用于修复卵巢功能的细胞制剂制造技术

本发明专利技术涉及一种用于修复卵巢功能的细胞制剂，包括羊膜间充质干细胞和卵巢细胞。通过采用羊膜间充质干细胞结合卵巢细胞共同制成细胞制剂，以及用于防止羊膜间充质干细胞多向分化和促进羊膜间充质干细胞和卵巢细胞活性和正常生长增殖的辅助性成分，同时，结合卵巢细胞，使得羊膜间充质干细胞能够长期维持其干细胞特性，进而通过其分泌的细胞因子结合卵巢细胞共同作用于卵巢，以达到即时、彻底修复卵巢功能的目的；避免单一细胞制成的细胞制剂中，细胞性质不稳定，造成卵巢功能修复效果不稳定，修复效果差，无法彻底修复卵巢等缺陷。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞工程
，特别涉及一种用于修复卵巢功能的细胞制剂。
技术介绍
卵巢功能减退是指卵巢产生卵子能力减弱，卵泡质量下降，导致女性生育能力下降及性激素缺乏。卵巢功能减退会进一步发展导致卵巢功能衰竭，其中卵巢早衰是指妇女在40岁以前因某种原因引起的闭经、不育、雌激素缺乏以及促性腺激素水平升高为特征的一种疾病。目前为止，除年龄因素引起的生理性卵巢功能减退外，大多数病理性卵巢减退的病因仍不明确。临床上治疗效果不佳，辅助生殖治疗成功率也较低。目前有研究表明，采用干细胞制成的单一制剂能够促进卵巢细胞修复卵巢，但干细胞只能在一定时间内恢复卵巢激素平衡，无法从根本上解决卵巢功能衰退或持续保持卵巢激素平衡的问题。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，针对现有技术中采用单一细胞制剂修复卵巢存在修复不稳定、不彻底等缺陷，提供一种能够彻底修复卵巢功能的混合干细胞制剂。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种用于修复卵巢功能的细胞制剂，包括羊膜间充质干细胞和卵巢细胞。在本专利技术提供的用于修复卵巢功能的细胞制剂中，所述细胞制剂中，所述羊膜间充质干细胞的浓度为(1～5)×105个/ml，所述卵巢细胞的浓度为(4～8)×105个/ml。在本专利技术提供的用于修复卵巢功能的细胞制剂中，所述细胞制剂还包括肝素钠、白介素-6、白介素-3、干细胞因子、FMS样酪氨酸激酶3配体、血红蛋白、成纤维细胞生长因子。在本专利技术提供的用于修复卵巢功能的细胞制剂中，所述细胞制剂中，肝素钠的浓度为15-20ng/ml，白介素-6的浓度为10-20ng/ml、白介素-3的浓度为10-20ng/ml、干细胞因子的浓度为30～70ng/ml、FMS样酪氨酸激酶3配体的浓度为10-150ng/ml、血红蛋白的质量分数为1％～5％和成纤维细胞生长因子的浓度为1-10ng/ml。在本专利技术提供的用于修复卵巢功能的细胞制剂中，所述细胞制剂还包括壳聚糖、青霉素和链霉素。在本专利技术提供的用于修复卵巢功能的细胞制剂中，所述羊膜间充质干细胞的来源过程包括以下步骤：无菌环境下取羊膜，清洗后加入胰酶细胞消化液，水浴处理，离心后弃上清，获得羊膜上皮细胞；用标准培养基重悬羊膜上皮细胞后进行培养，每周换液1～3次；经胰酶细胞消化液消化后清洗并滤干，再次消化，离心并用所述标准培养基重悬细胞后进行培养，每周换液1～3次，当细胞融合度达到70％以上时，进行传代培养。在本专利技术提供的用于修复卵巢功能的细胞制剂中，所述标准培养基为含有5～20％体积分数的FBS和双抗的DMEM培养基。在本专利技术提供的用于修复卵巢功能的细胞制剂中，所述卵巢细胞的来源过程包括以下步骤：取卵巢组织去除红细胞，加入胶原酶消化，吹打至组织块充分溶解，加入培养基A充分混匀，离心弃上清，重悬细胞后过滤，对滤液再次离心弃上清，加入培养基B进行培养，每2～3天换液一次，待细胞融合度至80％以上时，停止传代，弃除培养基，清洗细胞，加入胰酶消化，待细胞变圆变亮后，加入培养基A停止消化，并获得细胞悬液，离心弃上清，重悬细胞后，加入培养基B进行传代培养。在本专利技术提供的用于修复卵巢功能的细胞制剂中，所述培养基A中添加有胎牛血清、青霉素和链霉素。在本专利技术提供的用于修复卵巢功能的细胞制剂中，所述培养基B中添加有血清替代物、非必需氨基酸、谷氨酰胺、β-二硫基乙醇、β-FGF以及青霉素和链霉素。实施本专利技术提供的用于修复卵巢功能的细胞制剂，可以达到以下有益效果：通过采用羊膜间充质干细胞结合卵巢细胞共同制成细胞制剂，以及用于防止羊膜间充质干细胞多向分化和促进羊膜间充质干细胞和卵巢细胞活性和正常生长增殖的辅助性成分，同时，结合卵巢细胞，使得羊膜间充质干细胞能够长期维持其干细胞特性，进而通过其分泌的细胞因子结合卵巢细胞共同作用于卵巢，以达到即时、彻底修复卵巢功能的目的；避免单一细胞制成的细胞制剂中，细胞性质不稳定，造成卵巢功能修复效果不稳定，修复效果差，无法彻底修复卵巢等缺陷。具体实施方式为解决现有技术中采用含有单一细胞的制剂修复卵巢存在修复效果不稳定，无法达到持续性修复等缺陷，本专利技术的创新点在于提供一种含有两种细胞制成的混合细胞制剂，不仅能够提高卵巢修复效率，而且使得修复后的卵巢功能较持久，避免了单一细胞制剂存在的修复不稳定，不彻底等问题，从而实现彻底修复卵巢功能的目的。具体地，本专利技术提供的用于修复卵巢功能的细胞制剂，包括羊膜间充质干细胞和卵巢细胞；且优选地，在细胞制剂中，羊膜间充质干细胞的浓度为(1～5)×105个/ml，卵巢细胞的浓度为(4～8)×105个/ml。其中，羊膜间充质干细胞具有强大的分泌潜能，能够分泌大量的趋化因子、细胞生长与营养类因子、细胞因子受体、血管生成因子、促炎症反应因子以及抗炎症反应因子；这些高分泌的细胞因子间相互作用相互关联，形成复杂的关系网络，其中包括了与卵母细胞发育高度相关的HGF(hepatocytegrowthfactor，肝细胞生长因子)、BDNF(brainderivedneurotrophicfactor,脑源性神经营养因子)、EGF(EpidermalGrowthFactor,表皮细胞生长因子)、IGF-1(insulin-likegrowthfactors-1，促生长因子)等，而高表达的细胞因子在正常情况下参与卵泡的发生及发育成熟调控，如HGF、IGF-1、SCF、BDNF等，能够营养支持卵巢组织抗凋亡、促进细胞增殖和更新；促炎因子IL-6(白介素-6)、IL-8(白介素-8)、TNF-α(TumorNecrosisFactor，肿瘤坏死因子-α)，抑炎因子IL-10(白介素-10)、TNF-β(肿瘤坏死因子-β)、IL-13(白介素-13)、基质金属蛋白酶MMP1及抑制剂可能调控卵巢局部血管再生，改善卵巢血供，从而改善卵巢功能。另外，羊膜间充质干细胞达到卵巢内能够表达FSHR基因，并且FSHR能对FSH产生反应，从而恢复卵泡的成熟发育和类固醇激素的生成途径；除此之外，羊膜间充质干细胞移植后能够通过促进卵泡膜细胞和颗粒细胞增殖、抑制凋亡，从而使雌激素合成增加。而雌激素是卵泡发育所必不可少的，它能够刺激卵泡发育，使原始卵泡发育到成熟卵泡；并且有助于卵巢积储胆固醇，通过对下丘脑的正负反馈调节，控制脑垂体促性腺激素的分泌，从而间接影响卵巢功能。因此，羊膜间充质干本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于修复卵巢功能的细胞制剂，其特征在于，包括羊膜间充质干细胞和卵巢细胞。

【技术特征摘要】
1.一种用于修复卵巢功能的细胞制剂，其特征在于，包括羊膜间充质干
细胞和卵巢细胞。
2.根据权利要求1所述的用于修复卵巢功能的细胞制剂，其特征在于，
所述细胞制剂中，所述羊膜间充质干细胞的浓度为(1～5)×105个/ml，所述
卵巢细胞的浓度为(4～8)×105个/ml。
3.根据权利要求1所述的用于修复卵巢功能的细胞制剂，其特征在于，
所述细胞制剂中还包括肝素钠、白介素-6、白介素-3、干细胞因子、FMS样
酪氨酸激酶3配体、血红蛋白和成纤维细胞生长因子。
4.根据权利要求3所述的用于修复卵巢功能的细胞制剂，其特征在于，
所述细胞制剂中，肝素钠的浓度为15-20ng/ml，白介素-6的浓度为10-20ng/ml、
白介素-3的浓度为10-20ng/ml、干细胞因子的浓度为30～70ng/ml、FMS样酪
氨酸激酶3配体的浓度为10-150ng/ml、血红蛋白的质量分数为1％～5％和成纤
维细胞生长因子的浓度为1-10ng/ml。
5.根据权利要求1或3所述的用于修复卵巢功能的细胞制剂，其特征在
于，所述细胞制剂还包括壳聚糖、青霉素和链霉素。
6.根据权利要求1所述的用于修复卵巢功能的细胞制剂，其特征在于，
所述羊膜间充质干细胞的来源过程包括以下步骤：
无菌环境下取羊膜组织，清洗后加入胰酶细胞消化液，水浴处理，离心<...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾宪卓，鲁菲，
申请(专利权)人：深圳爱生再生医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44