一种PD-L1抗体及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种PD‑L1抗体及其制备方法。所述PD‑L1抗体包括PD‑L1抗体的重链可变区重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3中的一种或多种，和PD‑L1抗体的轻链可变区轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3中的一种或多种。所述PD‑L1抗体是全人源的，对PD‑L1蛋白具有高亲和力，能有效阻止PD‑L1蛋白与PD‑1和B7.1结合，并且在人混合淋巴细胞或T淋巴细胞中显著增加IFN‑γ和IL‑2的表达量。

PD-L1 antibody and preparation method thereof

The invention discloses a PD L1 antibody and preparation method thereof. The PD L1 antibody heavy chain variable region of heavy chain CDR1, including PD L1 antibody heavy chain and one or more CDR2 heavy chain in CDR3, one or more L1 and PD antibody light chain variable region of light chain CDR1 and light chain CDR2 and light chain in CDR3. The PD L1 antibody is human, has a high affinity for the PD L1 protein, can effectively prevent the PD L1 and PD protein 1 and B7.1 binding, and in human mixed lymphocyte or T lymphocytes were significantly increased in the IFN and IL gamma expression 2.

【技术实现步骤摘要】
一种PD-L1抗体及其制备方法
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种PD-L1抗体及其制备方法。
技术介绍
PD-L1(B7H1)，是B7家族的成员之一，是一个阅读框含有290个氨基酸的I型跨膜蛋白，由免疫球蛋白V-like、C-like区域、疏水跨膜区及C端胞内区组成(DongH，ZhuG，TamadaK，ChenL.NatureMed.1999；5:1365–1369)，其基因位于人染色体的9p24位点。PD-L1的RNA转录分布广泛，在淋巴器官(如脾、骨髓、淋巴、胸腺)和非淋巴器官(如心脏、肌肉、胎盘、肺、肾脏、肝脏)中均被检测到。PD-L1在抗原递呈细胞，如巨噬细胞、树突状细胞表面呈组成型表达。并且，PD-L1在广泛的组织和细胞类型都能够表达，如在上皮细胞和内皮细胞中，可以被促炎症因子如IFN-γ等诱导表达。许多新鲜分离的肿瘤组织高表达PD-L1。PD-L1与恶性肿瘤的进程与预后相关。PD-L1的受体有二：一是PD-1，PD-1在活化的T细胞和B细胞上表达，也在活化的骨髓瘤细胞中表达。PD-1与PD-L1的结合可以抑制T细胞的增殖，激活下游抑制信号，从而使肿瘤细胞逃逸机体免疫系统的识别和攻击。体内实验表明，用可阻断PD-1与PD-L1结合的PD-1抗体或PD-L1抗体可使CTL细胞扩增，加速肿瘤缩小和病毒清除。PD-L1的另一受体是B7.1，B7.1在活化的T细胞有表达，作为PD-L1的抑制性受体，B7.1与PD-L1的结合可以激活下游抑制信号，抑制T细胞的增殖，体内表现为T细胞耐受的形成。最近研究表明，一些慢性病毒感染和癌症通过造成PD-1/PD-L1介导的T细胞耗竭来实现免疫逃逸。许多人源肿瘤细胞和肿瘤相关抗原呈递细胞高水平表达PD-L1，从而逃避抗肿瘤免疫反应(ShengYao，YuwenZhu，andLiepingChen，NatRevDrugDiscov.2013February；12(2):130–146)。慢性HIV感染过程中，HIV特异性CD8+T细胞功能受损，产生细胞因子和效应分子能力降低，增殖能力减弱。有研究表明，在HIV感染个体中，HIV特异性CD8+T细胞中PD-1高表达，提示阻断PD-1/PD-L1通路提供了治疗HIV感染和艾滋病患者的潜在治疗方法(BowersNL，HeltonES，HuijbregtsRPH，etal.PLoSPathog.2014March；10(3):e1003993)。总之，阻断PD-1/PD-L1通路的药物为多种癌症，HIV感染以及其他疾病和与T细胞耗竭相关的情况提供了新的治疗方法。因此，迫切需要可阻断PD-1/PD-L1通路的药物，如PD-L1抗体，尤其是人源化的PD-L1抗体，用于疾病治疗。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是为了克服目前缺少PD-L1抗体，尤其是人源化PD-L1抗体的不足，提供一种亲和力高、特异性强的PD-L1抗体及其制备方法。所述的PD-L1抗体与人源和猴源的PD-L1蛋白均具有高度亲和力，能够抑制PD-L1与其受体PD-1和B7.1的结合，能在人混合淋巴细胞或T淋巴细胞反应中显著增加IFN-γ和IL-2的表达水平，并且缺乏与人PD-L2等同类蛋白抗原的交叉反应。本专利技术先制备人源PD-L1作为免疫原，采用人源抗体转基因小鼠技术进行全人源抗体的制备[Lonberg,etal.1994，Nature368(6474)：856-859，Lonberg,N.andHuszar,D.1995，Intern.Rev.Immunol.13:65-93,andHarding,F.andLonberg,N.,1995，Ann.N.Y.Acad.Sci.764:536-546]，获得PD-L1抗体的先导抗体。再通过对先导抗体的初步生产、纯化和检定，获得具备抗体亲和力高(亲和力KD＜1*10-9M)、有效封闭PD-L1与受体PD-1和B7.1的结合、在人混合淋巴细胞或T淋巴细胞反应中显著增加IFN-γ和IL-2的表达水平、与人PD-L2等同类蛋白抗原缺乏交叉反应等优异生物性特性的PD-L1抗体。然后通过分子生物学方法测序获知PD-L1抗体的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列。本专利技术提供一种分离的蛋白质，其包括PD-L1抗体的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3中的一种或多种，和/或，PD-L1抗体的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3中的一种或多种，所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.2、SEQIDNo.10、SEQIDNo.18或SEQIDNo.26所示；所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.3、SEQIDNo.11、SEQIDNo.19或SEQIDNo.27所示；所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.4、SEQIDNo.12、SEQIDNo.20或SEQIDNo.28所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.6、SEQIDNo.14、SEQIDNo.22或SEQIDNo.30所示；所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.7、SEQIDNo.15、SEQIDNo.23或SEQIDNo.31所示；所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.8、SEQIDNo.16、SEQIDNo.24或SEQIDNo.32所示；或者，所述重链CDR1的氨基酸序列与如序列表中SEQIDNo.2、SEQIDNo.10、SEQIDNo.18或SEQIDNo.26所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述重链CDR2的氨基酸序列与如序列表中SEQIDNo.3、SEQIDNo.11、SEQIDNo.19或SEQIDNo.27所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述重链CDR3的氨基酸序列与如序列表中SEQIDNo.4、SEQIDNo.12、SEQIDNo.20或SEQIDNo.28所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列与如序列表中SEQIDNo.6、SEQIDNo.14、SEQIDNo.22或SEQIDNo.30所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR2的氨基酸序列与如序列表中SEQIDNo.7、SEQIDNo.15、SEQIDNo.23或SEQIDNo.31所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR3的氨基酸序列与如序列表中SEQIDNo.8、SEQIDNo.16、SEQIDNo.24或SEQIDNo.32所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示。较佳地，所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.2所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.3所示且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.4所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.10所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.11所示且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.12所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.18所示，所述重链C本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的蛋白质，其特征在于，其包括PD‑L1抗体的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3中的一种或多种，和/或，PD‑L1抗体的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3中的一种或多种，所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.2、SEQ ID No.10、SEQ ID No.18或SEQ ID No.26所示；所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.3、SEQ ID No.11、SEQ ID No.19或SEQ ID No.27所示；所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.4、SEQ ID No.12、SEQ ID No.20或SEQ ID No.28所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.6、SEQ ID No.14、SEQ ID No.22或SEQ ID No.30所示；所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.7、SEQ ID No.15、SEQ ID No.23或SEQ ID No.31所示；所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.8、SEQ ID No.16、SEQ ID No.24或SEQ ID No.32所示；或者，所述重链CDR1的氨基酸序列与如序列表中SEQ ID No.2、SEQ ID No.10、SEQ ID No.18或SEQ ID No.26所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述重链CDR2的氨基酸序列与如序列表中SEQ ID No.3、SEQ ID No.11、SEQ ID No.19或SEQ ID No.27所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述重链CDR3的氨基酸序列与如序列表中SEQ ID No.4、SEQ ID No.12、SEQ ID No.20或SEQ ID No.28所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列与如序列表中SEQ ID No.6、SEQ ID No.14、SEQ ID No.22或SEQ ID No.30所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR2的氨基酸序列与如序列表中SEQ ID No.7、SEQ ID No.15、SEQ ID No.23或SEQ ID No.31所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR3的氨基酸序列与如序列表中SEQ ID No.8、SEQ ID No.16、SEQ ID No.24或SEQ ID No.32所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示。...

【技术特征摘要】
1.一种分离的蛋白质，其特征在于，其包括PD-L1抗体的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3中的一种或多种，和/或，PD-L1抗体的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3中的一种或多种，所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.2、SEQIDNo.10、SEQIDNo.18或SEQIDNo.26所示；所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.3、SEQIDNo.11、SEQIDNo.19或SEQIDNo.27所示；所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.4、SEQIDNo.12、SEQIDNo.20或SEQIDNo.28所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.6、SEQIDNo.14、SEQIDNo.22或SEQIDNo.30所示；所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.7、SEQIDNo.15、SEQIDNo.23或SEQIDNo.31所示；所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表中SEQIDNo.8、SEQIDNo.16、SEQIDNo.24或SEQIDNo.32所示；或者，所述重链CDR1的氨基酸序列与如序列表中SEQIDNo.2、SEQIDNo.10、SEQIDNo.18或SEQIDNo.26所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述重链CDR2的氨基酸序列与如序列表中SEQIDNo.3、SEQIDNo.11、SEQIDNo.19或SEQIDNo.27所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述重链CDR3的氨基酸序列与如序列表中SEQIDNo.4、SEQIDNo.12、SEQIDNo.20或SEQIDNo.28所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列与如序列表中SEQIDNo.6、SEQIDNo.14、SEQIDNo.22或SEQIDNo.30所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR2的氨基酸序列与如序列表中SEQIDNo.7、SEQIDNo.15、SEQIDNo.23或SEQIDNo.31所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示；所述轻链CDR3的氨基酸序列与如序列表中SEQIDNo.8、SEQIDNo.16、SEQIDNo.24或SEQIDNo.32所示的氨基酸序列至少有80％的序列同源性的氨基酸序列所示。2.如权利要求1所述的蛋白质，其特征在于，所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.2所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.3所示且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.4所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.10所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.11所示且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.12所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.18所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.19所示且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.20所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.26所示，所述重链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.27所示且所述重链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.28所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.6所示，所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.7所示且所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.8所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.14所示，所述轻链CDR2的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.15所示且所述轻链CDR3的氨基酸序列如序列表SEQIDNo.16所示；所述轻链CDR1的氨基酸序列如序列表SEQIDNo....

【专利技术属性】
技术研发人员：杨欣秀，罗海山，帅正蓉，刘虎，胡少平，孙晓岚，顾红专，段清，刘礼乐，
申请(专利权)人：钜川生物医药，
类型：发明
国别省市：维尔京群岛,VG