本发明专利技术提供了一种免疫纳米粒子层析测定方法，该方法包括步骤：提供一层析柱，该层析柱设置有上段加样区、中段活性区以及下段排液区，所述中段活性区内填充有用于捕捉固定待测物质的免疫吸附剂；将待测样品从加样区加入所述层析柱，并流经所述活性区；然后将悬浮有纳米粒子的溶液从所述加样区加入层析柱，并流经所述活性区，其中所述纳米粒子披覆有能与所述待测物质相结合的物质。本发明专利技术还提供了用于实施所述方法的装置，该装置包括至少一所述的层析柱。应用本发明专利技术的技术操作便捷，灵敏度高，且可一次测定多项指标。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术是关于一种免疫分析方法及实施该方法的装置，具体是关于一种应用不用化学方法标记的纳米技术和免疫层析技术相结合的免疫纳米粒子层析测定方法，以及实施该方法的层析柱。
技术介绍
现在用于超微量的免疫分析方法有放射免疫分析、酶联免疫分析、荧光免疫分析、 时间分辨荧光免疫分析、化学发光免疫分析等，这些分析方法均需要将抗体或抗原通过化学方法标记上相应的产生特殊信号的物质(例如碘-125、辣根过氧化物酶、荧光素、稀土元素、化学发光物等)。该操作比较麻烦。而且，所述标记物在免疫分析过程中，既是免疫试剂而直接参与免疫反应，又携带产生特殊信号的物质，是超微量免疫测定中的关键物质，其质量一旦受到影响，就会给试剂盒的质量带来十分不利的效果，甚至导致失败，而在化学法标记过程中，通常要经过氧化、还原等化学反应的作用，有的还要受到辐射损伤(放射性同位素标记)，这些过程会对抗体或抗原的免疫特性造成一定程度的损害，这必然会降低了检测试剂盒的质量。近年来发展起来的斑点免疫金渗滤测定法(金标免疫渗滤法，DotImmunogold Filtration Assay, DIGFA)虽然简化了操作方法，缩短了反应时间，操作快速简便，但由于 “斑点”量微的局限性，其检测灵敏度仍未达到理想水平。而且，上述的免疫分析方法一次实验均只能检测一个项目或指标。
技术实现思路
本专利技术的一个目的在于针对现有免疫分析方法所存在的不足，研究提供一种新的免疫分析方法，以在简化操作步骤的同时提高检测灵敏度。本专利技术的另一目的在于提供一种操作快速简便且检测灵敏度高的免疫分析方法， 并实现通过一次实验检测多项指标。本专利技术的另一目的在于提供一种实施所述的免疫分析方法的装置。首先，本专利技术提供了一种免疫分析方法，其是一种将纳米技术和免疫层析技术相结合的超敏免疫分析方法，可称为免疫纳米粒子层析测定(Immunonanoparticles chromatographic assay, INCA)方法。根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术提供的免疫纳米粒子层析测定方法包括步骤提供一层析柱；该层析柱设置有上段加样区、中段活性区以及下段排液区，所述中段活性区内填充有用于捕捉固定待测物质的免疫吸附剂；将待测样品从加样区加入所述层析柱，并流经所述活性区；然后将悬浮有纳米粒子的溶液从所述加样区加入层析柱，并流经所述活性区；其中所述纳米粒子披覆有能与所述待测物质相结合的物质。3另一方面，本专利技术还提供了一种用于实施所述方法的装置，该装置包括至少一个层析柱，该层析柱设置有上段加样区、中段活性区以及下段排液区，所述中段活性区内填充有用于捕捉固定待测物质的免疫吸附剂。本专利技术的免疫纳米粒子层析测定方法，是结合运用了纳米技术和免疫层析技术， 该方法检测灵敏度高。本专利技术中，层析柱设计的结构特点是具有巨大的免疫浓缩 (immunoconcentration)效应。根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的免疫纳米粒子层析测定方法中，所述层析柱上段加样区到中段活性区通过缩径结构连接，所述中段活性区到下段排液区通过缩径结构连接，所述层析柱上段加样区内径6 10mm、高8 14mm，中段内径2 4mm、高6 10mm，下段内径1 2mm、高2 4mm，上段加样区过度到中段活性区的缩径结构部分高3 5mm，中段活性区过度到下段排液区的缩径结构部分高2 4mm ；中段细而长的填充有足够量的特定免疫吸附剂的活性区，可以有效地将待测样品中相应的抗体或抗原捕获、浓缩、集聚，而进行测定；下段主要是用于排出剩余物(废液)，孔径细小有控制流速的作用。根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术中，所述层析柱中段的上下两端还可莰有与层析柱中段的上下两端端口内径大小一致的多孔圆片，用以固定活性区的免疫吸附剂，可以理解该多孔圆片在保证具有足够支撑强度的同时其厚度应越薄越好，最好不超过1. 5mm, 优选在Imm以下；另外，在层析柱上、下端均可设置有弹性胶质封口帽，便于密封和抽真空， 利于保存。根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术中，所述层析柱的活性区结构可有多种形式，只要具有浓缩、集聚效果并有足够容量即可，浓缩、集聚作用是把极稀的被测物集中在一起，足够容量是保障所捕获的被测物的量能被检测出来，例如可把活性区做成无封闭孔的多孔圆柱体、方形柱体、一定厚度的圆片或方片、圆球、椭圆体等或填充无封闭孔的多孔 (塑料)海绵、微球、烧结的玻璃砂、纤维素(微晶、薄膜等)、葡聚糖、琼脂糖……等等，凡可用于物理或化学方法制备免疫吸附剂的材料均可用于加工层析柱的活性区。根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的免疫纳米粒子层析测定方法中，所述纳米粒子可以为发光纳米粒子，也可以是有色纳米粒子。根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的免疫纳米粒子层析测定方法还包括在将悬浮有纳米粒子的溶液从所述加样区加入层析柱并流经所述活性区后，根据层析柱活性区内颜色变化或荧光变化对样品中待测物质进行定性或定量分析。根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的免疫纳米粒子层析测定方法还包括增加流经所述活性区的待测样品量，根据层析柱活性区内颜色变化或荧光变化对样品中待测物质进行定性或定量分析。利用本专利技术的包含层析柱的装置进行免疫纳米粒子层析测定方法，测定原理主要可应用各种免疫法如夹心法、竞争法等。例如，根据本专利技术的一具体实施方案，是应用夹心法测定原理测定样品中的乙型肝炎病毒前Sl抗原(HBV Pre SlAg)。该实施方案中，是在层析柱的活性区填充足够量的包被有HBV Pre SlAb(Sl抗体)的免疫吸附剂，加入待测样品后，当待测样品流经活性区时， 如果待测样品中含有HBV Pre SlAg，该HBV Pre SlAg会与活性区内的其抗体结合而被固定下来；然后加入携带有发光纳米粒子(如荧光纳米粒子)的Anti-HBs，其流经活性区时会与固定在抗体上的Sl抗原结合，形成带有荧光的免疫复合物；没有结合的发光纳米粒子经洗液洗涤而分离，通过测定荧光强度即可判定所测样品中是否存在Sl抗原。显然，样品中抗原含量与荧光强度呈正相关，据此可以将所测结果与用已知浓度的校准品进行比较，可定量测定样品中的HBV Pre SliVg含量；也可以将校准品换成阴性、阳性对照品，可做定性测定。再如，根据本专利技术的另一具体实施方案，是采用间接法即采用二抗的夹心法测定样品中的抗巨细胞病毒IgG抗体(Anti-CMV)。该实施方案中，是在活性区填充足够量的包被有CMV抗原的免疫吸附剂，当待测样品加进层析柱后，样品流过包被有抗原的活性区，若样品中存在有Anti-CMV(IgG)，其将会与其抗原结合而被固定下来；然后加入携带有发光纳米粒子(如荧光纳米粒子)的Anti-IgG(人)，与固定在抗原上的IgG结合，形成带有荧光的免疫复合物；没有结合的荧光粒子，经洗涤而除去；测定荧光强度即可判定血清样品中是否存在相应抗体。显然，样品中抗原含量与荧光强度呈正相关，据此可以将所测结果与用已知浓度的校准品进行比较，可定量测定样品中的抗体的含量；也可以将校准品换成阴性、阳性对照品，可做定性测定。上述应用夹心法测定原理的方案在实际测定时，如果待测样品中待测物质含量微小，只需要几次加样，即重复加被测样品、发光纳米粒子和洗液的步骤，即可直接测量荧光信号，省去了传统的温育和分离程序。本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种免疫纳米粒子层析测定方法，该方法包括步骤：提供一层析柱；该层析柱设置有上段加样区、中段活性区以及下段排液区，所述中段活性区内填充有用于捕捉固定待测物质的免疫吸附剂；将待测样品从加样区加入所述层析柱，并流经所述活性区；然后将悬浮有纳米粒子的溶液从所述加样区加入层析柱，并流经所述活性区；其中所述纳米粒子披覆有能与所述待测物质相结合的物质。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王立莉，
申请(专利权)人：王立莉，
类型：发明
国别省市：11
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