【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
1.一种抗β-葡萄糖醛酸苷酶的兔单克隆抗体的制备方法,其特征在于它的步骤如下:1)兔子免疫 将450~600μg的免疫抗原β-葡萄糖醛酸苷酶蛋白与等量弗氏不完全佐剂混合,完全乳化后,采用背部皮下3~6点注射2~3只新西兰大白兔,在开始免疫后的第三、五、七、九周,分别用150~250mg的免疫抗原蛋白与弗氏不完全佐剂混合后以同样的方法进行免疫;2)细胞融合 选择第五次免疫之后血清效价高的兔子先进行一次加强免疫,8~10天后取无菌脾脏,制备单细胞悬浮液,融合当天选择生长旺盛、处于对数生长期的脾细胞与处于对数生长期的骨髓瘤细胞相融合,质量百分比为48%~52%的聚乙二醇为融合剂,体积百分比为18%~22%的HAT作为选择性培养基,铺于40块96孔板中,其中H是浓度为0.8×10-6~1.2×10-6mol/L的次黄嘌呤,A是浓度为3.5×10-9~4.5×10-9mol/L的氨基蝶呤,T是浓度为1.4×10-7~1.8×10-7mol/L的胸腺嘧啶核苷;3)杂交瘤细胞的筛选 细胞融合后第8~12天随机选择40板中的2块板对克隆子通过间接酶联免疫吸附进行预筛,确定是否需要更换 ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:郑晓冬,倪庚,沈金儿,刘娜,陆蕾,冯劲松,
申请(专利权)人:浙江大学,
类型:发明
国别省市:86
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