拮抗抑制人PD-1抗原与其配体结合的单克隆抗体及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种拮抗抑制人PD‑1抗原与其配体结合的单克隆抗体或其衍生体，其包含抗体轻链可变区的抗原互补决定区CDR1，CDR2和CDR3分别为SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：4及SEQ ID NO：5的氨基酸序列；抗体重链可变区的抗原互补决定区CDR1，CDR2和CDR3分别为SEQ ID NO：8，SEQ ID NO：9及SEQ ID NO：10的氨基酸序列。本发明专利技术还公开了该抗体的人源化制备过程及该人源化抗体重链可变区与轻链可变区氨基酸序列。该抗体或其衍生体可作为药物组合物成分或制备成合适药物制剂，单独给药或与化疗药物等其他治疗手段合并使用，用于治疗如结肠癌等实体瘤。

Antagonistic inhibition of human PD ligand binding 1 antigen monoclonal antibody and preparation method and application thereof

The invention discloses a monoclonal antibody against human PD antigen 1 antagonist ligand binding or its derivative, determining region CDR1 which contains the antibody light chain variable region antigen complementary, CDR2 and CDR3 were SEQ ID NO:3, ID amino acid sequence of SEQ NO:4 and SEQ ID NO:5; antibody heavy chain variable region antigen complementary determining region CDR1, CDR2 and CDR3 were SEQ ID NO:8, ID amino acid sequence of SEQ NO:9 and SEQ ID NO:10. The invention also discloses the humanized preparation process of the antibody and the humanized antibody heavy chain variable area and light chain variable region amino acid sequence. The antibody or derivative thereof may be used as a pharmaceutical composition, or as a suitable pharmaceutical preparation, for administration alone, or in combination with other therapeutic agents such as chemotherapeutic drugs, for the treatment of solid tumors such as colon cancer.

【技术实现步骤摘要】
拮抗抑制人PD-1抗原与其配体结合的单克隆抗体及其制备方法与应用
本专利技术属于生物技术-单克隆抗体领域。本专利技术涉及一种拮抗抑制程序性死亡受体PD-1(programmeddeath-1)与其配体结合的单克隆抗体及其编码序列与其制备方法和用途。
技术介绍
长期以来，生物医学界一直认为肿瘤的发生发展与机体内的免疫功能状态息息相关。体内免疫系统在正常状态下发挥着监控(Immunesurveillance)变异的肿瘤细胞增长及抑制肿瘤转移复发的功能。免疫系统如出现功能抑制或低下时，肿瘤增长或转移复发则会加快，严重时更危及生命。因此以通过调动机体自身免疫功能来直接攻击或杀灭肿瘤为目的的“肿瘤免疫疗法(TumorImmunotherapy)”是肿瘤临床治疗领域追求的一大目标。自2011年以来，免疫疗法在肿瘤临床治疗领域取得了一系列具革命性变化(revolutionizingcancertreatment)的重大突破(见综述：TopalianSL等:Cancerimmunotherapycomesofage.JCO2011；29:4828-4836；PardollD和DrakeC：Immunotherapyearnsitsspotintheranksofcancertherapy.JExpMed2012；209：201-209；PageDB,PostowMA,CallahanMK,AllisonJPandWolchokJD：Immunemodulationincancerwithantibodies.AnnuRevMed2014；65:185–202)。这些革命性突破则主要得益于免疫学基础研究领域的进展及以杂交瘤/基因工程抗体等为代表的现代生物技术的出现与发展。免疫学基础研究表明由胸腺发育而来的T淋巴细胞介导的细胞免疫在识别监控及/或直接攻击消灭肿瘤细胞的过程中起着非常致为关键的作用。T淋巴细胞在功能上大致可分为两大类：即以调控免疫功能为主的辅助T细胞(Thelpercells)和直接参与识别靶抗原与攻击杀伤靶细胞的细胞毒性T细胞(cytotoxicTcells，CTL)。辅助T细胞或细胞毒性T细胞(CTL)的活化、增生及其在清除靶抗原与攻击杀伤靶细胞等免疫功效阶段一般都需要两个信号通路的协同作用：协同信号通路1是通过T细胞上的特异识别不同抗原的受体蛋白(T-cellreceptor，TcR)与表达在肿瘤靶细胞或抗原提呈细胞(antigen-presentingcells,APC)上相应的特异抗原多肽(antigenpeptide)-MHC(majorhistocompatibility)的结合而传导，该信号通路为抗原特异性的；协同信号通路2则是通过T细胞上的协同刺激因子(co-stimulatorymolecules)或协同抑制因子(co-inhibitorymolecules)与其相应表达在靶细胞或抗原提呈细胞(Antigenpresentingcells，APC)上的配体结合而传导，该信号通路为抗原非特异性的。T淋巴细胞一般只有在协同信号通路1与协同信号通路2都同时存在的状态下才发生活化增生与清除靶抗原及杀灭靶细胞的作用。正向上调免疫功能的协同刺激因子主要包括CD28与其配体B7-1(CD80)、B7-2(CD86)；CD40与其配体CD40L；CD137(又称为4-1BB)与其配体CD137-L；CD278(ICOS，InducibleT-cellcostimulator)与其配体ICOS-L等。负向下调免疫功能的协同抑制因子(又称为免疫抑制检查点，inhibitoryimmunecheckpointmolecules)则主要包括CTLA-4(CytotoxicT-lymphocyteAntigen-4)与其配体B7-1(CD80)、B7-2(CD86)；程序性死亡受体PD-1(programmeddeath-1)与其配体PD-L1和PD-L2；LAG-3(Lymphocyteactivationgene-3)与其配体；TIM-3(T-cellImmunoglobulindomainandMucindomain3)与其配体；BTLA(BandTLymphocyteAttenuator)与其配体等。这些协同刺激/协同抑制因子在分子结构上都很相似，均属于免疫球蛋白超家族成员(见综述：ChenLP：Co-inhibitorymoleculesoftheB7-CD28familyinthecontrolofTcellimmunity。NatureImmunol2004,336-347)。理论上，至少可以通过两大不同途径达到上调或提高体内免疫功能的目的：途径1是通过激活CD28等协同刺激因子而直接达到上调免疫功能的效果；途径2则是通过降低或阻断CTLA-4，PD-1/PD-L1，TIM-3，LAG-3或BTLA等因子介导的免疫抑制，从而间接达到上调免疫功能的效果。通过激活CD28等协同刺激因子尽管可以达到直接上调免疫功能的效果，但由于2006年在英国进行的一代号为TGN1412的抗CD28单克隆抗体药物的临床I期研究中，6位健康受试者在接受注射该抗体药物的当天即发生了极其严重的不良反应(SuntharalingamG等，NEnglJMed2006；355：1018-1028)，因此目前医学界普遍认为激动型抗CD28抗体类药物在临床应用上具有很高的安全风险，其未来开发上市的前景存在很多担忧与不确定性。相反的，目前以去除或降低CTLA-4，或PD-1/PD-L1等因子介导的的免疫抑制作用的拮抗型单克隆抗体药物，由于其在国际上开展的多个临床研究中都表现出非常明显的抗肿瘤疗效及可接受的安全性，现反而已成为国际肿瘤药物研究与开发领域的最成功热点；其中靶向PD-1/PD-L1的单抗药物开发尤其引入注目(QuezadaSAandPeggsKS：BritishJournalofCancer2013；108：1560–1565；FlemmingA:NatRevDrugDiscov.2012，11:601)。PD-1基因最早是由日本科学家TasukuHonjo及其同事在1992年发现与克隆的，其胞外区有1个IgV样区，与CTLA-4有23％的同源性(Ishida,Y.,Agata,Y.,Shibahara,K.andHonjo,T.：EMBOJ.1992；11:3887)。PD-1主要表达于活化的T淋巴细胞、B淋巴细胞、单核细胞等免疫细胞上(YasutoshiAgata等，InternationlImmunology1996；8：675)。PD-1的受体或配体有两个：分别为PD-L1(FreemanGJ等，JEM2000；192:1027-1034)，或又称B7-H1(DongH等，NatureMedicine1999；5：1365-1369)和PD-L2(LatchmanY等，Nat.Immunol.2001；2：261-268),或又称B7-DC(TsengSY等，JEM2001；193：839-845)。PD-L1及PD-L2主要表达在肿瘤等靶细胞或抗原提呈细胞上(ThompsonRH等，CancerRes2006本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种拮抗抑制人PD‑1抗原与其配体结合的单克隆抗体或其衍生体，其特征在于，其包含第一可变区和第二可变区，其中所述第一可变区是抗体轻链可变区，其抗原互补决定区CDR1，CDR2和CDR3分别为SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：4及SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列；其中所述第二可变区是抗体重链可变区，其抗原互补决定区CDR1，CDR2和CDR3分别为SEQ ID NO：8，SEQ ID NO：9及SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种拮抗抑制人PD-1抗原与其配体结合的单克隆抗体或其衍生体，其特征在于，其包含第一可变区和第二可变区，其中所述第一可变区是抗体轻链可变区，其抗原互补决定区CDR1，CDR2和CDR3分别为SEQIDNO：3，SEQIDNO：4及SEQIDNO：5所示的氨基酸序列；其中所述第二可变区是抗体重链可变区，其抗原互补决定区CDR1，CDR2和CDR3分别为SEQIDNO：8，SEQIDNO：9及SEQIDNO：10所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的抗体或其衍生体，其特征在于，所述第一可变区是抗体轻链可变区，为SEQIDNO：11所示的氨基酸序列；其所述第二可变区是抗体重链可变区，为SEQIDNO：12所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1或2所述的抗体或其衍生体，其特征在于，其包含所述抗体轻链可变区和人抗体轻链恒定区，及包含所述抗体重链可变区和人抗体重链恒定区的铰链区，CH1区，CH2区和CH3区。4.根据权利要求3所述的抗体或其衍生体，其特征在于，所述人抗体轻链恒定区来自人抗体kappa链或抗体lamda链，所述人抗体重链恒定区来自人IgG1，IgG2，IgG3或IgG4亚型。5.一种编码权利要求2所述抗体或其衍生...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡红群，陈蕞，宋晓琦，罗师平，蔡明文，范金玲，徐一清，周群敏，
申请(专利权)人：苏州思坦维生物技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32