genentech公司研发、生产并于2004年获美国FDA批准上市销售的BevacizumaM商品名Avastin)就是一种可识别与结合VEGF的人源化的单克隆抗体。 Avastin通过中和或清除体内VEGF而达到抑制肿瘤血管生长，进而遏制肿瘤的生长和转移的作用(Presta LG 等 Cancer Res, 1997,57 4593 ；Hurwitz H等 N Engl J Med, 2004 ；350 2335)。人源化抗体Avastin的前身可追溯到代号为A4. 6. 1的小鼠单克隆抗体。该 A4. 6. 1小鼠单克隆抗体的来源及分泌它的杂交瘤细胞系与用途在专利号为6，582，959的美国专利(专利技术人Kim，Kyung Jin，专利公开日期June 24，2003，Antibodies to vascular endothelialcell growth factor)；及专利号为 7，227，004 的美国专利(专利技术人:Kim, Kyung Jin 专利公开日期 June 5，2007，=Antibodies tovascular endothelial cell growth factor)中都有所描述。但该抗体还存在如下不足(1)与大多数的单克隆抗体一样，A4. 6. 1小鼠单克隆抗体及其人源化抗体Avastin也只是能结合VEGF 抗原的部分位点，无法认识或含盖VEGF上众多的他抗原位点。(2)进一步的动物实验及临床研究发现仅单独注射A4. 6. 1小鼠单克隆抗体或其人源化抗体Avastin，无法达到完全中和抑制体内VEGF及其介导的促血管新生。近期的一项动物实验报道对某些抗-VEGF抗体治疗不敏感的肿瘤(即 VEGF-resistant肿瘤)，通过给予注射小鼠抗小鼠胎盘生长因子(placental growth factor, P1GF)的抗体，也可达到抑制肿瘤血管增生及抑制肿瘤生长与转移的效果(见 Fischer C 等Cell 2007,131:463-475)。PlGF与VEGF两者同源，结构与生物活性相近，且都可与VEGFRl受体结合。但以往的研究更为关注的是VEGF，而对于P1GF，尽管其编码基因早在1991年就已克隆出 (Maglione D et a 1. PNAS 1991，88 :9267_9271)，但其在血管增生中的意义长时期以来一直是处于从属或未定状态。近年来随着研究的深入，越来越多的结果证明PlGF实际上参与许多生理或病理条件下的血管增生。支持该结论的证据至少包括以下几点1)P1GF除了在胎盘中高水平表达之外，体内其他组织器官(如肺脏等)及细胞中也检测到PlGF基因的表达；2)P1GF基因剔除的小鼠其在外伤或移植肿瘤后所诱发的血管新生比其在正常小鼠中明显降低(Carmeliet P et al，Nature Medicine2001，7 :575_583)；3)血液或尿液中PlGF及其可溶性FLT-I受体(即VEGFR-1)蛋白的水平与高危妊娠妇女中的先兆子癫的发生与发展密切相关；4)如前所述，动物实验已证明在注射鼠抗-鼠PlGF的抗体后，小鼠中的肿瘤血管增生与肿瘤生长可得到一定的控制(Fischer C等Cell2007，131 :463_475)。而在此基础上，如进一步研发出一种可结合并中和抑制人PlGF蛋白的单克隆抗体，则该单克隆抗体可作为血管增生抑制药物的单独成分，或与其他血管增生抑制药物如抗人VEGF的抗体Avastin组合使用，达到更彻底的抑制PlGF及VEGF介导的促血管增生的目的。该类单克隆抗体在血管增生的基础研究及在临床上都将具有显著意义与广泛应用价值。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题之一是提供一种抗人PlGF蛋白的单克隆抗体，该单克隆抗体可特异结合人PlGF蛋白，并阻断PlGF与其受体VEGFRl的结合。本专利技术要解决的技术问题之二是提供上述单克隆抗体本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种抗人ＰｌＧＦ蛋白的单克隆抗体，其特征在于，该单克隆抗体可特异结合人胎盘生长因子ＰｌＧＦ并阻断ＰｌＧＦ与其受体的结合。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：周群敏，胡红群，罗师平，孙亚男，周青，蔡明文，徐一清，
申请(专利权)人：苏州思坦维生物技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：32
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