本发明专利技术公开了一种复合细菌混悬液，是酿脓链球菌与粘质沙雷氏菌的全细胞混合物，混悬液中酿脓链球菌与粘质沙雷氏菌细菌总数为每毫升10万～300万个，其中，酿脓链球菌与粘质沙雷氏菌细菌个数比例为1∶1或2∶1；混悬液中两种细菌未经青霉素处理，主种子批菌种启开后传代次数均不超3代，工作种子批菌种启开后至接种生产用培养基传代次数均不超过3代。本发明专利技术的复合细菌全细胞混悬液可以用于治疗肿瘤，其给药途径为瘤内注射、腔内注射或肌肉注射。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种具有抗肿瘤作用的药物，特别涉及一种由酿脓链球菌与粘质沙雷氏菌的全细胞混悬液组成的复合细菌混悬液。
技术介绍
近年来，我国每年新增肿瘤患者160万-170万人，总数在450万人左右。其发病率和死亡率均呈现上升趋势。国家卫生部发布的《2009年中国卫生统计提要》显示，2008 年部分市县前十位疾病死亡专率中，恶性肿瘤居于首位，已成为危害人类健康的头号杀手。目前现有技术中已存在许多抗肿瘤化疗药物，而且有更多的化合物已被发现具有抗肿瘤作用。但是，大多数抗肿瘤药物由于缺乏理想的选择性，在抑制或杀伤肿瘤细胞的同时，对人体正常组织细胞也具有抑制或损伤作用，因而具有较多的副作用，如蒽环类抗癌抗生素阿霉素的心脏毒性、顺钼加环磷酰胺化疗方案所致骨髓毒性的作用、顺钼治疗卵巢癌或睾丸癌所诱导的神经毒性及其肾毒性等。除化疗药物外，肿瘤的放射疗法及手术治疗目前也很难达到理想的效果。因此，肿瘤治疗新方法及新药物的研发成为国内外医药领域的研发热点。随着细菌生物学和分子生物学的发展，人们认识到许多细菌(如幽门螺杆菌)可以引起肿瘤，同时，一些细菌及其产物也具有肿瘤抑制作用。早在200年前，人们就已经发现某些肿瘤患者在急性细菌感染后，肿瘤生长被抑制(韩景田，张国辉综述，董小青审校.细菌及其产物对肿瘤的影响研究进展.武警医学院学报.2009年2月，第18卷，第2 期，159-161页)。二十世纪八十年代，皮肤病专家发现细菌感染引发的痤疮患者患皮肤癌、 淋巴癌和白血病的几率相对较低，并且这些细菌注入动物体内会导致肿瘤萎缩。对细菌的不同组分进行分离并进行实验发现，细菌所含的脂多糖是其肿瘤抑制作用的活性组分。由于自然科学的发展、基础理论研究与新技术的应用，肿瘤学研究有了长足的进步，细菌及其产物对肿瘤的治疗作用成为该研究领域的热门课题之一。在肿瘤细胞发生发展的过程中，由于基因突变等原因肿瘤细胞会表达一些新的抗原。这些新抗原作为“非己”物质，可以被机体的免疫系统识别和杀伤。然而肿瘤在人体免疫功能作用下仍能发展、转移，表明肿瘤也有自己的保护机制。当机体发生肿瘤时，肿瘤细胞可以凭借多种方式逃避免疫系统的监控而分裂生长，即肿瘤的免疫逃逸(丁红仙.肿瘤免疫逃逸机制的研究进展.海峡药学.2008年，第20卷，第7期，12-14页)。肿瘤细胞通过自分泌-旁分泌途径能分泌免疫抑制性细胞因子，如转化生长因子β (TGF-β)、白细胞介素-IO(IL-IO)、血管内皮生长因子(VEGF)和IL-4等，使肿瘤局部形成深度免疫抑制区， 不仅使身在其中的免疫细胞功能受到严重抑制，甚至功能正常、活化的免疫细胞，一旦进入此环境也将成为免疫功能抑制的“沉默”细胞，是肿瘤免疫逃逸的重要机制之一(Colombo MP, Piconese S. Regulatory—T—cell inhibition versus depletion :the right choice in cancer immunotherapy. Nat RevCancer. 2007 Nov ；7 (11) :880-7.)。 TGF-β 是介导月中瘤免疫逃逸最有效的免疫抑制分子，能广泛抑制肿瘤患者的免疫系统，可以抑制T细胞增3殖，抑制IL-I β、IL-2受体的表达，拮抗抑制Y干扰素、肿瘤坏死因子α (TNF-α )等的免疫效应。IL-10可阻抑抗原递呈细胞(APC)在肿瘤组织的浸润、分化、成熟及对抗原的趋化反应，诱导其表面⑶86、⑶40、⑶讨分子、HLA-I及HLA-II类分子低表达或不表达，直接或通过功能缺陷型APC使细胞毒T淋巴细胞(CTL)处于免疫无能状态。VEGF可影响树突状细胞的分化与成熟，阻碍其抗原递呈功能，进一步影响CTL的扩增、活化及瘤细胞对CTL杀伤的敏感性，还可通过上调B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-幻的表达，抑制瘤细胞凋亡， 在一定程度上限制了机体的有效抗肿瘤免疫。经研究，已经发现多种细菌及其产物具有诱导机体抗肿瘤免疫，抑制肿瘤生长的药理活性，比如李斯特菌是一种广泛存在于自然界的革兰阳性菌，可感APC，激发强烈的细胞免疫，CD4和CD8+T细胞介导的细胞免疫是其特。即使高度减毒的李斯特菌在免疫治疗中仍具有的抗月中瘤效能(Paterson Y. Maciag PC. Listeria-based vaccines for cancer treatment. Curr OpinMol Ther. 20050ct ；7 (5) :454-60)。卡介苗(BCG)作为免疫佐剂在防治膀胱肿瘤方面也取得了良好效果，BCG灌注被认为是膀胱肿瘤最有效的辅助治疗手段之一。BCG刺激宿主免疫系统产生抗癌免疫效应与其多种活性组分有关，如核酸、胞壁中的脂质、及脂多糖均能刺激机休免疫系统产生抗癌免疫反应。应用乳酸杆菌LC9018治疗C3H/He系小鼠膀胱癌的实验发现，癌组织可检测到抗肿瘤细胞因子(TNF-α、IL-12)mRNA局部明显的高表达。已知绿脓杆菌的(LPQ能显著延长急性髓性血病患者的缓解期和生存；葡萄球菌肠毒素A对肿瘤细胞具有杀伤作用。金黄色葡萄球菌菌株ATCC25923的DNA也具有抗肿瘤效应(历风元，蒋智敏，周文清，朱涟敏.金黄色葡萄球菌DNA抗肿瘤免疫的实验研究.江西医学院学报.2008年，第48卷，第6期，28-32页)中国专利95193357. 4 (专利权人斯坦福鲁克有限公司；申请日1995. 03. 29，公开号1150388，公开日1997. 05.21)公开了一种牦牛分支杆菌菌株(NTCT11659菌株)，具有抗肿瘤作用。中国专利02111996. 1 (专利权人靳海；申请日2002. 06. 05，公开号1465353，公开日2004. 01. 07)公开了一种粘质沙雷氏菌S311菌株(菌种编号=CGMCC NO. 0744)，具有抗肿瘤作用，并已获得中国生物制品一类新药证书。美国专利US3477914(专利权人日本中外制药株式会社即CHUGAI PHARMACEUTICAL COLTD ；公开日1969年11月11日)公开了一种用青霉素处理的酿脓链球菌Su菌株，具有抗肿瘤作用。目前上市的0K432、沙培林、力尔凡等链球菌制剂既是青霉素处理的酿脓链球菌Su菌株。该专利实施例1给出的数据显示青霉素浓度为5. 4X IO4单位/ml时，与艾氏腹水瘤细胞混合培养，接种于小鼠50天内，小鼠存活率为100%，且均未发现肿瘤。但青霉素的加入限制了该药在青霉素过敏患者中的应用，且所提供的实验结果与国内文献(吴战宇，邱芳萍，卢日峰.改良培养基制备A群链球菌制剂及其抗肿瘤活性研究.中国药业.2007年，第16卷第6期，第5-6页)及临床使用效果差异较大。国内文献报道其中剂量给药后艾氏腹水瘤及肝癌腹水瘤小鼠的生命延长率最高，为63. 38% ；最常生存天数不超过30天。美国专利US3627644(公开日1971年12月14日)公开了一种酿脓链球菌菌株(ATCC21060)具有抗肿瘤作用。美国专利US434卯41 (专利权人日本中外制药株式会社；公开日1982年09月14 日)公开了一种酿脓链球菌菌株(ATCC21597)具有抗肿瘤作用。美国专利US467877本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种复合细菌混悬液，其特征在于：是酿脓链球菌与粘质沙雷氏菌的全细胞混合物，混悬液中酿脓链球菌与粘质沙雷氏菌细菌总数为每毫升１０万～３００万个，其中，酿脓链球菌与粘质沙雷氏菌细菌个数比例为１∶１或２∶１；混悬液中两种细菌未经青霉素处理，主种子批菌种启开后传代次数均不超３代，工作种子批菌种启开后至接种生产用培养基传代次数均不超过３代。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：厉保秋，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：88
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