一种治疗阿尔茨海默病的干细胞制剂及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种治疗阿尔茨海默病的干细胞制剂及其制备方法，本发明专利技术制剂含有１×１０↑［４］／μＬ～９×１０↑［４］／μＬ的脐带血ＣＤ１３３阳性细胞，溶剂为可保持细胞活性的常规性溶剂，制备方法由下述步骤组成：（１）将脐带血采集于无菌抗凝袋中；（２）用淋巴细胞分离液离心分离脐带血单个核细胞；（３）冻存单个核细胞；（４）免疫磁珠分选ＣＤ１３３阳性细胞，使其浓度为１×１０↑［４］／μＬ～９×１０↑［４］／μＬ，溶剂为可保持细胞活性的常规性溶剂，本发明专利技术来源丰富，易于获得；对供者无痛苦；脐带血细胞免疫源性较弱，异体移植后免疫排斥反应发生率低、程度较轻；可以进行ＨＬＡ配型；脐带血易于冷冻保存；可通过静脉输注方式移植；易于分选。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种治疗用干细胞制剂及其制备方法，更具体地说，涉及一种用于阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease)移植治疗的干细胞制剂及其制备方法。
技术介绍
Alzheimer病是一种会不断发展的破坏脑细胞的退化性疾病，目前全球该病患者已达1700-2000万，其中80岁以上的人平均每5人就有1人患此病。由于对该病尚无有效的治疗方法，成为困扰当今社会及医学界的一大难题。随着世界人口老龄化，Alzheimer病已成了21世纪的灾难。Qu等报道(QuT，Brannen CL，Kim HM，Sugaya K.Human neural stem cellsimprove cognitive function of aged brain.Neuroreport.2001 May8；12(6)1127-32.)，将人的神经干细胞(NSC)移植入老年大鼠脑内，能够改善大鼠的认知功能；而Ende N等报道(Ende N，Chen R，Ende-Harris D.Human umbilical cordblood cells ameliorate Alzheimer’s disease in transgenic mice.J Med.2001；32(3-4)241-7.)，经静脉移植人的脐血单个核细胞可以延长转基因痴呆小鼠的寿命。经静脉移植脐血细胞到肌萎缩侧索硬化(ALS)的小鼠后(Garbuzova-Davis S，Willing AE，Zigova T，Saporta S，Justen EB，Lane JC，Hudson JE，Chen N，DavisCD，Sanberg PR.Intravenous administration of human umbilical cord blood cellsin a mouse model of amyotrophic lateral sclerosisdistribution，migration，anddifferentiation.J Hematother Stem Cell Res.2003 Jun；12(3)255-70.)，发现脐血细胞可将疾病的发生延缓2～3周，并延长了患病小鼠的寿命。在脑和脊髓运动神经元损伤区域内，移植细胞可存活10～12周，部分细胞表达神经标志物神经烯醇化酶、III型微管蛋白和神经胶质酸性蛋白。这些初步的研究结果显示，干细胞对痴呆有治疗作用。中枢神经系统损伤后的自身修复能力是相当有限的，因此细胞移植替代治疗成为近年来神经科学领域研究的焦点之一。目前研究较广泛的中枢神经系统移植物主要是胚胎干细胞和神经干细胞。但因来源有限、伦理障碍及免疫排斥等问题，这些细胞的实用性受到极大限制。近来研究表明，骨髓MSC具有分化为神经元和神经胶质细胞的能力。但是，骨髓源细胞有较高的病毒感染危险，且随着年龄增长其细胞数量和增殖、分化能力也显著性下降，较难满足临床需求。因此，寻找新的细胞来源成为神经系统疾病治疗中的热点。对脐带血中CD133阳性细胞的研究发现，60±8％脐带血CD133阳性细胞同时表达Nestin(Ha Y，Lee JE，Kim KN，Cho YE，Yoon DH.Intermediate filament nestinexpressions in human cord blood monocytes(HCMNCs).Acta Neurochir(Wien).2003Jun；145(6)483-7.)。由此推测，脐带血造血干细胞可能和神经干细胞具有很大的同源性。Buzanska等(Buzanska L，Machaj EK，Zablocka B，Pojda Z，Domanska-Janik K.Human cord blood-derived cells attain neuronal and glial features in vitro.JCell Sci.2002 May 15；115(Pt10)2131-8.)对磁珠分选去除CD34阳性细胞的脐带血单个核细胞进行研究发现，低密度(10细胞/cm2)接种后，细胞形成表达Nestin的集落。我们的研究首次发现，脐血单个核细胞能产生神经营养因子BDNF和NT4、NT5(FanC.G.，Zhang Q.J.，Tang F.W.，Han Z.B.，Wang G.S.，Han Z.C.Human umbilical cord bloodcells express neurotrophic factors.Neurosci Lett，2005.Vol.338.322-325)。脐带血CD133阳性细胞较其它干细胞在神经系统疾病的治疗中拥有更广泛的应用前景。但目前尚无脐带血CD133阳性细胞治疗Alzheimer病的相关报道。脐带血CD133阳性细胞向造血和内皮细胞分化的潜能已经被充分的认识，并在血液血管疾病的治疗中有良好的应用前景。但脐带血CD133阳性细胞向神经分化的潜能和在神经系统疾病治疗中的作用未被充分认识。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种来源丰富、易于获得、免疫源性较弱，异体移植后免疫排斥反应发生率低的治疗阿尔茨海默病的干细胞制剂。本专利技术的第二个目的是提供一种治疗阿尔茨海默病的干细胞制剂的制备方法。本专利技术的技术方案概述如下一种治疗阿尔茨海默病的干细胞制剂，它含有1×104/μL～9×104/μL的脐带血CD133阳性细胞，溶剂为可保持细胞活性的常规性溶剂。所述脐带血CD133阳性细胞的浓度优选为4×104/μL～6×104/μL。所述脐带血CD133阳性细胞的浓度最好为5×104/μL。所述一种治疗阿尔茨海默病的干细胞制剂的溶剂为1％人血白蛋白磷酸缓冲液。一种治疗阿尔茨海默病的干细胞制剂的制备方法，其特征是由下述步骤组成(1)将脐带血采集于无菌抗凝袋中；(2)用淋巴细胞分离液离心分离脐带血单个核细胞；(3)冻存单个核细胞；(4)免疫磁珠分选CD133阳性细胞，使其浓度为1×104/μL～9×104/μL，溶剂为可保持细胞活性的常规性溶剂。本专利技术的一种治疗阿尔茨海默病的干细胞制剂具有的选点是1.来源丰富，易于获得；2.采集方便，对供者无痛苦；3.脐带血细胞免疫源性较弱，异体移植后免疫排斥反应发生率低、程度较轻；4.可以进行HLA配型；5.脐带血易于冷冻保存；6.可通过静脉输注方式移植；7.易于分选。我们将本专利技术的一种治疗阿尔茨海默病的干细胞制剂应用于治疗Alzheimer病，可以为该病的治疗提供新的临床策略。附图说明图1为本专利技术一种治疗阿尔茨海默病的干细胞制剂直接种植在脑营养支持细胞表面，培养后，表达神经胶质酸性蛋白和III型微管蛋白，形成神经胶质细胞及神经元样细胞。图2为用放射臂水迷宫(RAWM)测定后发现，与移植脐带血CD133阴性细胞及磷酸缓冲液的小鼠的认知功能相比，移植本专利技术一种治疗阿尔茨海默病的干细胞制剂，小鼠认知功能在移植后30天后即有明显改善，在移植后6个月时仍持续存在(P＜0.05)。图3为与接受磷酸缓冲液处理的小鼠的存活曲线相比，移植脐带血CD133阴性细胞后，二者无明显差别，但移植本专利技术一种治疗阿尔茨海默病的干细胞制剂(人脐带血CD133阳性细胞)后的存活曲线本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗阿尔茨海默病的干细胞制剂，其特征是它含有１×１０↑［４］／μＬ～９×１０↑［４］／μＬ的脐带血ＣＤ１３３阳性细胞，溶剂为可保持细胞活性的常规性溶剂。

【技术特征摘要】
1.一种治疗阿尔茨海默病的干细胞制剂，其特征是它含有1×104/μL～9×104/μL的脐带血CD133阳性细胞，溶剂为可保持细胞活性的常规性溶剂。2.根据权利要求1所述的治疗阿尔茨海默病的干细胞制剂，其特征是所述脐带血CD133阳性细胞的浓度为4×104/μL～6×104/μL。3.根据权利要求2所述的治疗阿尔茨海默病的干细胞制剂，其特征是所述脐带血CD133阳性细胞的浓度为5×104/μ...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩忠朝，汤锋武，
申请(专利权)人：中国医学科学院血液学研究所泰达生命科学技术研究中心，天津昂赛细胞基因工程有限公司，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]