一种阴道分泌物检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开一种阴道分泌物检测试剂盒，包括：反应装置、显色剂；所述反应装置包括用于检测β‑葡萄糖醛酸苷酶的反应孔、用于检测乙酰氨基葡萄糖苷酶的反应孔、用于检测凝固酶的反应孔和用于检测脯氨酸氨基肽酶的反应孔；所述试剂盒检测时阴道分泌物时，采用的稀释液为生理盐水。该阴道分泌物检测试剂盒可以细菌性阴道病和滴虫性阴道炎的致病菌或病原体，辅助快速判断阴道病情况。本发明专利技术还公开所述阴道分泌物检测试剂盒的制备方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种阴道分泌物检测试剂盒及其制备方法，属于女性阴道病检测用品领域。
技术介绍
阴道炎是阴道黏膜及黏膜下结缔组织的炎症，是妇科门诊常见的疾病。正常健康妇女，由于解剖学及生物化学特点，阴道对病原体的侵入有自然防御功能，当阴道的自然防御功能遭到破坏，则病原体易于侵入，导致阴道炎症。常见的阴道炎有细菌性阴道炎(BV/AV)、霉菌性阴道炎(VVC)及滴虫性阴道炎(TV)三大类。其中，女性细菌性阴道感染可分为两种，一种由厌氧菌和兼性厌氧菌引起，临床上称细菌性阴道病(BV)，另一种由需氧菌引起，临床上称需氧菌性阴道炎(AV)。两种细菌性阴道炎的病原体不同，临床症状、治疗方案和结局也不相同，区别这两种细菌性阴道感染，在阴道感染的诊疗中具有重要意义。BV是指一类在生殖学上正常菌群(产H2O2乳酸杆菌)减少，代之以加德纳菌、厌氧菌，动弯杆菌大量繁殖，阴道内生态平衡系统改变引起的一类疾病。AV是由阴道乳酸杆菌减少，需氧菌感染引起的阴道炎症。常见病原体为链球菌、葡萄球菌以及大肠埃希菌。正常阴道是以乳酸杆菌为优势菌的正常微生物群，阴道pH＜4.5。而当患需氧菌性阴道炎时，阴道乳酸杆菌减少，而需氧菌繁殖导致阴道壁黏膜充血、水肿和产生脓性分泌物。临床表现以阴道异常分泌物、性交痛为主。滴虫性阴道炎(TV)是以阴道毛滴虫为主要病原体产生的一类阴道疾病，是全球性、十分常见的公共卫生性传播疾病。细菌预成酶是细菌在生长繁殖过程中合成的一系列与生长代谢有关的酶类，这些酶类能分解多种生化反应的底物，并且在有氧环境中能较长时间地保留其活性。不同种属的细菌，其预成酶的种类不同。B族链球菌和大肠埃希菌代谢可产生β葡萄糖醛酸酶，滴虫、念珠菌具有N-乙酰氨基葡萄糖苷酶特异性酶，AV的主要致病菌黄色葡萄球菌、粪肠球菌、大肠埃希菌可产生凝固酶，脯氨酸氨基肽酶是由加德纳菌和动弯杆菌产生，是BV相关病原体所分泌的特异性标志酶，所以对以上酶的进行检测，以诊断阴道中菌群结构是一个有效、可行的方法。但现有技术中，未有能同时检测以上四种酶的试剂盒。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术的第一个目的在于提供一种阴道分泌物检测试剂盒，该阴道分泌物检测试剂盒可以检测细菌性阴道病和滴虫性阴道炎的致病菌或病原体，辅助快速判断阴道病情况。实现本专利技术的目的可以通过采取如下技术方案达到：一种阴道分泌物检测试剂盒，包括：反应装置、显色剂；所述反应装置包括用于检测β-葡萄糖醛酸苷酶的反应孔、用于检测乙酰氨基葡萄糖苷酶的反应孔、用于检测凝固酶的反应孔和用于检测脯氨酸氨基肽酶的反应孔；所述试剂盒检测时阴道分泌物时，采用的稀释液为生理盐水。作为优选，所述显色剂包括与用于检测凝固酶的反应孔配合的第一显色剂、与用于检测乙酰氨基葡萄糖苷酶的反应孔配合的第二显色剂；所述第一显色剂为肉桂醛的盐酸溶液；所述第二显色剂为氢氧化钠溶液。作为优选，所述用于检测β-葡萄糖醛酸苷酶的反应孔包被有β-葡萄糖醛酸苷酶检测试剂；所述β-葡萄糖醛酸苷酶检测试剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖醛酸苷盐、新生牛血清和磷酸盐缓冲液。再优选地，所述β-葡萄糖醛酸苷酶检测试剂的成分按重量份计包括：聚乙烯吡咯烷酮1～10份；5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖醛酸苷盐2.5～25份；其中，新生牛血清占β-葡萄糖醛酸苷酶检测试剂的体积百分比为1～10％；磷酸盐缓冲液的摩尔浓度为50～150mmol/L。作为优选，所述用于检测乙酰氨基葡萄糖苷酶的反应孔包被有乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试剂；所述乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试剂包括：无水甲醇、对硝基苯-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶、聚乙烯吡咯烷酮、TritonX-100、EDTA和柠檬酸。再优选地，所述乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试剂的成分按重量份计包括：所述TritonX-10占乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试剂的体积百分比为0.01～0.5％。作为优选，所述用于检测凝固酶的反应孔包被有凝固酶检测试剂；所述凝固酶检测试剂包括：吗啉乙磺酸缓冲液、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮和甘氨酰-精氨酰四甲氧基-β-萘胺。再优选地，所述凝固酶检测试剂的成分按重量份计包括：蔗糖0.2～10份；聚乙烯吡咯烷酮0.2～2份；甘氨酰-精氨酰四甲氧基-β-萘胺0.2～2份；其中，吗啉乙磺酸缓冲液的摩尔浓度为：0.05～1.5mol/L。作为优选，所述用于检测脯氨酸氨基肽酶的反应孔包被有脯氨酸氨基肽酶检测试剂；所述脯氨酸氨基肽酶检测试剂包括：二硫苏糖醇、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮、Z-甘氨酰-脯氨酸-对硝基苯胺、牛血清白蛋白和Tris-Hcl缓冲液。再优选地，所述脯氨酸氨基肽酶检测试剂的成分按重量份计包括：其中，牛血清白蛋白占脯氨酸氨基肽酶检测试剂的体积百分比0.5～10％；Tris-Hcl缓冲液的摩尔浓度为0.01～1mol/L。本专利技术的第二个目的是为了提供一种检测试剂盒的制备方法，通过该方法可获得稳定性好，精确度高的检测试剂盒。实现本专利技术的目的可以通过采取如下技术方案达到：一种如上所述的检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：1)制备β-葡萄糖醛酸苷酶反应垫：将聚乙烯吡咯烷酮和5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖醛酸苷盐溶于磷酸盐缓冲液中，得到浸泡液A；将新生牛血清充分溶于磷酸盐缓冲液中，得到浸泡液B；将载体置于浸泡液A中充分浸泡，然后取出干燥，再置于浸泡液B中充分浸泡，然后取出干燥，获得β-葡萄糖醛酸苷酶反应垫；2)制备乙酰氨基葡萄糖苷酶反应垫：将对硝基苯-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶充分溶于无水甲醇中，得到浸泡液A；将聚乙烯吡咯烷酮、TritonX-10、EDTA和柠檬酸溶于纯水中，得到浸泡液B；将载体置于浸泡液A中充分浸泡，然后取出干燥，再置于浸泡液B中充分浸泡，然后取出干燥，得到乙酰氨基葡萄糖苷酶反应垫；3)制备凝固酶反应垫：将蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮和甘氨酰-精氨酰四甲氧基-β-萘胺溶于吗啉乙磺酸缓冲液中，得到浸泡液；将载体置于浸泡液中充分浸泡，然后取出干燥，得到凝固酶反应垫；4)制备脯氨酸氨基肽酶反应垫：将二硫苏糖醇、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮、Z-甘氨酰-脯氨酸-对硝基苯胺和牛血清白蛋白溶于Tris-Hcl缓冲液中，得到浸泡液；将载体置于浸泡液中充分浸泡，然后取出干燥，得到脯氨酸氨基肽酶反应垫；5)制备显色剂：将肉桂醛溶于盐酸溶液中，得到第一显色剂；将氢氧化钠溶于水中，得到第二显色剂；6)放置反应垫：将步骤1)～4)获得的β-葡萄糖醛酸苷酶反应垫、乙酰氨基葡萄糖苷酶反应垫、凝固酶反应垫和脯氨酸氨基肽酶反应垫分别放入试剂盒对应的孔位中，得到反应装置；7)反应装置与显色剂组合即为检测试剂盒。作为优选，所述步骤1)中，磷酸盐缓冲液的pH为6.8～7.5。作为优选，所述步骤1)～4)中，载体每一次在浸泡液中浸泡的时间为10～20s。作为优选，所述步骤1)～4)中，每一次干燥的条件为温度20～75℃，时间30～40min。本专利技术的设计原理如下：本专利技术中的用于检测β-葡萄糖醛酸苷酶的反应孔包被有β-葡萄糖醛酸苷酶检测试剂，该β-葡萄糖醛酸苷酶检测试剂含有5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖醛酸苷盐，当阴道分泌物中的葡萄糖醛酸苷酶活性异常时，葡萄糖醛酸苷酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种阴道分泌物检测试剂盒，其特征在于包括：反应装置、显色剂；所述反应装置包括用于检测β‑葡萄糖醛酸苷酶的反应孔、用于检测乙酰氨基葡萄糖苷酶的反应孔、用于检测凝固酶的反应孔和用于检测脯氨酸氨基肽酶的反应孔；所述试剂盒检测时阴道分泌物时，采用的稀释液为生理盐水。

【技术特征摘要】
1.一种阴道分泌物检测试剂盒，其特征在于包括：反应装置、显色剂；所述反应装置包括用于检测β-葡萄糖醛酸苷酶的反应孔、用于检测乙酰氨基葡萄糖苷酶的反应孔、用于检测凝固酶的反应孔和用于检测脯氨酸氨基肽酶的反应孔；所述试剂盒检测时阴道分泌物时，采用的稀释液为生理盐水。2.如权利要求1所述的阴道分泌物检测试剂盒，其特征在于：所述显色剂包括与用于检测凝固酶的反应孔配合的第一显色剂、与用于检测乙酰氨基葡萄糖苷酶的反应孔配合的第二显色剂；所述第一显色剂为肉桂醛的盐酸溶液；所述第二显色剂为氢氧化钠溶液。3.如权利要求1所述的阴道分泌物检测试剂盒，其特征在于：所述用于检测β-葡萄糖醛酸苷酶的反应孔包被有β-葡萄糖醛酸苷酶检测试剂；所述β-葡萄糖醛酸苷酶检测试剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖醛酸苷盐、新生牛血清和磷酸盐缓冲液。4.如权利要求3所述的阴道分泌物检测试剂盒，其特征在于：所述β-葡萄糖醛酸苷酶检测试剂的成分按重量份计包括：聚乙烯吡咯烷酮1～10份；5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖醛酸苷盐2.5～25份；其中，新生牛血清占β-葡萄糖醛酸苷酶检测试剂的体积百分比为1～10％；磷酸盐缓冲液的摩尔浓度为50～150mmol/L。5.如权利要求1所述的阴道分泌物检测试剂盒，其特征在于：所述用于检测乙酰氨基葡萄糖苷酶的反应孔包被有乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试剂；所述乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试剂包括：无水甲醇、对硝基苯-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶、聚乙烯吡咯烷酮、TritonX-100、EDTA和柠檬酸。6.如权利要求5所述的阴道分泌物检测试剂盒，其特征在于：所述乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试剂的成分按重量份计包括：所述TritonX-10占乙酰氨基葡萄糖苷酶检测试剂的体积百分比为0.01～0.5％。7.如权利要求1所述的阴道分泌物检测试剂盒，其特征在于：所述用于检测凝固酶的反应孔包被有凝固酶检测试剂；所述凝固酶检测试剂包括：吗啉乙磺酸缓冲液、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮和甘氨酰-精氨酰四甲氧基-β-萘胺。8.如权利要求7所述的阴道分泌物检测试剂盒，其特征在于：所述凝固酶检测试剂的成分按重量份计包括：蔗糖0.2～10份；聚乙烯吡咯烷酮0.2～2份；甘氨酰-精氨酰四甲氧基-β-萘胺0.2～2份；其中，吗啉乙磺酸缓冲液的摩尔浓度为：0.05～1.5mol/L。9.如权利要求1所述的阴道分泌物检测试剂盒，其特征在于：所述用于检测脯氨酸氨基肽酶的反应孔包被有脯氨酸氨基肽酶检测试剂；...

【专利技术属性】
技术研发人员：眭红燕，朱华琳，范静彦，李必松，
申请(专利权)人：广州鸿琪光学仪器科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44