增强核酸接种免疫应答的方法技术

本发明专利技术提供了一种用于将核酸和辅助蛋白共递送至细胞的组合物，其中含有囊泡、核酸和辅助蛋白，其中所述核酸可操作地编码一种抗原性蛋白或其部分，该抗原性蛋白或其部分与所述辅助蛋白之间共有至少１个表位，含所述核酸和所述辅助蛋白的组合物与同一囊泡彼此结合在一起。一种优选的实施方案是一种组合物，其中含有由脂质体形成材料以及与脂质体结合在一起的核酸和辅助蛋白组成的脂质体，该核酸可操作地编码一种抗原性蛋白，其中所述辅助蛋白与所述抗原性蛋白之间具有至少一个相同表位。所述组合物可用作疫苗，提供改良的免疫应答，这种改良是相对于非囊泡组合物或者脂质体混合物而言的，组成所述脂质体混合物的一部分与核酸结合，一部分与辅助蛋白结合。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及用于共递送核酸和蛋白质的组合物。共递送意指核酸和蛋白质二者源白同一囊泡，并且一起被递送到同一细胞。所述组合物可用于激发免疫应答。具体而言，其中的核酸能够可操作地编码一种抗原性蛋白或其部分，其序列与作为组合物组分的“辅助蛋白”同源，优选为等同。长期以来一直使用源自病原体的蛋白质抗原制备疫苗，激发接受者体内产生特异性针对抗原的中和抗体或细胞-介导免疫应答。但是，蛋白质往往不能很好地激发一些类型的细胞-介导免疫应答，特别是生成效应T细胞(包括细胞毒性T-细胞)的免疫应答，效应T细胞(特别是那些针对细胞内病原体或癌抗原的效应T细胞)是多种疫苗的应答反应中期望出现的成分。后来，疫苗发展到以裸露DNA为基础，这些DNA通常从大肠杆菌制备得到但是不含有适于哺乳动物细胞内表达的启动子序列。现已得知后来的这些疫苗能够很好地产生细胞介导免疫(包括效应T-细胞，例如分泌干扰素-γ的抗原特异性T-细胞和抗原-特异性细胞毒性T-细胞)，但是产生针对编码及表达抗原的抗体的效果很差。抗体是多种病原体保护性免疫应答的重要成分，特别是细菌和一些病毒例如流感病毒。现已提出和开发了各种方案来弥补DNA-为基础的疫苗的缺陷，如下文所述。多年来，使用脂质体制剂增强蛋白形式的疫苗抗原的免疫原性。近年来，脂质体制剂也被用于疫苗用的DNA制剂。有试验描述了用脂质体共配制质粒DNA与蛋白质。但是，将DNA与蛋白质共配制的试验通常使用编码除抗原本身之外的免疫刺激细胞因子或其他生物活性蛋白的质粒。在含有经过设计在体内表达蛋白的核酸的疫苗组合物中，包括蛋白形式的抗原本身是多余的。我们得知只有1篇文献其中在制剂中除了含有DNA之外还使用蛋白抗原作为添加剂(Alvarez-Lajonchere，L.et al.MemInst Oswaldo Cruz，Rio de Janiero，97(1)95-99，January 2002)。与本专利技术不同，与单独使用蛋白质免疫相比，这些作者在抗原编码DNA及其同源蛋白的共制剂中并没有观察到任何的抗体增强。Alvarez-Lajonchere等人使用的制剂中含有活性核酸(编码丙肝病毒核心蛋白的质粒)外加无关载体DNA和聚乙二醇的混合体以及蛋白质。注射后，所述蛋白质和活性DNA(在混合物中它们物理学上互不相连)各自扩散分别到达抗原提呈细胞。Alvarez-Lajonchere的否定性发现使得本领域技术人员认为将蛋白质与其同源DNA配制不是一种能实现免疫应答增强的可行途径，至少没有增强抗体应答。WO-A-9930733中指出与同源蛋白同时施用能够增强核酸疫苗的免疫应答。这两种成分无需放在同一组合物中施用。只不过是二者都必须在免疫应答的诱导期施用，优选在所述核酸核酸刺激免疫系统之前所述蛋白质是被覆盖或被隐藏着的。一些实施例中，疫苗中含有物理混合的裸露DNA和裸露蛋白抗原。其他实施例中，为了延迟释放，将蛋白抗原配制在混合了裸露DNA的生物可降解聚合物-矾制剂中。WO-A-9728818中的疫苗其目的是为了将核酸和蛋白抗原递送入抗原提呈细胞。所述核酸可以表达与所述蛋白抗原相同的蛋白质。所述核酸和蛋白质复合在一起的，例如通过共价结合。所述复合体可以配制为合成病毒样颗粒。另外还教导可以使用脂质体系统，但是没有提供关于应该如何将蛋白质和核酸掺入所述系统的任何实施例，而且说明书中也没有提供体内试验的任何定量性结果，而是预测了在实践中可能不会发生的结果，特别是II类应答。现已知当将非-编码质粒DNA与肽共埋入脂质体囊泡中时，非-编码质粒DNA具有免疫佐剂的作用(Gursel，M.et al.Vaccine(1999)171376-1383)，对于裸露的DNA和肽疫苗而言带有CpG基序的DNA具有免疫佐剂作用(Klinman，D.M.et al.Vaccine(1999)1719-25)。但是在本专利技术中，我们设想如果我们用物理学方法将核酸例如DNA与其同源蛋白结合在一起并将其包埋，这两种物质将一起到达抗原提呈细胞，从而使得所述抗原的获得性蛋白形式的处理和提呈与所述抗原性蛋白的DNA编码形式的表达在同一细胞中进行。由于表达蛋白的抗原处理通过不同途径发生的，动力学也与获得的蛋白质略有不同，所以我们设想将DNA与其同源蛋白共递送将会为这两种抗原提呈模式产生加成或协同作用以及增强免疫应答提供良机。现在我们已经用DNA及其同源蛋白囊泡制剂对这一新论断进行了测试，这种制剂形式将DNA及其同源蛋白结合在一起。与Alvarez-Lajonchere等人不同，我们发现DNA结合(通过脂质体)其同源蛋白(称其为“辅助蛋白”)能够作为特殊的疫苗组合物，其中在免疫后可以观察到加强了的抗体应答(与单独用蛋白或单独用DNA免疫相比)。我们发现如果将DNA与蛋白质配制在不同颗粒中并混合颗粒，则没有观察到抗体产量的增加。这些发现与我们的将DNA与辅助蛋白共递送到同一抗原提呈细胞的理论相一致，尽管我们承认迄今还有其他的理论解释不能被排除。本专利技术提供了一种用于共递送核酸和辅助蛋到细胞中的组合物，其中含有两性成分形成的囊泡，其中所述核酸可操作地编码一种抗原性蛋白或其部分，该抗原性蛋白或其部分与所述辅助蛋白之间共有至少1个表位，含所述核酸和所述辅助蛋白的组合物与同一囊泡彼此结合在一起。术语辅助蛋白是指完整的蛋白质或蛋白质片段，单一类型的蛋白或不同类型的蛋白质。核酸编码的抗原性蛋白质通常为目的蛋白即期望在受试者体内激发有益免疫应答的目的抗原。所述辅助蛋白通常与抗原性蛋白编码核酸的表达形式等同，即为所述核酸的同源蛋白。抗原性蛋白和/或所述辅助蛋白可以各自(分别)含有相关来源的天然生成蛋白的全长序列。优选地，所述核酸编码完整的天然生成的蛋白抗原。替代地，所述核酸可以只编码天然蛋白的一部分，其中含有辅助蛋白的至少一个表位。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述表位是一种B细胞表位，暴露于其天然生成形式感染因子的表面。所述核酸可以只编码天然蛋白的一部分，其中含有天然生成因子的至少一个表位。所述因子为，例如，微生物，例如细菌或酵母或病毒。类似地，所述辅助蛋白应该含有不同来源的表位，当所述来源是存在于天然环境时，这些表位(在一个实施方案中)是暴露于表面上的。替代地并且是有用的，抗原性蛋白和辅助蛋白二者与病原体的分泌型毒性产物例如破伤风毒素具有相同的表位，这样就能够准确地中和所述毒素。类似地，抗原性蛋白和辅助蛋白二者可以相互间共有一个或多个表位，这个/这些表位是与除毒素之外的病原体分泌型产物所共有的，例如由EB病毒编码并由该EB病毒感染细胞分泌的白介素-10类似物。我们已经提出了两种彼此互不抵触的相关理论来解释这种新的组合物的改良特性。我们将这些理论称之为一般和专门理论(如下文所述)。1.一般理论一般理论认为适当共配制物质的改良特性(其中DNA及其同源蛋白通过一个囊泡结合在一起，从而使得囊泡中同时具有DNA和蛋白质)是由于核酸及其同源蛋白(辅助蛋白)二者被同一抗原提呈细胞(其是经典的抗原提呈细胞例如巨噬细胞或树突状细胞，或抗原特异性或非-抗原特异性B细胞)获取。DNA及其同源蛋白共递送到同一细胞使得二者在激发免疫应答方面产生协同相互作用，而这在DNA被一抗原提呈细胞获得而蛋白质被本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于将核酸和辅助蛋白共递送至细胞的组合物，其中含有两性成分形成的囊泡，其中所述核酸可操作地编码一种抗原性蛋白或其部分，该抗原性蛋白或其部分与所述辅助蛋白之间共有至少１个表位，含所述核酸和所述辅助蛋白的组合物与同一囊泡彼此结合在一起。

【技术特征摘要】
EP 2002-7-5 02254733.51.一种用于将核酸和辅助蛋白共递送至细胞的组合物，其中含有两性成分形成的囊泡，其中所述核酸可操作地编码一种抗原性蛋白或其部分，该抗原性蛋白或其部分与所述辅助蛋白之间共有至少1个表位，含所述核酸和所述辅助蛋白的组合物与同一囊泡彼此结合在一起。2.上述任一项权利要求所述组合物，其中所述囊泡是由脂质体形成材料形成的脂质体，所述核酸和所述辅助蛋白与该脂质体结合在一起。3.权利要求2所述组合物，其中所述核酸被包埋在脂质体囊泡内空间。4.权利要求2或3所述组合物，其中所述辅助蛋白在脂质体外表面上可以接近。5.上述任一项权利要求所述组合物，其中所述两性成分包括至少一种带有阳离子电荷的成分，其含量足以使囊泡带有总正电荷。6.权利要求5所述组合物，其中阳离子成分选自1，2-双(油酰氧)-3-(三甲铵)丙烷(DOTAP)、1，2-双(十六烷基氧)-3-三甲氨丙烷(BisHOP)，β-[1-(2，3-二油酰氧)丙基]-N，N，N-氯化三乙铵(DOTMA)和3β[N-N′N′-二甲氨乙烷)-氨甲酰]胆固醇(DC-Chol)。7.上述任一项权利要求所述组合物，其中所述核酸包括不止一种的核酸分子，其中的每一种都编码一种不同的抗原性蛋白，其中所述辅助蛋白包括与每一种所述抗原性蛋白具有相同表位的相应蛋白。8.权利要求7所述的组合物，其中所述核酸分子与同一囊泡结合在一起。9.上述任一项权利要求所述组合物，其中所述的抗原性蛋白和辅助蛋白源自病毒，优选为流感病毒。10.上述任一项权利要求所述组合物，其中所述的核酸分子为DNA，优选为质粒DNA。11.上述任一项权利要求所述组合物，其为疫苗。12.权利要求11所述的组合物，该组合物经过调整适于皮下、肌肉内、静...

【专利技术属性】
技术研发人员：AD培根，P莱恩，G格雷戈里亚迪斯，WR卡帕罗斯万德雷，
申请(专利权)人：利普生技术有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]